Dual Color Dual Fusion Probe

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1 ZytoLight SPEC AML1/ETO Dual Color Dual Fusion Probe Z (0.2 ml) For the detection of the translocation t(8;21)(q22;q22) by fluorescence in situ hybridization (FISH).... In vitro diagnostic medical device according to EU directive 98/79/EC

2 Fluorescence-labeled labeled polynucleotide leotide probe for the detection of the translocation t(8;21 21)( )(q22 q22;q22 q22), ready to use Product Description Content: Product: Specifici city: Storage/Stability: Use: Safety Precautions: ZytoLight SPEC AML1/ETO Dual Color Dual Fusion Probe EmiSVF in hybridization buffer. The probe contains green-labeled polynucleotides (ZyGreen: excitation at 503 nm and emission at 528 nm, similar to FITC, which target the AML1 gene in 21q22, and orange-labeled polynucleotides (ZyOrange: excitation at 547 nm and emission at 572 nm, similar to rhodamine), which target the ETO gene in 8q22. Z : 0.2 ml (20 reactions of 10 µl each) The ZytoLight SPEC AML1/ETO Dual Color Dual Fusion Probe EmiSVF is designed to be used for the detection of the translocation t(8;21)(q22;q22) in formalin-fixed, paraffinembedded tissue or cells by fluorescence in situ hybridization (FISH). The ZytoLight SPEC AML1/ETO Dual Color Dual Fusion Probe EmiSVF must be stored at 2 8 C protected from light and is stable through the expiry date printed on the label. This product is designed for in vitro diagnostic use (according to EU directive 98/79/EC). Interpretation of results must be made within the context of the patient s clinical history with respect to further clinical and pathologic data of the patient by a qualified pathologist! Read the operating instructions prior to use! - 1 -

3 Do not use the reagents after the expiry date has been reached! This product contains substances (in low concentrations and volumes) that are harmful to health. Avoid any direct contact with the reagents. Take appropriate protective measures (use disposable gloves, protective glasses, and lab garments)! If reagents come into contact with skin, rinse skin immediately with copious quantities of water! A material safety data sheet is available on request for the professional user! Principle of the Method The presence of certain nucleic acid sequences in cells or tissue can be detected by in situ hybridization using labeled DNA probes. The hybridization results in duplex formation of sequences present in the test object with the labeled DNA probe. Duplex formation (with sequences of the chromosomal regions 21q22 and 8q22 in the test material) is directly detected by using the tags of fluorescence-labeled polynucleotides

4 Instructions Pretreatment (dewaxing, proteolysis, post-fixation) should be carried out according to the needs of the user. Denaturation and hybridization of probe: NK Pipette 10 µl ZytoLight SPEC AML1/ETO Dual Color Dual Fusion Probe EmiSVF each onto individual samples A gentle warming of the probe, as well as using a pipette tip which has been cut off to increase the size of the opening, can make the pipetting process easier. Avoid long exposure of the probe to light. OK Avoiding trapped bubbles, cover the samples with a coverslip (22 mm x 22 mm). Seal the coverslip, e.g. with a layer of hot glue from an adhesive pistol or with rubber cement PK= Denature the slides at 75 C (±2 C) for 10 min, e.g. on a hot plate Depending upon the age of the sample and variations in the fixation stage, it may be necessary to optimize the denaturing temperature (73 C- 77 C). QK= Transfer the slide to a humidity chamber and hybridize overnight at 37 C (e.g. in a hybridization oven) It is essential that the tissue/cell samples do not dry out during the hybridization step. Further processing, such as washing and counter-staining, can be completed according to the user s needs. For a particularly user-friendly performance, we recommend the use of a ZytoLight FISH system by ZytoVision. These systems were also used for the confirmation of appropriateness of the ZytoLight SPEC AML1/ETO Dual Color Dual Fusion Probe EmiSVF

5 Results With the use of appropriate filter sets, the hybridization signals of the labeled AML1 gene appear green; the hybridization signals of the labeled ETO gene appear orange. In interphases of normal cells or cells without a t(8;21)(q22;q22) translocation, two separate green and two separate orange signals appear. A t(8;21)(q22;q22) translocation is indicated by two green/orange fusion signals in addition to one separate green signal and one separate orange signal. In order to judge the specificity of the signals, every hybridization should be accompanied by controls. We recommend using at least one control sample in which the t(8;21) status is known. Care should be taken not to evaluate overlapping cells, in order to avoid false results, e.g. an amplification of genes. Due to decondensed chromatin, single FISH signals can appear as small signal clusters. Thus, two or three signals of the same size, separated by a distance equal to or less than the diameter of one signal, should be counted as one signal. Our experts are available to answer your questions

6 Literature Dayyani F, et al. (2008) Blood 111: Estey E and Döhner H (2006) Lancet 368: Gmidène A, et al. (2011) Med Oncol 28: S Kievits T, et al. (1990) Cytogenet Cell Genet 53: Licht D (2001) Oncogene 20: Vangala RK, et al. (2003) Blood 101: Wilkinson DG: In Situ Hybridization, A Practical Approach, Oxford University Press (1992) ISBN As of: June 10, 2013 (5.1) Trademarks: rks: ZytoVision and ZytoLight are trademarks of ZytoVision GmbH

7 Bio Optica Milano S.p.A. via San Faustino 58 I Milano Tel Fax Acquisti/Export Fax Assistenza/Contabilità Fax Vendite ZytoLight SPEC AML1/ETO Dual Color Dual Fusion Probe IVD Dispositivo medico-diagnostico in vitro Produttore: ZytoVision GmbH Codice: Z (0.2 ml).. Per l identificazione della traslocazione t(8;21) (q22; q22) mediante Ibridazione in Situ In Fluorescenza (FISH)... REAGENTE PRONTO ALL USO Dispositivo medico-diagnostico in vitro Secondo la direttiva europea 98/79/EC Revisione del 26/05/14 Pagina 1 di 5

8 Bio Optica Milano S.p.A. via San Faustino 58 I Milano Tel Fax Acquisti/Export Fax Assistenza/Contabilità Fax Vendite Descrizione del Prodotto Contenuto: Prodotto: Specificità: Conservazione: Utilizzo: Precauzioni per l uso: Sonda ZytoLight SPEC AML1/ETO Dual Color Dual Fusion (PL69) in tampone di ibridazione. La sonda contiene polinucleotidi marcati in verde (ZyGreen: eccitazione a 503 nm, emissione a 528 nm simile al FITC) che identificano il gene AML1 nel locus 21q22, e polinucleotidi marcati in arancio (ZyOrange: eccitazione a 547 nm, emissione a 572 nm, simile alla rodamina), che identificano il gene ETO nel locus 8q22. Z ,2 ml (20 reazioni da 10μl ciascuna), La sonda ZytoLight SPEC AML1/ETO Dual Color Dual Fusion (PL69) è adibita all evidenziazione della traslocazione t(8;21) (q22q22) su tessuti o cellule fissati in formalina ed inclusi in paraffina, mediante ibridazione in situ in fluorescenza (FISH). La sonda ZytoLight AML1/ETO Dual Color Dual Fusion (PL69) deve essere conservata a 2 C 8 C protetta dalla luce. La sonda è stabile durante il periodo indicato dalla data di scadenza. Il prodotto è designato per la diagnosi in vitro (in accordo con la direttiva EU 98/79/EC). L interpretazione dei risultati deve essere fatta in un contesto clinico e patologico del paziente da un patologo esperto. Leggere le istruzioni prima dell utilizzo del prodotto. Non usare il prodotto dopo la data di scadenza. Il prodotto contiene sostanze (a basse concentrazioni) dannose per la salute, evitare il contatto diretto con il prodotto. Usare dispositivi di sicurezza (guanti, occhiali di protezione, camice). Se il prodotto viene a contatto con la pelle, lavare abbondantemente con acqua. Su richiesta dell utilizzatore è disponibile una scheda di sicurezza. Revisione del 26/05/14 Pagina 2 di 5

9 Bio Optica Milano S.p.A. via San Faustino 58 I Milano Tel Fax Acquisti/Export Fax Assistenza/Contabilità Fax Vendite Principio del Metodo La presenza di determinate sequenze di acido nucleico nelle cellule o nei tessuti può essere rilevata attraverso ibridazione in situ con l'utilizzo di sonde a DNA marcate. L'ibridazione induce la formazione di una struttura a doppio filamento (ibrido duplex) tra le sequenze presenti nel campione in analisi e la sonda. La formazione del duplex (con le sequenze della regione cromosomica 21q22 e 8q22 nel campione) può essere visualizzata attraverso l'utilizzo di un microscopio a fluorescenza con filtri appropriati. Istruzioni Il pretrattamento (deparaffinazione, proteolisi, post-fissazione) deve essere effettuato dipendentemente dalle esigenze dell'utilizzatore. Denaturazione e ibridazione della sonda: 1) Pipettare 10 μl di sonda ZytoLight SPEC AML1/ETO Dual Color Dual Fusion (PL69) in ciascun campione. Un leggero riscaldamento della sonda, nonché l'utilizzo di una punta della pipetta tagliata (per aumentare la dimensione dell'apertura), può facilitare il pipettaggio. Evitare di esporre a lungo la sonda alla luce. 2) Evitare la formazione di bolle, coprire con un coprioggetto (22 mm x 22 mm). Sigillare il coprioggetto, ad esempio con uno strato di colla a caldo o silicone. 3) Denaturare il DNA presente nei vetrini a 75 C (±2 C) per 10 minuti, e.g. su una piastra termoriscaldata. La temperatura di denaturazione deve essere ottimizzata, nell'intervallo tra 73 C e 77 C, dipendentemente dal grado di fissazione e dal tempo di conservazione del preparato istologico/citologico. 4) Trasferire i vetrini in una camera umida ed ibridare overnight a 37 C (e.g. in termostato). Revisione del 26/05/14 Pagina 3 di 5

10 Bio Optica Milano S.p.A. via San Faustino 58 I Milano Tel Fax Acquisti/Export Fax Assistenza/Contabilità Fax Vendite È essenziale che il tessuto/le cellule non si asciughino durante l'ibridazione. Eventuali ulteriori processi, quali lavaggio e contro-colorazione, possono essere completati secondo le esigenze dell'utente. Per ottenere prestazioni ottimali, si consiglia l'uso di un sistema di FISH ZytoLight (ZytoVision). Questo sistema viene anche utilizzato per confermare l adeguatezza della sonda ZytoLight SPEC AML1/ETO Dual Color Dual Fusion (PL69). Risultati: Con l'uso di appositi set di filtri, i segnali di ibridazione del gene AML1 marcato appaiono di colore verde, quelli del gene ETO marcato appaiono arancio. In interfase di cellule normali o cellule senza una traslocazione t(8;21) (q22;q22), appaiono due segnali verdi separati e due segnali arancioni separati. La traslocazione t(8;21) (q22;q22) è evidenziata mediante due segnali di fusione verdi/arancioni in aggiunta a un segnale verde separato e a un segnale arancione separato. Al fine di valutare la specificità dei segnali, ogni ibridazione deve essere verificata mediante controlli (positivo e negativo). Si consiglia di utilizzare almeno un campione di controllo in cui sia noto lo stato t(8;21). Si consiglia di prestare particolare attenzione nell'osservazione di cellule sovrapposte, le quali potrebbero condurre ad una erronea interpretazione dei risultati, e.g. un amplificazione dei geni. A causa della de condensazione della cromatina, singoli segnali FISH possono apparire come piccoli cluster, comunque due o tre segnali della stessa dimensione, separati da uno spazio pari alla dimensione di un segnale, devono essere considerati come un unico segnale. Revisione del 26/05/14 Pagina 4 di 5

11 Bio Optica Milano S.p.A. via San Faustino 58 I Milano Tel Fax Acquisti/Export Fax Assistenza/Contabilità Fax Vendite Bibliografia: Revisione del 26/05/14 Pagina 5 di 5