Utilizzo degli elastomeri e degli swab buccali nelle pratiche di identificazione e nelle ricerche genetiche in fauna ittica, nel rispetto del welfare

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1 IZSTO Istituto Zooprofilattico Sperimentale del Piemonte, Liguria e Valle d Aosta Utilizzo degli elastomeri e degli swab buccali nelle pratiche di identificazione e nelle ricerche genetiche in fauna ittica, nel rispetto del welfare A cura di Foglini Claudio III corso di aggiornamento su tematiche relative agli organismi acquatici -Torino, 18/12/15

2 Problematica affrontata Necessità di: 1.Associazione univoca genotipo fenotipo (DNA-individuo) su un consistente numero di animali; 2.Possibilità di recupero del genotipo ricercato in un gruppo di animali senza dimorfismo evidente.

3 Perché marcare gli individui? Identificazione individuale per studi inerenti: Dinamiche di popolazione; Dinamiche di dispersione e/o migrazione; Etologia ed ecologia comportamentale; Genetica di popolazione. Antibracconaggio anticontrabbando.

4 La marcatura ideale Per il ricercatore Economica Pratica Visibile a distanza Elevato numero di combinazioni Di facile lettura Persistente Per il benessere animale Non alterare sviluppo, crescita, mortalità, ecologia ed etologia Poco invasiva Tag ben tollerato Rilascio del tag?

5 Marcatura degli animali acquatici

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7 PIT tag Streamer tag Data-logger Sat/GPS/Acustici

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9 Animali naturalmente marcati

10 Problematiche nei pesci Anelli mandibolari e branchiali: invasivi, ostacolano la nutrizione; Etichette: alterano nuoto e comportamento; Fascette: alterano nuoto e comportamento, stimolano predazione; PIT: costosi, recupero impossibile (salvo pesce); E necessario ricatturare l individuo per la lettura dei dati. Data-logger: estremamente costosi, autonomia limitata. Utilizzabili in piccoli numeri.

11 Visible Implants Elastomer (VIE) Materiale polimerico biocompatibile, bicomponente ed iniettabile sottocute; Colori ad alta visibilità ed UV-fluorescenti;

12 PRO Applicabile ad anfibi, pesci, crostacei, molluschi e altri piccoli animali; Minimo impatto su sopravvivenza, crescita e comportamento degli individui marcati; Pratico da gestire, applicazione veloce, costi contenuti; CONTRO Numero di individui limitato dai colori disponibili, dalle posizioni utilizzabili, dal n di tag desiderati; Poco individuabile se usato su tessuti scuri o a veloce accrescimento/rigenerazione; L osservatore casuale può non individuare il tag; Alto tasso di permanenza; Visibile in luce ambiente anche a distanza ;

13 Il kit Polimero colorato (VIE); Componente indurente; Siringhe per miscelazione; Accessori per miscelazione; Siringhe per iniezione; Torcia U.V. Colori di riferimento;

14 Protocollo di marcatura Sul solo sul lato sx combinazioni: -1 sola regione corporea; -1 regione corporea + 1 tag aggiuntivo;

15 Swab boccale in etanolo (99%) Mantenimento dell'equilibrio cellulare fino a 96 ore dal prelievo; Nessuna controindicazione per quanto riguarda le interferenze dell'etoh in PCR; DNA di buona qualità (estrazione fatta a 72 ore dal prelievo); Utilizzo e conservazione dei campioni a freddo (4 C) (a T ambiente EtoH è tossico per le cellule);

16 Il metodo su campo Cattura degli animali

17 Marcatura degli animali con VIE

18 Swab boccale e stoccaggio dei campioni biologici

19 Recupero e riconoscimento degli individui

20 Risultati - VIE Colori più visibili: rosso, arancione, giallo. Blu: poco visibile nei tessuti pigmentati; in tessuti bianchi o trasparenti è comunque meno visibile dei colori precedenti. L UV aiuta. 0,1 ml di VIE: 40 pesci marcati con tag multipli. Una dose di VIE miscelati e pronti all uso è stata utilizzata anche per 5h* (conservandola al fresco tra due piastre eutettiche) Possibilità di lettura a distanza (confinando il pesce o dopo blanda sedazione).

21 Risultati - Swabs Prelievo indolore di materiale genetico; Stress minimo, velocità di esecuzione; Associazione univoca del genotipo all individuo; Recupero di un individuo senza separare i singoli animali; Stoccaggio su campo dei campioni di DNA per un periodo di tempo consono; Analisi dei campioni genetici differibile (max 96 ore)

22 Criticità riscontrate Difficoltà di preparazione di una quantità ridotta di VIE per piccoli lotti di animali. Regolazione della dose di anestetico per immobilizzare il pesce durante la marcatura. Ago sottile, difficile da sostituire durante le operazioni di marcatura (problema dato dal tipo di siringa). La marcatura dietro l occhio è visibile ma richiede cautela nell attuarla ed è di interpretazione difficoltosa.

23 Costi approssimativi* TIPO di TAG Costo di 1 tag Stream tag 2,00 $ PIT tag 2,00 $ VI Alpha tag 0,75 $ Gill tag 0,60 $ CWT tag 0,09 $ VIE tag 0,04 $ *Costi indicativi ottenuti da una ricerca internet sui principali siti trattanti materiale per zootecnia, acquacoltura, pesca

24 Grazie per l attenzione claudio.foglini@izsto.it