DISCHI PER ANTIBIOGRAMMA CARTUCCIA DA 50 DISCHI Studio di sensibilita agli agenti antimicrobici.
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1 DISCHI PER ANTIBIOGRAMMA CARTUCCIA DA 50 DISCHI Studio di sensibilita agli agenti antimicrobici. 2016/11 1- INTERESSE CLINICO Questi vengono impiegati per valutare in vitro in modo semi-quantitativo la sensibilità agli agenti antimicrobici dei batteri a crescita rapida e di alcune specie esigenti mediante una tecnica di diffusione in mezzo Agar. Tale metodo segue una procedura standardizzata pubblicata dall WHO (1) (2, 3) e adottata come norma consensuale sia dal CLSI CA-SFM (4) sia dal EUCAST (5) (detta procedura viene aggiornata periodicamente). Consultare i documenti più recenti del CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) per le raccomandazioni relative all'esecuzione dell antibiogramma e alla sua interpretazione. 2- PRINCIPIO I di carta impregnati di una determinata concentrazione di agente antimicrobico vengono posizionati sulla superficie di un mezzo adeguato (A) precedentemente inseminato mediante un inoculo calibrato (A) con una coltura pura del batterio da testare. Dopo l incubazione (A), si esaminano le piastre di Petri, si misurano gli aloni di inibizione intorno ai e si confrontano con i valori critici (A) dei diversi agenti antimicrobici testati, al fine di determinare la classificazione clinica (resistente, intermedio, sensibile). Il diametro dell alone di inibizione è proporzionale alla sensibilità del batterio testato. (A) secondo le raccomandazioni in vigore CLSI (2, 3) CA-SFM (4) EUCAST (5). 3- PRESENTAZIONE Si tratta di da 6,5 mm prodotti a partire da carta assorbente di qualità superiore impregnati di agenti antimicrobici in precise concentrazioni. I sono chiaramente identificati da una sigla, formata da 1 a 3 lettere, stampata su ciascun lato del disco (tabella 1). I Bio-Rad sono presentati in cartucce da 50 confezionati in contenitori a tenuta stagna contenenti un disidratante. Tabella 1 : Dischi per antibiogramma CARICA DEL CODICE SIMBOLO CONFEZIONE DISCO PRODOTTO Amikacin AKN Amoxicillin 25 µg AMX Amoxicillin + Clavulanic Acid 2/1 µg 20/10 µg AUG3 AMC Ampicillin 2 µg 10 µg API2 AMP Ampicillin + Sulbactam 10/10 µg SAM Azithromycin 15 µg AZM Aztreonam ATM Bacitracin 10 IU (1) BCT Carbenicillin 100 µg CRB Cefaclor CEC Cefalexin CXN Cefamandole FAM
2 CARICA DEL CODICE SIMBOLO CONFEZIONE DISCO PRODOTTO Cefazolin CZN Cefepime FEP Cefixime 5 µg 10 µg FIX5 CFM Cefoperazone 75 µg CFP75 CPZ Cefoperazone + Sulbactam 75/ SCF Cefotaxime 5 µg COX5 CTX Cefotetan CTT Cefoxitin FOX Cefpirome CPO Cefpodoxime 10 µg CPD Cefprozil CPR Cefsulodin CFS Ceftaroline 5 µg CPN Ceftazidime 10 µg CZD10 CAZ Ceftibuten CTB Ceftriaxone CRO Cefuroxime CXM Cephalothin CEF Chloramphenicol CHL Ciprofloxacin 5 µg CIP Clarithromycin 15 µg CLR Clindamycin 2 µg CMN Colistin 10 µg 50 µg COL10 CST Doripenem 10 µg DOR Doxycycline DOX Ertapenem 10 µg ETP Erythromycine 15 µg ERY Flumequine UBN Fosfomycin 50 µg 200 µg FSF50 FOS Fusidic Acid 10 µg FAD Gentamicin 10 µg 10 IU (15 µg) GMN10 GMI15 GME Gentamicin (high load) 120 µg 500 µg HLG120 GEN Imipenem 10 µg IPM Isepamicin ISP Kanamycin KMN Kanamycin (high load) 1 mg KAN Levofloxacin 5 µg LVX Lincomycin 15 µg LCN Linezolid 10 µg LIN Linezolid LZD Mecillinam 10 µg MEC Meropenem 10 µg MEM Metronidazole 4 µg MTR Mezlocillin 75 µg MZN Minocycline MNO Moxalactam MOX Moxifloxacin 5 µg MXF Mupirocin 5 µg MUP µg PUM Nalidixic Acid NAL Neomycin 30 IU NEO Netilmicin 10 µg NTM10 NET Nitrofurantoin 100 µg NFE Nitrofurantoin 300 µg FTN Nitroxolin 20 µg NIT Norfloxacin 10 µg NXN
3 CARICA DEL CODICE SIMBOLO CONFEZIONE DISCO PRODOTTO 5 µg NOR Ofloxacin 5 µg OFX Oleandomycin 15 µg OLE Oxacillin 1 µg 5 µg OXC1 OXA Oxolinic Acid 10 µg OAD Pefloxacin 5 µg PEF Penicillin 1 IU 6 µg (10 IU) PNG1 PEN Pipemidic Acid 20 µg PIM Piperacillin 75 µg 100 µg PIL30 PIP75 PIR Piperacillin + Tazobactam 30/6 µg 75/10 µg 100/10 µg PTZ36 PPT85 TZP Polymixin 300 IU (50 µg) PXB Pristinamycin 15 µg PTN Quinupristin-Dalfopristin 15 µg QDF Rifampicin 5 µg RIF5 RAM Sparfloxacin 5 µg SPX Spectinomycin 100 µg SPT Spiramycin 100 µg SPN Streptomycin 10 µg SMN Streptomycin (high load) 300 µg 500 µg HLS300 STR Sulphonamides 300 µg 200 µg SSS300 SUL Teicoplanin TEC Telithromycin 15 µg TEL Temocillin TEM Tetracycline TET Ticarcillin 75 µg TIC Ticarcillin + Clavulanic Acid 75/10 µg TCC Tigecycline 15 µg TGC Tobramycin 10 µg TMN10 TOB Trimethoprim + Sulfamethoxazole 1.25/23.75 µg SXT Trimethoprim 5 µg TMP Vancomycin 5 µg VNC5 VAN CONSERVAZIONE La data di scadenza si riferisce esclusivamente ai contenuti nelle cartucce intatte conservate attenendosi alle istruzioni del produttore. La data di scadenza e il numero di lotto sono indicati su ogni confezione (cartuccia e contenitore). Le cartucce contenenti i devono essere conservate nel loro contenitore ad una temperatura compresa tra + 2 e + 8 C in luogo asciutto. Portare i contenitori a temperatura ambiente (18-30 C) prima di aprirli, una volta completato il posizionamento dei, riportare le cartucce inutilizzate a C. Non utilizzare i dopo la data di scadenza. Non utilizzare cartucce di rimaste a temperatura ambiente (18-30 C) per oltre 8 ore, o altrimenti controllare il livello di performance accettabile prima di continuare a utilizzarle (6). Se le cartucce vengono conservate nel distributore una volta depositati i è necessario conservare il distributore stesso a C in luogo asciutto con essiccante all Internao. La stabilità dei dischetti nella cartuccia aperta e posta nel distributore (conservato con essicante secondo le raccomandazioni) è stata validata per 6 settimane in condizioni di routine, ad eccezione dei antibiotici contrassegnati dal simbolo la cui stabilità verrà indicata nelle prossime settimane all'internao del relativo riquadro. 5- MATERIALE NECESSARIO, MA NON FORNITO distributore di : 6-7 Cod Cod mezzi di coltura (secondo le raccomandazioni in vigore (CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) ) reagenti 3
4 ceppi batterici per il controllo di qualità indicatore di opacità equivalente allo standard Mac Farland 0.5 materiale di laboratorio necessario per eseguire gli antibiogrammi mediante tecnica di diffusione in mezzo Agar. 6- PRECAUZIONI PER L USO Seguire le istruzioni di utilizzo indicate nelle raccomandazioni in vigore (CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) ). Rispettare per ciascuna fase le tecniche e le precauzioni in vigore in materia di protezione contro i pericoli microbiologici. Dopo l uso, sterilizzare le colture e tutto il materiale contaminato. 7- MODO OPERATIVO Campioni: i non devono essere utilizzati per test eseguiti direttamente su campioni biologici. Fare riferimento alle raccomandazioni in vigore (CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) ) nelle quali sono precisati i metodi di preparazione dell inoculo a partire da una coltura pura e nuova. Fare riferimento alle istruzioni raccomandate dal CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) per tutte le fasi da seguire per effettuare l antibiogramma e ricavare i risultati: il CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) propongono un metodo standard per la preparazione dell inoculo, la semina sulle piastre di Petri, la scelta e la disposizione dei da sottoporre a test, la temperatura e la durata dell incubazione. Si consiglia di applicare nel contempo le buone pratiche di laboratorio. 8- INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI Misurare con precisione il diametro delle zone di inibizione osservate e fare riferimento ai diametri critici forniti dalle linee guida in vigore (CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) ). Per un dato micro-organismo, viene fornita una classificazione clinica (resistente intermedio, sensibile o non sensibile) in funzione del diametro osservato e dei diametri critici dell antibiotico testato. Detti criteri di classificazione clinica in base ai diametri critici vengono aggiornati periodicamente dal CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5). 9- PRESTAZIONI/CONTROLLO QUALITÀ Le prestazioni dei antibiotici sono controllate sistematicamente servendosi dei seguenti ceppi: - Escherichia coli ATCC Staphylococcus aureus ATCC Pseudomonas aeruginosa ATCC Streptococcus pneumoniae ATCC Neisseria gonorrhoeae ATCC Haemophilus influenzae ATCC Enterococcus faecalis ATCC Clostridium perfringens ATCC Enterococcus faecalis ATCC Clostridium sporogenes ATCC La tabella 2 riassume i limiti accettabili dei diametri di inibizione ottenuti mediante diffusione in mezzo Agar per i ceppi di riferimento di seguito indicati S. aureus P. aeruginosa S. pneumoniae ATCC ATCC ATCC Norma E. coli ATCC Amikacin CLSI Amoxicillin 25 µg Interna Amoxicillin + Clavulanic 20/10 µg CLSI Acid Ampicillin 10 µg CLSI Ampicillin + Sulbactam 10/10 µg CLSI Azithromycin 15 µg CLSI Aztreonam CLSI Bacitracin 10 UI Interna Carbenicilin 100 µg CLSI Cefaclor CLSI Cefalexin Interna Cefamandole CLSI Cefazolin CLSI Cefepime CLSI Cefixime 10 µg Interna Cefixime 5 µg CLSI Cefoperazone Interna Cefoperazone 75 µg CLSI Cefoperazone + Sulbactam 75/ Interna H. influenzae ATCC
5 S. aureus P. aeruginosa S. pneumoniae ATCC ATCC ATCC Norma E. coli ATCC Cefotaxime CLSI Cefotetan CLSI Cefpirome Interna Cefpodoxime 10 µg CLSI Cefprozil CLSI Cefsulodin Interna Ceftazidime CLSI Ceftibuten CLSI Ceftriaxone CLSI Cefuroxime CLSI Cephalothin CLSI Chloramphenicol CLSI Ciprofloxacin 5 µg CLSI Clarithromycin 15 µg CLSI Clindamycin 2 µg CLSI Colistin 10 µg CLSI Colistin 50 µg CA-SFM Doxycycline CLSI Ertapenem 10 µg CLSI Erythromycine 15 µg CLSI Flumequine Interna Fosfomycin 50 µg CA-SFM Fosfomycin 200 µg CLSI Fusidic acid 10 µg CA-SFM Gentamicin 10 µg CLSI Gentamicin 10 UI CA-SFM Imipenem 10 µg CLSI Isepamicin Interna Kanamycin CLSI Levofloxacin 5 µg CLSI Lincomycin 15 µg CA-SFM Linezolid CLSI Mecillinam 10 µg CLSI Meropenem 10 µg CLSI Mezlocillin 75 µg CLSI Minocycline CLSI Moxalactam CLSI Moxifloxacin 5 µg CLSI Mupirocin 5 µg Interna Mupirocin 200 µg CLSI Nalidixic Acid CLSI Neomycin 30 UI Interna Netilmicin CLSI Nitrofurantoin 300 µg CLSI Nitroxolin 20 µg Interna Norfloxacin 5 µg Interna Norfloxacin 10 µg CLSI Ofloxacin 5 µg Interna Oleandomycin 15 µg Interna Oxacillin 5 µg CA-SFM Oxacillin 1 µg CLSI Oxolinic Acid 10 µg Interna Pefloxacin 5 µg CA-SFM Penicillin 6 µg CLSI Pipemidic Acid 20 µg Interna H. influenzae ATCC
6 Norma E. coli S. aureus P. aeruginosa S. pneumoniae H. influenzae ATCC ATCC ATCC ATCC ATCC Piperacillin 100 µg CLSI Piperacillin 75 µg Interna Piperacillin + Tazobactam 75/10 µg Interna Piperacillin + Tazobactam 100/10 µg CLSI Polymixin 300 UI CLSI Pristinamycin 15 µg CA-SFM Quinupristin-Dalfopristin 15 µg CLSI Rifampicin 5 µg CLSI Rifampicin CA-SFM Sparfloxacin 5 µg CLSI Spectinomycin 100 µg Interna Spiramycin 100 µg Interna Streptomycin 10 µg CLSI Sulfonamides 300 µg CLSI Sulfonamides 200 µg Interna Teicoplanin CLSI Telithromycin 15 µg CLSI Temocillin Interna Tetracycline CLSI Ticarcillin 75 µg CLSI Ticarcillin + Clavulanic Acid 75/10 µg CLSI Tigecycline 15 µg CLSI Tobramycin 10 µg CLSI Trimethoprim 5 µg CLSI Trimethoprim + 1,25/23,75 Sulfamethoxazole µg CLSI Vancomycin CLSI Per il controllo qualità (norma Interna, CLSI) : Gentamicin 120 µg : E. faecalis ATCC (16-23 mm) Streptomycin 300 µg : E. faecalis ATCC (14-20 mm) Gentamicin 500 µg : S. aureus ATCC (30-34 mm) ; E. faecalis ATCC (18-28 mm) Kanamycin 1 mg : S. aureus ATCC ( 14 mm) ; E. faecalis ATCC (> 14 mm). Streptomycin 500 µg : S. aureus ATCC (24-28 mm) ; E. faecalis ATCC (14-25 mm). Metronidazole 4µg : Clostridium perfringens ATCC 13124, Clostridium sporogenes ATCC mm Cefoperazone + Sulbactam 75 / : E. coli ATCC (24-30 mm) Mupirocin 200 µg : S. aureus ATCC BAA-1708 (6 mm) Temocillin : E. coli ATCC (22-28 mm) Haemophilus influenzae ATCC è raccomandato come ceppo di controllo di qualità aggiuntivo utile per verificare le proprietà nutrizionali del mezzo HTM. Nonostante non si disponga di criteri di interpretazione affidabili per lo S. pneumoniae con alcuni ß-lattamici, Streptococcus pneumoniae ATCC è il ceppo indicato per il controllo di qualità di tutti i test di antibiogramma per lo Streptococcus spp. Neisseria gonorrhoeae ATCC è raccomandato per i test dei di spectinomicina con un diametro accettabile pari a mm (CLSI). Il deterioramento della carica dei di 1 µg ossacilina si può stabilire nel modo migliore con lo Staphylococcus aureus ATCC con un diametro pari a mm. Seguendo le linee guida EUCAST (versione V3.1, 2013), le prestazioni dei dischetti sono sistematicamente controllate utilizzando i seguenti ceppi: - Escherichia coli ATCC Staphylococcus aureus ATCC Pseudomonas aeruginosa ATCC Streptococcus pneumoniae ATCC Enterococcus faecalis ATCC Haemophilus influenzae NCTC
7 La tabella 3 riassume i limiti accettabili dei diametri di inibizione ottenuti mediante diffusione in mezzo Agar per i ceppi di riferimento di seguito indicati E. coli ATCC S. aureus ATCC P. aeruginosa ATCC S. pneumoniae ATCC H. influenzae NCTC 8468 E. faecalis ATCC Amoxicillin + Clavulanic Acid 2/1 µg Ampicillin 2 µg Cefotaxime 5 µg Cefoxitin Ceftaroline 5 µg Ceftazidime 10 µg Doripenem 10 µg Gentamicin Linezolid 10 µg Netilmicin 10 µg Nitrofurantoin 100 µg Penicillin 1 IU Piperacillin Piperacillin + Tazobactam 30/6 µg Tobramycin Vancomycin 5 µg CONTROLLO QUALITÀ DEL PRODUTTORE Tutti i prodotti fabbricati e commercializzati dalla società Bio-Rad sono sottoposti ad un sistema di assicurazione di qualità dal ricevimento delle materie prime fino alla commercializzazione dei prodotti finiti. Ciascun lotto di prodotto finito è soggetto a un controllo di qualità e viene messo in commercio soltanto se risulta conforme ai criteri di approvazione. La documentazione relativa alla produzione e al controllo di ciascun lotto è conservata presso il produttore. 11- LIMITI DI UTILIZZO Le classificazioni cliniche (resistente, intermedio, sensibile e non sensibile) possono variare soltanto di un millimetro, corrispondente ad un normale margine di errore in laboratorio. Possono altresì essere utilizzati altri agenti anti-microbici oltre a quelli citati nella tabella 2. I test di sensibilità a tali agenti devono essere interpretati basandosi sulla presenza o assenza di una zona di inibizione precisa e devono essere considerati esclusivamente come test qualitativi in attesa che vengano determinate le zone di interpretazione. Rilevare tutti i diametri delle zone di interpretazione. L interpretazione finale, come per tutte le interpretazioni in campo biologico, non può essere stabilita in base al risultato di un solo test, bensì in base ad un insieme di dati clinici e di risultati biochimici, citologici e immunologici. Le performance del test non dipendono solo dall attività dei, ma anche da fattori quali l utilizzo di un inoculo, di ceppi di controllo adeguati, di mezzi di coltura idonei precedentemente testati e di una temperatura di stoccaggio adeguata. 12- BIBLIOGRAFIA 1. World Heath Organization Expert Committee on Biological Standardization Technical report series 822. W.H.O., Geneva. 2. CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute Approved standard M2-A11. Performance standards for antimicrobial susceptibility tests, 10th ed. CLSI, Wayne, Pa. 3. CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI document M100-S23. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing, 21th informational supplement, Wayne, Pa. 4. CA-SFM: Comité de l antibiogramme French Society of Microbiology. 5. EUCAST: European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing. EUCAST QC Tables V V. Loncle-Provot, E. Keller, M.O. Gourdin, M.L. Garrigues. Etude de la stabilité des Dischi antibiotiques dans les conditions d'utilisation en routine, 18th inter disciplinary meeting on anti-infectious chemotherapy, Paris, Dec.3/ Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) Fax : +33 (0) /11 7
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