DISCHI PER ANTIBIOGRAMMA CARTUCCIA DA 50 DISCHI Studio di sensibilita agli agenti antimicrobici.

DISCHI PER ANTIBIOGRAMMA CARTUCCIA DA 50 DISCHI Studio di sensibilita agli agenti antimicrobici. 2016/11 1- INTERESSE CLINICO Questi vengono impiegati per valutare in vitro in modo semi-quantitativo la sensibilità agli agenti antimicrobici dei batteri a crescita rapida e di alcune specie esigenti mediante una tecnica di diffusione in mezzo Agar. Tale metodo segue una procedura standardizzata pubblicata dall WHO (1) (2, 3) e adottata come norma consensuale sia dal CLSI CA-SFM (4) sia dal EUCAST (5) (detta procedura viene aggiornata periodicamente). Consultare i documenti più recenti del CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) per le raccomandazioni relative all'esecuzione dell antibiogramma e alla sua interpretazione. 2- PRINCIPIO I di carta impregnati di una determinata concentrazione di agente antimicrobico vengono posizionati sulla superficie di un mezzo adeguato (A) precedentemente inseminato mediante un inoculo calibrato (A) con una coltura pura del batterio da testare. Dopo l incubazione (A), si esaminano le piastre di Petri, si misurano gli aloni di inibizione intorno ai e si confrontano con i valori critici (A) dei diversi agenti antimicrobici testati, al fine di determinare la classificazione clinica (resistente, intermedio, sensibile). Il diametro dell alone di inibizione è proporzionale alla sensibilità del batterio testato. (A) secondo le raccomandazioni in vigore CLSI (2, 3) CA-SFM (4) EUCAST (5). 3- PRESENTAZIONE Si tratta di da 6,5 mm prodotti a partire da carta assorbente di qualità superiore impregnati di agenti antimicrobici in precise concentrazioni. I sono chiaramente identificati da una sigla, formata da 1 a 3 lettere, stampata su ciascun lato del disco (tabella 1). I Bio-Rad sono presentati in cartucce da 50 confezionati in contenitori a tenuta stagna contenenti un disidratante. Tabella 1 : Dischi per antibiogramma CARICA DEL CODICE SIMBOLO CONFEZIONE DISCO PRODOTTO Amikacin AKN30 66148 Amoxicillin 25 µg AMX25 66138 Amoxicillin + Clavulanic Acid 2/1 µg 20/10 µg AUG3 AMC30 66680 66178 Ampicillin 2 µg 10 µg API2 AMP10 67288 66128 Ampicillin + Sulbactam 10/10 µg SAM20 67018 Azithromycin 15 µg AZM15 67008 Aztreonam ATM30 66928 Bacitracin 10 IU (1) BCT130 66158 Carbenicillin 100 µg CRB100 66198 Cefaclor CEC30 67498 Cefalexin CXN30 66208 Cefamandole FAM30 66238 1

CARICA DEL CODICE SIMBOLO CONFEZIONE DISCO PRODOTTO Cefazolin CZN30 66258 Cefepime FEP30 66098 Cefixime 5 µg 10 µg FIX5 CFM10 67588 66418 Cefoperazone 75 µg CFP75 CPZ30 67618 66298 Cefoperazone + Sulbactam 75/ SCF105 66734 Cefotaxime 5 µg COX5 CTX30 67718 66368 Cefotetan CTT30 66428 Cefoxitin FOX30 66228 Cefpirome CPO30 66468 Cefpodoxime 10 µg CPD10 66918 Cefprozil CPR30 66488 Cefsulodin CFS30 66938 Ceftaroline 5 µg CPN5 68658 Ceftazidime 10 µg CZD10 CAZ30 67298 66308 Ceftibuten CTB30 67638 Ceftriaxone CRO30 66188 Cefuroxime CXM30 66358 Cephalothin CEF30 66218 Chloramphenicol CHL30 66278 Ciprofloxacin 5 µg CIP5 68648 Clarithromycin 15 µg CLR15 67058 Clindamycin 2 µg CMN2 66328 Colistin 10 µg 50 µg COL10 CST50 67268 66348 Doripenem 10 µg DOR10 67348 Doxycycline DOX30 66388 Ertapenem 10 µg ETP10 67518 Erythromycine 15 µg ERY15 66448 Flumequine UBN30 68918 Fosfomycin 50 µg 200 µg FSF50 FOS200 66458 67658 Fusidic Acid 10 µg FAD10 66518 Gentamicin 10 µg 10 IU (15 µg) GMN10 GMI15 GME30 66608 66548 67318 Gentamicin (high load) 120 µg 500 µg HLG120 GEN500 67598 66578 Imipenem 10 µg IPM10 66568 Isepamicin ISP30 66838 Kanamycin KMN30 66618 Kanamycin (high load) 1 mg KAN1 66628 Levofloxacin 5 µg LVX5 66858 Lincomycin 15 µg LCN15 66678 Linezolid 10 µg LIN10 67878 Linezolid LZD30 67388 Mecillinam 10 µg MEC10 66768 Meropenem 10 µg MEM10 67048 Metronidazole 4 µg MTR4 68908 Mezlocillin 75 µg MZN75 66708 Minocycline MNO30 66728 Moxalactam MOX30 66698 Moxifloxacin 5 µg MXF5 67098 Mupirocin 5 µg MUP5 67088 200 µg PUM200 67078 Nalidixic Acid NAL30 68618 Neomycin 30 IU NEO30 66748 Netilmicin 10 µg NTM10 NET30 67798 66758 Nitrofurantoin 100 µg NFE100 67328 Nitrofurantoin 300 µg FTN300 68678 Nitroxolin 20 µg NIT20 68778 Norfloxacin 10 µg NXN10 66338 2

CARICA DEL CODICE SIMBOLO CONFEZIONE DISCO PRODOTTO 5 µg NOR5 68238 Ofloxacin 5 µg OFX5 68938 Oleandomycin 15 µg OLE 66818 Oxacillin 1 µg 5 µg OXC1 OXA5 66888 66848 Oxolinic Acid 10 µg OAD10 68628 Pefloxacin 5 µg PEF5 68228 Penicillin 1 IU 6 µg (10 IU) PNG1 PEN10 67788 67218 Pipemidic Acid 20 µg PIM20 68638 Piperacillin 75 µg 100 µg PIL30 PIP75 PIR100 68478 67258 67228 Piperacillin + Tazobactam 30/6 µg 75/10 µg 100/10 µg PTZ36 PPT85 TZP110 67338 66498 67238 Polymixin 300 IU (50 µg) PXB300 67248 Pristinamycin 15 µg PTN15 67278 Quinupristin-Dalfopristin 15 µg QDF15 67528 Rifampicin 5 µg RIF5 RAM30 66648 67308 Sparfloxacin 5 µg SPX5 66538 Spectinomycin 100 µg SPT100 68798 Spiramycin 100 µg SPN100 67378 Streptomycin 10 µg SMN10 67418 Streptomycin (high load) 300 µg 500 µg HLS300 STR500 67608 67428 Sulphonamides 300 µg 200 µg SSS300 SUL200 67578 68408 Teicoplanin TEC30 68948 Telithromycin 15 µg TEL15 67538 Temocillin TEM30 66068 Tetracycline TET30 67448 Ticarcillin 75 µg TIC75 67458 Ticarcillin + Clavulanic Acid 75/10 µg TCC85 67468 Tigecycline 15 µg TGC15 67398 Tobramycin 10 µg TMN10 TOB30 67488 67358 Trimethoprim + Sulfamethoxazole 1.25/23.75 µg SXT25 68898 Trimethoprim 5 µg TMP5 68888 Vancomycin 5 µg VNC5 VAN30 67828 68928 4- CONSERVAZIONE La data di scadenza si riferisce esclusivamente ai contenuti nelle cartucce intatte conservate attenendosi alle istruzioni del produttore. La data di scadenza e il numero di lotto sono indicati su ogni confezione (cartuccia e contenitore). Le cartucce contenenti i devono essere conservate nel loro contenitore ad una temperatura compresa tra + 2 e + 8 C in luogo asciutto. Portare i contenitori a temperatura ambiente (18-30 C) prima di aprirli, una volta completato il posizionamento dei, riportare le cartucce inutilizzate a +2 - +8 C. Non utilizzare i dopo la data di scadenza. Non utilizzare cartucce di rimaste a temperatura ambiente (18-30 C) per oltre 8 ore, o altrimenti controllare il livello di performance accettabile prima di continuare a utilizzarle (6). Se le cartucce vengono conservate nel distributore una volta depositati i è necessario conservare il distributore stesso a + 2-8 C in luogo asciutto con essiccante all Internao. La stabilità dei dischetti nella cartuccia aperta e posta nel distributore (conservato con essicante secondo le raccomandazioni) è stata validata per 6 settimane in condizioni di routine, ad eccezione dei antibiotici contrassegnati dal simbolo la cui stabilità verrà indicata nelle prossime settimane all'internao del relativo riquadro. 5- MATERIALE NECESSARIO, MA NON FORNITO distributore di : 6-7 Cod 50294 12-16 Cod 50295 mezzi di coltura (secondo le raccomandazioni in vigore (CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) ) reagenti 3

ceppi batterici per il controllo di qualità indicatore di opacità equivalente allo standard Mac Farland 0.5 materiale di laboratorio necessario per eseguire gli antibiogrammi mediante tecnica di diffusione in mezzo Agar. 6- PRECAUZIONI PER L USO Seguire le istruzioni di utilizzo indicate nelle raccomandazioni in vigore (CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) ). Rispettare per ciascuna fase le tecniche e le precauzioni in vigore in materia di protezione contro i pericoli microbiologici. Dopo l uso, sterilizzare le colture e tutto il materiale contaminato. 7- MODO OPERATIVO Campioni: i non devono essere utilizzati per test eseguiti direttamente su campioni biologici. Fare riferimento alle raccomandazioni in vigore (CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) ) nelle quali sono precisati i metodi di preparazione dell inoculo a partire da una coltura pura e nuova. Fare riferimento alle istruzioni raccomandate dal CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) per tutte le fasi da seguire per effettuare l antibiogramma e ricavare i risultati: il CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) propongono un metodo standard per la preparazione dell inoculo, la semina sulle piastre di Petri, la scelta e la disposizione dei da sottoporre a test, la temperatura e la durata dell incubazione. Si consiglia di applicare nel contempo le buone pratiche di laboratorio. 8- INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI Misurare con precisione il diametro delle zone di inibizione osservate e fare riferimento ai diametri critici forniti dalle linee guida in vigore (CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) ). Per un dato micro-organismo, viene fornita una classificazione clinica (resistente intermedio, sensibile o non sensibile) in funzione del diametro osservato e dei diametri critici dell antibiotico testato. Detti criteri di classificazione clinica in base ai diametri critici vengono aggiornati periodicamente dal CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5). 9- PRESTAZIONI/CONTROLLO QUALITÀ Le prestazioni dei antibiotici sono controllate sistematicamente servendosi dei seguenti ceppi: - Escherichia coli ATCC 25922 - Staphylococcus aureus ATCC 25923 - Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 - Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 - Haemophilus influenzae ATCC 49247 - Enterococcus faecalis ATCC 33186 - Clostridium perfringens ATCC 13124 - Enterococcus faecalis ATCC 29212 - Clostridium sporogenes ATCC 19404 La tabella 2 riassume i limiti accettabili dei diametri di inibizione ottenuti mediante diffusione in mezzo Agar per i ceppi di riferimento di seguito indicati S. aureus P. aeruginosa S. pneumoniae ATCC 25923 ATCC 27853 ATCC 49619 Norma E. coli ATCC 25922 Amikacin CLSI 19-26 20-26 18-26 Amoxicillin 25 µg Interna 19-25 Amoxicillin + Clavulanic 20/10 µg CLSI 18-24 28-36 Acid Ampicillin 10 µg CLSI 16-22 27-35 Ampicillin + Sulbactam 10/10 µg CLSI 19-24 29-37 Azithromycin 15 µg CLSI 21-26 Aztreonam CLSI 28-36 23-29 Bacitracin 10 UI Interna 17-22 Carbenicilin 100 µg CLSI 23-29 18-24 Cefaclor CLSI 23-27 27-31 Cefalexin Interna 15-21 22-28 Cefamandole CLSI 26-32 26-34 Cefazolin CLSI 21-27 29-35 Cefepime CLSI 31-37 23-29 24-30 Cefixime 10 µg Interna 26-30 Cefixime 5 µg CLSI 23-27 Cefoperazone Interna 26-30 23-28 21-25 Cefoperazone 75 µg CLSI 28-34 24-33 23-29 Cefoperazone + Sulbactam 75/ Interna 27-33 23-30 H. influenzae ATCC 49247 4

S. aureus P. aeruginosa S. pneumoniae ATCC 25923 ATCC 27853 ATCC 49619 Norma E. coli ATCC 25922 Cefotaxime CLSI 29-35 25-31 18-22 Cefotetan CLSI 28-34 17-23 Cefpirome Interna 29-35 26-32 23-29 Cefpodoxime 10 µg CLSI 23-28 19-25 Cefprozil CLSI 21-27 27-33 Cefsulodin Interna 20-28 25-32 Ceftazidime CLSI 25-32 16-20 22-29 Ceftibuten CLSI 27-35 Ceftriaxone CLSI 29-35 22-28 17-23 Cefuroxime CLSI 20-26 27-35 Cephalothin CLSI 15-21 29-37 Chloramphenicol CLSI 21-27 19-26 Ciprofloxacin 5 µg CLSI 30-40 22-30 25-33 Clarithromycin 15 µg CLSI 26-32 Clindamycin 2 µg CLSI 24-30 Colistin 10 µg CLSI 11-17 11-17 Colistin 50 µg CA-SFM 17-22 Doxycycline CLSI 18-24 23-29 Ertapenem 10 µg CLSI 29-36 13-21 Erythromycine 15 µg CLSI 22-30 Flumequine Interna 25-31 Fosfomycin 50 µg CA-SFM 24-35 Fosfomycin 200 µg CLSI 22-30 25-33 Fusidic acid 10 µg CA-SFM 29-34 Gentamicin 10 µg CLSI 19-26 19-27 17-23 Gentamicin 10 UI CA-SFM 22-26 24-28 16-22 Imipenem 10 µg CLSI 26-32 20-28 Isepamicin Interna 21-26 17-23 16-23 Kanamycin CLSI 17-25 19-26 Levofloxacin 5 µg CLSI 29-37 25-30 19-26 Lincomycin 15 µg CA-SFM 25-29 Linezolid CLSI 25-32 Mecillinam 10 µg CLSI 24-30 Meropenem 10 µg CLSI 28-34 29-37 27-33 Mezlocillin 75 µg CLSI 23-29 19-25 Minocycline CLSI 19-25 25-30 Moxalactam CLSI 28-35 18-24 17-25 Moxifloxacin 5 µg CLSI 28-35 28-35 17-25 Mupirocin 5 µg Interna 18-26 Mupirocin 200 µg CLSI 29-38 Nalidixic Acid CLSI 22-28 Neomycin 30 UI Interna 17-23 18-27 Netilmicin CLSI 22-30 22-31 17-23 Nitrofurantoin 300 µg CLSI 20-25 18-22 Nitroxolin 20 µg Interna 15-22 Norfloxacin 5 µg Interna 26-33 13-23 20-27 Norfloxacin 10 µg CLSI 28-35 17-28 22-29 Ofloxacin 5 µg Interna 25-32 21-28 14-20 Oleandomycin 15 µg Interna 19-28 Oxacillin 5 µg CA-SFM 27-34 Oxacillin 1 µg CLSI 18-24 Oxolinic Acid 10 µg Interna 22-30 Pefloxacin 5 µg CA-SFM 29-35 26-29 Penicillin 6 µg CLSI 26-37 Pipemidic Acid 20 µg Interna 22-30 H. influenzae ATCC 49247 5

Norma E. coli S. aureus P. aeruginosa S. pneumoniae H. influenzae ATCC 25922 ATCC 25923 ATCC 27853 ATCC 49619 ATCC 49247 Piperacillin 100 µg CLSI 24-30 25-33 Piperacillin 75 µg Interna 24-33 Piperacillin + Tazobactam 75/10 µg Interna 22-29 24-31 24-33 Piperacillin + Tazobactam 100/10 µg CLSI 24-30 27-36 25-33 Polymixin 300 UI CLSI 13-19 Pristinamycin 15 µg CA-SFM 27-32 Quinupristin-Dalfopristin 15 µg CLSI 21-28 19-24 15-21 Rifampicin 5 µg CLSI 26-34 Rifampicin CA-SFM 34-39 Sparfloxacin 5 µg CLSI 30-38 27-33 21-29 Spectinomycin 100 µg Interna 19-25 Spiramycin 100 µg Interna 18-26 Streptomycin 10 µg CLSI 12-20 14-22 Sulfonamides 300 µg CLSI 24-34 Sulfonamides 200 µg Interna 17-27 Teicoplanin CLSI 15-21 Telithromycin 15 µg CLSI 27-33 17-23 Temocillin Interna 17-23 Tetracycline CLSI 18-25 24-30 Ticarcillin 75 µg CLSI 24-30 21-27 Ticarcillin + Clavulanic Acid 75/10 µg CLSI 24-30 29-37 20-28 Tigecycline 15 µg CLSI 20-27 20-25 23-29 Tobramycin 10 µg CLSI 18-26 19-29 20-26 Trimethoprim 5 µg CLSI 21-28 19-26 Trimethoprim + 1,25/23,75 Sulfamethoxazole µg CLSI 23-29 24-32 Vancomycin CLSI 17-21 Per il controllo qualità (norma Interna, CLSI) : Gentamicin 120 µg : E. faecalis ATCC 29212 (16-23 mm) Streptomycin 300 µg : E. faecalis ATCC 29212 (14-20 mm) Gentamicin 500 µg : S. aureus ATCC 25923 (30-34 mm) ; E. faecalis ATCC 29212 (18-28 mm) Kanamycin 1 mg : S. aureus ATCC 25923 ( 14 mm) ; E. faecalis ATCC 29212 (> 14 mm). Streptomycin 500 µg : S. aureus ATCC 25923 (24-28 mm) ; E. faecalis ATCC 29212 (14-25 mm). Metronidazole 4µg : Clostridium perfringens ATCC 13124, Clostridium sporogenes ATCC 19404 15 mm Cefoperazone + Sulbactam 75 / : E. coli ATCC 35218 (24-30 mm) Mupirocin 200 µg : S. aureus ATCC BAA-1708 (6 mm) Temocillin : E. coli ATCC 35218 (22-28 mm) Haemophilus influenzae ATCC 10211 è raccomandato come ceppo di controllo di qualità aggiuntivo utile per verificare le proprietà nutrizionali del mezzo HTM. Nonostante non si disponga di criteri di interpretazione affidabili per lo S. pneumoniae con alcuni ß-lattamici, Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 è il ceppo indicato per il controllo di qualità di tutti i test di antibiogramma per lo Streptococcus spp. Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 è raccomandato per i test dei di spectinomicina con un diametro accettabile pari a 23-29 mm (CLSI). Il deterioramento della carica dei di 1 µg ossacilina si può stabilire nel modo migliore con lo Staphylococcus aureus ATCC 25923 con un diametro pari a 18 24 mm. Seguendo le linee guida EUCAST (versione V3.1, 2013), le prestazioni dei dischetti sono sistematicamente controllate utilizzando i seguenti ceppi: - Escherichia coli ATCC 25922 - Staphylococcus aureus ATCC 29213 - Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 - Enterococcus faecalis ATCC 29212 - Haemophilus influenzae NCTC 8468 6

La tabella 3 riassume i limiti accettabili dei diametri di inibizione ottenuti mediante diffusione in mezzo Agar per i ceppi di riferimento di seguito indicati E. coli ATCC 25922 S. aureus ATCC 29213 P. aeruginosa ATCC 27853 S. pneumoniae ATCC 49619 H. influenzae NCTC 8468 E. faecalis ATCC 29212 Amoxicillin + Clavulanic Acid 2/1 µg 17-23 Ampicillin 2 µg 19-25 15-21 Cefotaxime 5 µg 25-31 29-35 Cefoxitin 23-29 24-30 Ceftaroline 5 µg 24-30 24-30 Ceftazidime 10 µg 23-29 21-27 Doripenem 10 µg 27-35 28-35 31-37 Gentamicin 12-18 Linezolid 10 µg 21-27 23-29 19-25 Netilmicin 10 µg 18-24 20-26 15-21 Nitrofurantoin 100 µg 17-23 18-24 Penicillin 1 IU 12-18 Piperacillin 21-27 Piperacillin + Tazobactam 30/6 µg 23-29 20-26 Tobramycin 12-18 Vancomycin 5 µg 17-23 10-16 10- CONTROLLO QUALITÀ DEL PRODUTTORE Tutti i prodotti fabbricati e commercializzati dalla società Bio-Rad sono sottoposti ad un sistema di assicurazione di qualità dal ricevimento delle materie prime fino alla commercializzazione dei prodotti finiti. Ciascun lotto di prodotto finito è soggetto a un controllo di qualità e viene messo in commercio soltanto se risulta conforme ai criteri di approvazione. La documentazione relativa alla produzione e al controllo di ciascun lotto è conservata presso il produttore. 11- LIMITI DI UTILIZZO Le classificazioni cliniche (resistente, intermedio, sensibile e non sensibile) possono variare soltanto di un millimetro, corrispondente ad un normale margine di errore in laboratorio. Possono altresì essere utilizzati altri agenti anti-microbici oltre a quelli citati nella tabella 2. I test di sensibilità a tali agenti devono essere interpretati basandosi sulla presenza o assenza di una zona di inibizione precisa e devono essere considerati esclusivamente come test qualitativi in attesa che vengano determinate le zone di interpretazione. Rilevare tutti i diametri delle zone di interpretazione. L interpretazione finale, come per tutte le interpretazioni in campo biologico, non può essere stabilita in base al risultato di un solo test, bensì in base ad un insieme di dati clinici e di risultati biochimici, citologici e immunologici. Le performance del test non dipendono solo dall attività dei, ma anche da fattori quali l utilizzo di un inoculo, di ceppi di controllo adeguati, di mezzi di coltura idonei precedentemente testati e di una temperatura di stoccaggio adeguata. 12- BIBLIOGRAFIA 1. World Heath Organization Expert Committee on Biological Standardization. 1992. Technical report series 822. W.H.O., Geneva. 2. CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute. 2012. Approved standard M2-A11. Performance standards for antimicrobial susceptibility tests, 10th ed. CLSI, Wayne, Pa. 3. CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute. 2013. CLSI document M100-S23. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing, 21th informational supplement, Wayne, Pa. 4. CA-SFM: Comité de l antibiogramme. 2013. French Society of Microbiology. 5. EUCAST: European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing. EUCAST QC Tables V3.1. 2013. 6. V. Loncle-Provot, E. Keller, M.O. Gourdin, M.L. Garrigues. Etude de la stabilité des Dischi antibiotiques dans les conditions d'utilisation en routine, 18th inter disciplinary meeting on anti-infectious chemotherapy, Paris, Dec.3/4 1998. Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33 2016/11 www.bio-rad.com 7