Malattie trasmesse da vettori: ricerca dei patogeni nelle zecche

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1 Malattie trasmesse da vettori: ricerca dei patogeni nelle zecche XXI Corso Nazionale in Tecniche di Laboratorio Biomedico Riccione, maggio 2014 Maria D. Pintore MVD-PhD

2 Malattie trasmesse da zecche: sviluppo e applicazione di metodi epidemiologici e diagnostici IZSPLVA: Cristina Casalone - Torino Maria Lucia Mandola - Torino Pier Luigi Acutis Torino Simone Peletto - Torino Mignone Walter - Imperia Riccardo Orusa - Aosta Universita Med. Veterinaria Torino Alessandro Mannelli IZS della Sicilia: Alessandra Torina IZS delle Venezie: Gioia Capelli

3 Obiettivi Creare uno strumento di sorveglianza e prevenzione delle zoonosi trasmesse da zecche per limitare od impedire la trasmissione all uomo; Identificare aree a rischio; Valutare prevalenza delle infezioni nelle zecche e nei vertebrati potenziali serbatoi; Valutare l'effetto di fattori ambientali; Mettere a punto un metodo di studio che potrà essere applicato ad un territorio più vasto;

4 Phylum: Arthropoda Subphylum: Chelicerata Classe: Arachnida Ordine: Acarina Sottordine: Metastigmata Famiglie: Ixodidae Argasidae

5 Ixodidae Ciclo: - a tre ospiti (6 mesi-anni) - a due ospiti (larva e ninfa sullo stesso individuo) - ad un ospite (Boophilus sp.; ~3 settimane sull ospite e 2 mesi per deposizione uova e svil. larve) -esofile (ambiente urbano o silvestre) - ricerca dell ospite passiva o attiva Alimentazione: - Larve: 3-5 giorni, - Ninfe: 4-8 giorni, - Femmine adulte: 5-20 giorni - Maschi: si nutrono per permettere la maturazione degli org. riproduttivi Riproduzione: - si accoppia una sola volta sull ospite (raro sulla vegetazione) e depone da 2000 a uova

6 Argasidae Ciclo: - più ospiti - numero variabile di stadi ninfali - endofile (lontano dall ospite) Alimentazione: -più pasti di sangue molto brevi e nelle ore notturne -non producono cemento Riproduzione -femmine si accoppiano e depongono le uova più volte ( )

7 Zecche come vettori di malattie ZECCHE MOLLI Argas reflexus zecca dei piccioni Reazioni allergiche e shock anafilattico -Potenzialità riproduttiva -Assenza predatori nelle città -Disponibilità di cibo e siti per la nidificazione

8 Zecche come vettori di malattie ZECCHE DURE Gen. Rhipicephalus Gen. Dermacentor Gen. Ixodes Gen. Haemaphysalis

9 Zecche come vettori di malattie ZECCHE DURE Gen. Rhipicephalus Babesia ovis Babesia canis Babesia equi Babesia bovis Anaplasma marginale (bovino) Coxiella burnetii Rickettsia conorii (MSFG) Hepatozoon canis Ehrlichia ewingi Ehrlichia chaffeensis Ehrlichia canis Dipetalonema grassii Dipetalonema reconditum

10 Zecche come vettori di malattie Gen. Haemaphysalis ZECCHE DURE Babesia major Babesia motasi Anaplasma ovis Theileria mutans Theileria ovis Theileria sergenti Theileria recondita Brucella bovis Brucella melitensis Francisella tularensis Listeria monocitogenes Rickettsia sibirica Rickettsia slovaca Coxiella burnetii Anaplasma ovis TBE virus Bhanja virus

11 Zecche come vettori di malattie ZECCHE DURE Gen. Dermacentor Babaseia caballi Babesia equi Babesia canis Rickettsia sibirica Rickettsia rickettsii Rickettsia conorii Rickettsia slovaca Coxiella burnetii Francisella tularensis Anaplasma ovis

12 Zecche come vettori di malattie ZECCHE DURE Gen. Ixodes Babesia divergens (bovino) Babesia microti Theileria microti Borrelia burgdorferi s.l. Anaplasma phagocytophilum Rickettsia helvetica Rickettsia monacensis (MSFG) Francisella tularensis (Tularemia) Coxiella burnetii (Febbre Q) TBE virus

13 Zecche come vettori di malattie ZECCHE DURE Zoonosi trasmesse da zecche Malattia di Lyme (Borrelia burgdorferi) Febbre Bottonosa del Mediterraneo (Rickettsia conorii) Anaplasmosi granulocitica (Anaplasma Phagocitophilum) Tick Borne Encephalitis (Flavivirus)

14 Zecche come vettori di malattie ZECCHE DURE Malattia di Lyme Ixodes ricinus Eziologia: Genere Borrelia Specie Borrelia burgdorferi s.l.: -Borrelia burgdorferi sensu strictu -Borrelia garinii -Borrelia afzelii

15 Sintomi Incubazione: 3-32 gg Febbre Artrite Sintomi cutanei Sintomi cardiaci Sintomi neurologici Eritema cronico migrante Fase 1 Fase 2 Stadio 1: infezione localizzata Stadio 2: infezione disseminata Stadio 3: infezione persistente Acrodermatite cronica atrofizzante

16 Eziologia: Genere Rickettsia Specie Rickettia conorii Febbre Bottonosa del Mediterraneo Ospiti reservoirs Ospiti occasionali Ixodes ricinus Riphicephalus sanguineus

17 Sintomi Incubazione 5-7 gg Danno diretto o indiretto (tossina) su vasi e piastrine Febbre Cefalea Linfoadenopatia Artro-mioalgie Vomito Esantema cutanea Epato-splenomegalia Insufficienza renale Anemia grave CID Sintomi neurologici vasculiti, trombi ed emorragie Cane: Rickettsiosi tache noire

18 Eziologia Genere Anaplasma Specie Anaplasma phagocytophilum -E. phagocitophila, -E. Equi -agente dell ehrlichiosi granulocitica umana HGE Anaplasmosi granulocitica Dermacentor marginatus Ixodes ricinus

19 Sintomi Incubazione: 7 gg febbre ( 40 C), cefalea, malessere generale, vomito, dolori addominali e diarrea. Rash cutaneo (10-50%), poliartrite, mialgia, leucopenia trombocitopenia morule Rare le complicazioni renali, respiratorie e neurologiche

20 Eziologia Famiglia Flaviviridae genere Flavivirus (RNA) Tick Borne Encephalitis Ospiti reservoir Ixodes ricinus

21 Trasmissione Incubazione 2-28 gg Sintomi Febbre Linfoadenopatia Cefalea Meningoencefalite (30-40%)

22 Area di studio Aumento segnalazioni morsi di zecche Dal casi umani Borreliosi di Lyme

23 Dragging Superficie: 100m² 1 volta al mese Scheda caratterizzazione vegetazione Scheda Dragging

24 SCHEDA DI CARATTERIZZAZIONE DELLA VEGETAZIONE - LIGURIA ID Sito: Data: Operatore: Località: UTM: / Esposizione: Altitudine GPS: m Inclinazione: Formazione vegetale: Bosco - Prato - Arbusti Foto N : Densità di: Alberi: alta - media - bassa - nulla Arbusti: alta - media - bassa - nulla Erbe: alta - media - bassa - nulla Felci: alta - media - bassa - nulla Muschio: alta - media - bassa - nulla Funghi: alta - media - bassa - nulla Specie dominante: Copertura: Altezza media ca.: m Foglie: molte - poche - nulla Altre: gemme - fiori - frutti - nulla Specie secondarie: - Copertura: Altezza media ca.: m - Copertura: Altezza media ca.: m - Copertura: Altezza media ca.: m Presenza di foglie: Note: Alberi decidui: molte - poche - nulla Arbusti: molte - poche - nulla Suolo: cuscino - molte - poche - nulla.... ID Sito: Data: Operatore: Località: UTM: / Esposizione: Altitudine GPS: m Inclinazione: Formazione vegetale: Bosco - Prato - Arbusti Foto N : Densità di: Alberi: alta - media - bassa - nulla Arbusti: alta - media - bassa - nulla Erbe: alta - media - bassa - nulla Felci: alta - media - bassa - nulla Muschio: alta - media - bassa - nulla Funghi: alta - media - bassa - nulla Specie dominante: Copertura: Altezza media ca.: m Foglie: molte - poche - nulla Altre: gemme - fiori - frutti - nulla Specie secondarie: - Copertura: Altezza media ca.: m - Copertura: Altezza media ca.: m - Copertura: Altezza media ca.: m Presenza di foglie: Note: Alberi decidui: molte - poche - nulla Arbusti: molte - poche - nulla Suolo: cuscino - molte - poche - nulla.... INCLINAZIONE: 0 piano (0 ); 1 poca (<45 ); 2 media ( 45 ); 3 molta ( 60 ) COPERTURA AL SUOLO. SCALA DI BRAUN-BLANQUET: 5 copertura >75%; 4 copertura 50-75%; 3 copertura 25-50%; 2 abbondante ma con copertura <25%; 1 ben rappresentata ma con copertura <5%; + presente ma con copertura scarsa

25 SCHEDA DRAGGING Operatore: Data: Sessione: Meteo generale: Sul Campo ID sito Ora Temp Umid % Umid % Suolo Fondo Tracce Larve Ninfe Adulti Meteo Note:

26 - 20 C Alcool 70%

27 Verbano-Cusio-Ossola siti Cannobio 3 Crodo 4 Calasca-Castiglione 6 Varzo 4 Cavandone 3 Beura-Cardezza 4

28 Crodo Varzo M. Giove Beura-Cardezza Calasca-Castiglione Cavandone

29 altitudine Verbano-Cusio-Ossola Altitudine compresa tra m s.l.m. distribuzione per altitudine Cannobio Calasca-Castiglione Varzo Crodo 0 siti Beura-Cardezza Cavandone

30 Verbano-Cusio-Ossola Zecche da animali 4 Camosci 8 Caprioli 24 Cervi

31 Dragging: 3192 zecche Animali: 105 zecche 2011: 1662 zecche (1249 larve, 407 ninfe e 6 adulti) Densità: zecche/100m² 2012: 1530 zecche (1245 larve, 274 ninfe e 11 adulti) I. ricinus Densità: zecche/100m²

32 n of ticks n of ticks Questing ticks Dragging m m m m m April May June altitude July August September

33 Reported occurrence of Ixodes ricinus EFSA Journal 2010; 8(9):1723

34 429 zecche 25 animali: tutte negative 404 dragging: 61 zecche + 63 patogeni Analisi molecolari 13 B. lusitaniae 14 B. afzelii 58.7% (37) 5 B. garinii Borrelia burgdorferi s.l. 2 B. valaisiana 3 B. spp 11 35% R. helvetica (22) 11 Rickettsia R. monacensis spp. NO TBE 6.3% (4) A. phagocytophilum Anaplasma Spp.

35 n zecche Analisi molecolari zecche positive Calasca Cannobio Varzo Cavandone Crodo Cardezza Anaplasma spp. Rickettsia spp. Borrelia spp. comune

36 Comune (campione) Borrelia N + Prevalenza % Rickettsia N + Prevalenza% Anaplasma N + Prevalenza % ToT Prevalenza % Calasca (137) ( ) ( ) ( ) ( ) Cannobio (100) ( ) ( ) ( ) ( ) Varzo (90) ( ) ( ) ( ) Cavandone (8) ( ) ( ) Crodo (43) ( ) ( ) ( ) Cardezza (26)

37 VCO B. Burgdorferi s.l. B. lusitaniae B. valaisiana B. garinii B. afzelii????

38 Esame filogenetico OspA e OspB Persistenza nel vettore OspC Invasivita

39 B. afz. AB B. afz. L42883 H B. afz. X62162 H B. afz. X73624 H B. afz. AB H B. afz. X84766 H Inv. B. afz. X84776 H Inv. B. afz. X84771 H Inv. B. afz. 366 A B. afz. 570 B. afz. 578 B. afz B. afz. 579 B. afz B. afz. X81521 H Inv. B. afz. X84767 H B. afz. AB B. afz. D B. afz. L B. afz. AB B.afz.AY H Inv. B. afz. 225 A7 B. afz. AB H 100 B. afz. 222 B. afz. AB B. afz. AY H Inv. B. afz. 429 B. afz. AB H B. afz. X81523 H A6 78 B. afz. L42888 H B. afz. AY H Inv. B. afz. 361 B. afz. L42874 H B. afz. AY H Inv. A5 B. afz. D B. afz. AB B. afz. AB H Inv. B. afz. AB H B. afz. X84777 H Inv. A B. afz. L42892 H Inv. B. afz. AY H Inv. B. afz. L42873 H B.afz. AY H Inv. B. afz. L42890 H B. afz. D49379 A4 A3 99 B. afz. AB B. afz. D B. afz. AB B. afz. AB H 98 B. afz. X84769 H 66 B. afz. AB H 81 B. afz. X83552 H B. afz. AB H B. afz B. afz. AB B. afz. AF B. afz. AY H.Inv. A

40 B. gar. 355 B. gar. 493 B. gar. L42891 B. gar. AY H Inv. B. gar. AY H Inv. B. gar. AY H Inv. B. gar. AY H Inv. B. gar. X69592 B. gar. 580 B. gar. L42863 G5 G10 99 B. gar. 389 B. gar. D B. gar. D B. gar. D49499 B. gar. D49507 B. gar. D49508 H B. gar. AB B. gar. D49380 B. gar. D49506 H B. gar. AY H Inv. B. gar. L42886 G6 B. gar. L B. gar. L42882 B. gar. X69593 B. gar. AY H Inv. B. gar. D49504 B. gar. X81526 H B. gar. L42869 H Inv. B. gar. X83553 H Inv. B. gar. X84772 H B. gar. X73623 H B. gar. X84770 H G2 58 B. gar. D49378 B. gar. L B. gar. D49505 H B. gar. AY H Inv. B. gar. AY H Inv. B. gar. AF G B. gar. D49509 B. gar. AF B. gar. AF B. gar. X84780 H Inv. B. gar. AY H Inv. B. gar. X83556 B. gar. AY H Inv. G1 86 B. gar. AY H Inv. B. gar. L42879 H Inv B. gar. AY H Inv. B. gar. L42875 B. gar. L42870 H Inv. B. gar. L42889 H B. gar. X81525 B. gar. AY H Inv. B. gar. D49498 B. gar. 525 B. gar. AY H Inv. G3 G8 G9 B. gar. X84773 H B. gar. L42880 B. gar. X84781 H Inv. 84 B. gar. X84784 H Inv. B. gar. D B. gar. D49500 H 99 B. gar. X69595 H Inv. 99 B. gar. AJ H Inv. B. gar. AJ H Inv. B. gar. X83554 H B. gar. AY H Inv. B. gar. X73626 H Inv. B. gar. AJ H Inv. B. gar. AJ H Inv. B. gar. AJ H Inv. B. gar. AJ H Inv. B. gar. AJ H Inv. B. gar. AJ H Inv. G

41 Cause d infezione Cambiamenti climatici Azione dell uomo Densità animali selvatici e vettori Maggior contatto uomo-animale selvatico - escursioni - zecche nelle aree urbane e peri-urbane

42 Lotta ai Vettori ZECCHE MOLLI Metodi fisici Metodi chimici Informazione ed Educazione Metodi biologici

43 Lotta ai Vettori ZECCHE DURE Informazione ed Educazione

44 le/92-pagina-tematica-neuroscienze/549-zecche 011/

45 Zecche da Uomo 335 zecche (6 larve, 216 ninfe e 109 adulti; 4 non ID) 9 zecche zecche zecche soggetti 77 soggetti 205 soggetti

46 Zecche da Uomo 2% 1% zecche raccolte da uomo 9% 1% 10% 250 (76%) Ixodes ricinus, 72 (21.9%) 1% Ixodes spp, 3 (0,9%) Ixodes hexagonus 3 (0,9%) Rhipicephalus spp 1 (0,3%) Dermacentor marginatus 76% Torino VCO Asti Novara Cuneo Vercelli Biella

47 59 positive 44 VCO 6 R. monacensis 3 R. spp 20 R. helvetica 4 A. phagocytophilum 2 B. garinii 4 B. valaisiana 4 B. lusitaniae 3 B. afzelii Zecche da Uomo 1 Asti 8 Vercelli 6 Torino R. monacensis 3 R. Monacensis 1 R. helvetica 1R. Spp. 3 B. afzelii 1 A. phagocytophilum 6 R. monacensis

48 Parchi Regionali La Mandria 8 siti Stupinigi 7 siti

49 La Mandria Stupinigi

50 Parchi Regionali Dragging 2012 Mandria 75% Mandria: 832 zecche (727 larve, 101 ninfe e 4 adulti) 25% Ixodes Haemaphysalis 85% Stupinigi Stupinigi: 76 zecche (45 larve, 28 ninfe e 3 adulti) Ixodes Haemaphysalis Dermacentor 4% 11%

51 Parchi Regionali 43 Mandria 134 zecche esaminate 48 positive 16 B. lusitaniae 6 B. afzelii 1 B. garinii 1 B. spp 27 R. monacensis 1 R. helvetica 1 A. phagocytophilum 1 A. spp. 5 Stupinigi 2 B. lusitaniae 1 B. garinii 3 R. monacensis 10 co-infezioni 1 co-infezione

52 CONCLUSIONI Abbondante popolazione di zecche Presenza di zecche infette Presenza di casi umani di Borreliosi di Lyme nel Verbano-Cusio-Ossola

53 RACCOMANDAZIONI Studiare i fattori che possono aver influito sulla diffusione del vettore Educare la popolazione Migliorare la collaborazione fra il settore medico e veterinario, è fondamentale per la diagnosi e la prevenzione Eseguire analisi molecolari delle zecche da uomo nelle aree endemiche prima della comparsa dei sintomi

54 CEA Torino: Cristina Casalone Barbara Iulini Alessandra Pautasso Debora Corbellini Bessone Saverio Lab. Virologia Torino: Maria Lucia Mandola Francesca Rizzo Walter Mignone - Imperia Riccardo Orusa Aosta Ringraziamenti IZS della Sicilia: Alessandra Torina IZS delle Venezie: Gioia Capelli Lab. Genetica- Torino: Pier Luigi Acutis Simone Peletto Università Med. Veterinaria Torino Alessandro Mannelli Laura Tomassone Leonardo Ceballos Ente di gestione delle Aree Protette dell Area Metropolitana di Torino ASL-VCO Mauro Bardelli Gallotti Aquilino Comune di Calasca-Castiglione

55 Grazie a tutti per l attenzione!!!