REGOLAZIONE DELL'ESPRESSIONE GENICA

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1 REGOLAZIONE DELL'ESPRESSIONE GENICA

2 Con ESPRESSIONE GENICA si intende quella serie di eventi che dall'attivazione della trascrizione di un gene, conducono alla produzione della proteina corrispondente. La regolazione di questi processi è molto fine e la sua complessità aumenta salendo la scala evolutiva. Studiare la regolazione dell'espressione di un gene significa accertare in quali tessuti viene espresso, in quali condizioni e qual è l'effetto di tale espressione.

3 Punti di controllo

4 Organizzazione della Cromatina

5 Nucleosomi: Unità Fondamentale nell'organizzazione della Cromatina Eucariotica

6 Organizzazione dei Nucleosomi Otto molecole istoniche formano un ottamero 2 molecole di H2A 2 molecole di H2B 2 molecole di H3 2 molecole di H4 146 bp di DNA arrotolate intorno all'ottamero Istone H1 lega il DNA tra gli ottameri

7 Dal gene alla proteina. Eucarioti vs. Procarioti

8 Come è fatto un gene? Procarioti

9 Come è fatto un gene? Eucarioti

10 Trascrizione Sintesi di una molecola di RNA da uno stampo di DNA, ad opera della RNA polimerasi. Primo livello di controllo si effettua sull'attivazione della RNA polimearsi. Procarioti più semplice di Eucarioti

11 Tipi di RNA Tipo di RNA mrna rrna trna snrna snorna RNA non codificanti Funzione RNA messageri,, codificano per le proteine RNA ribosomali,, formano la struttura base dei ribosomi e catalizzano la sintesi proteica RNA transfer,, sintesi proteica, adattatori fra mrna ed aminoacidi piccoli RNA nucleari, vari processi cellulari, splicing dei pre-mrna piccoli RNA nucleolari, processamento e modifica degli rrna Vari processi cellulari, sintesi dei telomeri, inattivazione X, trasporto proteine in ER

12 Punti di controllo

13 Regolazione nei Procarioti Operone lac Operone triptofano

14 Regolazione negli Eucarioti Promotori ed Enhancers: sequenze specifiche legati da proteine chiamate fattori di trascrizione Promotore regione vicina al sito d'inizio della trascrizione, sequenze specifiche Enhancers possono essere anche molto distanti dal sito d'inizio della trascrizione

15 Regolazione negli Eucarioti 5' e 3' Untranslated Regions

16 Formazione del complesso d'inizio della trascrizione TFII H TFII B

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18 Enhancers La maggior parte dei geni richiede un enhancer per essere attivamente trascritti Enhancers sono i determinanti temporali e spaziali (tessuto-specificità) dell'espressione di un gene Interazione tra fattori di trascrizione legati all'enhancer e fattori di trascrizione legati al promotore determina l'inizio della trascrizione Enhancers sono modulari La distanza degli enhancers dal sito d'inizio della trascrizione permette l'utilizzo di diversi enhancers per un singolo gene, controllo combinatoriale dell'espressione genica

19 Modularità degli Enhancers

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21 Funzionalità dell'enhancer con un gene reporter Enhancer del gene myf-5 (muscolo-specifico) fuso alla β-galattosidasi Topi transgenici ottenuti inserendo il costrutto nel pronucleo di un embrione Allo stadio 13.5 l'embrione è stato colorato per rilevare la β-galattosidasi Il gene reporter è espresso nei muscoli dell'occhio, dell'arto interiore,, del collo e nei miotomi (muscoli della schiena) I fattori di trascrizione che normalmente accendono myf-5 hanno attivato la β-galattosidasi

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23 Fattori di Trascrizione Helix-Turn-Helix Proteine omeodominio Zinc Finger Fattori di Trascrizioni hanno Dominio di legame al DNA Dominio di Attivazione Diverse classi di domini di legame al DNA Facilitano la formazione del complesso di inizio della trascrizione Leucine Zipper Helix-Loop-Helix

24 Attivazione della cromatina

25 Attivazione della cromatina

26 Organizzazione dei geni delle Globine

27 Espressione dei geni delle Globine

28 La metilazione regola l'espressione

29 Punti di controllo

30 Esoni ed Introni Splicing RNA polimerasi trascrive tutta l'informazione (esoni( ed introni) RNA messaggero prodotto tramite maturazione differenziale degli esoni (splicing). mrna vengono esportati nel citolasma per essere tradotti

31 Esoni ed Introni Splicing

32 Meccanismi di Splicing

33 Splicing Alternativo

34 Splicing alternativo della tropomiosina

35 Splicing I siti di splicing devono essere molto precisi Se un introne non viene rimosso si verificano mutazioni frame-shift o inserzioni di aminoacidi Se un esone viene rimosso si verificano frame- shift o delezione di aminoacidi Affinchè la proteina prodotta sia quella attesa, tutti gli introni devono essere rimossi

36 Produzione di una proteina

37 Controllo Post-Trascrizionale

38 Controllo Trascrizionale vs. Post-trascrizionale trascrizionale Controllo a livello della trascrizione Quanto RNA viene prodotto Controllo Post-trascrizionale trascrizionale Quanto "vive" un mrna? Quanto viene tradotto? Dove si localizza nella cellula?

39 Controllo Post-trascrizionale trascrizionale Stabilità dell'rna Inibizione della traduzione di RNA specifici Regola l'efficienza della traduzione Controlla la localizzazione citoplasmatica degli RNA

40 Regolazione della stabilità dell'mrna della caseina

41 mrna mrna Citoplasmatici tradotti alla fecondazione o poco dopo Funzione Organismo Cicline Tubulina Vg1 Istoni Fattori di crescita Bicoid Proteine ribosomali Regolano ciclo cellulare Formazione del fuso mitotico,, cilia e flagelli Determinazione del mesoderma Organnizzazione della cromatina Crescita cellulare (anche uterina) Determina asse antero- posteriore Sintesi proteica Riccio di mare, rana, etc. Topo Rana Riccio di mare, rana Topo Drosophila Rana, Drosophila

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