MODALITÀ APPLICATIVE E RISCONTRI EVOLUTIVI DI ALCUNE AFFEZIONI DERMO-MUCOTICHE TRATTATE CON BIOGREEN GEL
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- Evaristo Moroni
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2 SCHEDA TECNICA
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4 MODALITÀ APPLICATIVE E RISCONTRI EVOLUTIVI DI ALCUNE AFFEZIONI DERMO-MUCOTICHE TRATTATE CON BIOGREEN GEL
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6 CENNI INFORMATIVI SULLE ORIGINI E CARATTERISTICHE FUNZIONALI DEL LAPACHO - TABEBUIA AVELLANEDAE E COMPONENTI ASSOCIATI
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8 SPETTRO D AZIONE E ANTIBIOGRAMMA DEL TABEBUIA (LAPACHO) ATTIVITÀ ANTIMICROBICA DELLA TABEBUIA AVELLANEDAE (Minima Concentrazione Inibente (µg/ml) Microrganismi Lapacholo Deidro α lapacholo α-lapachone β-lapachone Xiloidone Bac. Subtilis B. Micoides B. Antracis Staf. Aureus Sar. Lutea St. Aemoliticus M. Tub. M. Smegmatis M. Phisi N. Asteroides N. Catarralis E. Coli K. Pneumonia S. Tiphi Br. Suis Br. Abortus Br. Melitensis C. Albicans C. Cruzei C. Neformans > > > < 20.0 > > > > > > > > > > > > > > > > > > Proprietà Meccanismo d azione Antibatterica Inibizione della respirazione cellulare batterica Antivirale Inibizione della DNA e RNA polimerasi Antimicotica Antinfiammatoria Sinergismo α e β Lapachone / Xiloidone Inibizione trasporto elettronico Potenziamento meccanismo di riparazione cellulare Antitumorale Inibizione crescita cellulare
9 CHALLENGE TEST Protocollo n 0502F29M CHALLENGE TEST Valutazione della stabilità microbiologica di un dispositivo medico di classe I Protocollo n 0502F29M 17 Agosto 2005 BIO BASIC EUROPE MILANO (Direttore Tecnico - Controllo qualità: Dottor Claudio Angelinetta, laureato in Chimica) Microrganismi utilizzati nelle piastre di coltura Sono stati utilizzati i seguenti ceppi selezionati di microrganismi Gram - : Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027) Gram + : Staphylococcus aureus (ATCC 6538) Lieviti : Candida albicans (ATCC 10231) Muffe : Aspergillus niger (ATCC 16404) ENCLOSURE A
10 TEST D IRRITAZIONE CUTANEA GEL SU BASE ACQUA DEIONIZZATA E DEPURATA (Esente da: alcool, solventi e sostanze grasse) TEST D IRRITAZIONE CUTANEA Patch Test Valutazione dell eventuale potere irritante di un dispositivo medico di classe I, secondo la classificazione di Draize modificata 40 VOLONTARI x 24 ORE Protocollo n 0505M24P 10 Gennaio 2006 UNIVERSITA DEGLI STUDI DI PAVIA DIPARTIMENTO DI MEDICINA INTERNA E TERAPIA MEDICA SEZIONE DI FARMACOLOGIA E TOSSICOLOGIA CELLULARE E MOLECOLARE (Direttore: Prof. Plinio Richelmi) TEST D IRRITAZIONE CUTANEA MATERIALI E METODI SELEZIONE DEI VOLONTARI Sono stati selezionati 40 soggetti di sesso maschile e femminile, aventi età compresa tra i 18 ed i 70 anni, secondo i seguenti criteri di inclusione: a) buono stato di salute generale b) assenza di patologie cutanee c) assenza di trattamenti farmacologici in atto d) impegno a non variare la normale routine quotidiana e) anamnesi negativa per atopia. METODO DI APPLICAZIONE DEI CAMPIONI I campioni sono stati applicati, in funzione delle loro caratteristiche d uso: tal quale. ESECUZIONE DEL TEST La zona cutanea destinata al saggio (cute del dorso), è stata detersa con una soluzione alcoolica al 70% e successivamente è stata effettuata l applicazione del prodotto da testare. Tali prodotti sono stati tenuti a contatto della cute per 24 [X] o per 48[...] ore. Le reazioni cutanee sono state valutate a 15 minuti [X], 1 ora [X], 24 ore [X], 48 ore [...] e 72 ore [...] dopo la rimozione della Finn Chamber. Riepilogo dei dati rilevati ai singoli volontari e valutazione dell eventuale potere irritante del prodotto sottoposto alla sperimentazione nelle 24 ore. Il campione è contraddistinto dalla sigla: BIOGREEN GEL Il test viene eseguito utilizzando il prodotto tal quale ad una diluizione del 10%.
11 TEST D IRRITAZIONE CUTANEA (24 ORE) Protocollo n 0505M24P VALORI DI EDEMA E/O ERITEMA EVENTUALMENTE RILEVATI (Scala di valutazione vedi tabella 1)
12 TEST D IRRITAZIONE CUTANEA (24 ORE) Protocollo n 0505M24P VALORI DEGLI INDICI DI IRRITAZIONE MEDIA E RELATIVA CLASSIFICAZIONE (Vedi tabella 2)
13 TEST D IRRITAZIONE CUTANEA (24 ORE) Protocollo n 0505M24P CONCLUSIONI La tabella ed il grafico precedentemente riportati riassumono i valori degli indici di eritema e di edema rilevati ad ogni singolo volontario e consentono di classificare (secondo Draize modificato) il prodotto: NON IRRITANTE MONITOR Prof. Plinio RICHELMI SPERIMENTATORE Dott.ssa Evelyn FALCONI KLEIN CONTROLLO QUALITÀ Dott. Claudio ANGELINETTA SPONSOR
14 TEST POTERE IRRITANTE GEL SU BASE ACQUA DEIONIZZATA E DEPURATA (Esente da: alcool, solventi e sostanze grasse) TEST POTERE IRRITANTE Valutazione dell eventuale potere irritante o sensibilizzante di un dispositivo medico di classe I mediante tests epicutanei ripetuti attraverso una modificazione del test di Shelanski e Shelanski 40 VOLONTARI x 28 GIORNI Protocollo n 0505M24I 10 Gennaio 2006 UNIVERSITA DEGLI STUDI DI PAVIA DIPARTIMENTO DI MEDICINA INTERNA E TERAPIA MEDICA SEZIONE DI FARMACOLOGIA E TOSSICOLOGIA CELLULARE E MOLECOLARE (Direttore: Prof. Plinio Richelmi) TEST POTERE IRRITANTE MATERIALI E METODI SELEZIONE DEI VOLONTARI Sono stati selezionati 40 soggetti di sesso maschile e femminile, aventi età compresa tra i 18 ed i 70 anni, secondo i seguenti criteri di inclusione: a) buono stato di salute generale b) assenza di patologie cutanee c) assenza di trattamenti farmacologici in atto d) impegno a non variare la normale routine quotidiana e) anamnesi negativa per atopia. PREPARAZIONE DEI CAMPIONI I campioni sono stati applicati, in funzione delle loro caratteristiche d uso: tal quale e/o ad una concentrazione standard del 10%. METODO DI APPLICAZIONE DEI CAMPIONI I campioni sono stati testati utilizzando la Finn Chamber, un dischetto di alluminio di 7 mm di diametro, contenente dischetti di carta assorbente imbevuti di una quantità nota di campione in esame, intervallato dall uso del prodotto per una durata di almeno 4 settimane. Riepilogo dei dati rilevati ai singoli volontari e valutazione dell eventuale potere irritante e/o sensibilizzante del prodotto sottoposto alla sperimentazione per 4 settimane. Il campione è contraddistinto dalla sigla: BIOGREEN GEL Il test viene eseguito utilizzando il prodotto tal quale ad una diluizione del 10%.
15 TEST POTERE IRRITANTE (28 GIORNI) Protocollo n 0505M24I VALORI DI EDEMA E/O ERITEMA EVENTUALMENTE RILEVATI (Scala di valutazione vedi tabella 1)
16 TEST POTERE IRRITANTE (28 GIORNI) Protocollo n 0505M24I VALORI DEGLI INDICI DI IRRITAZIONE MEDIA E RELATIVA CLASSIFICAZIONE (Vedi tabella 2) NUMERO DI SOGGETTI SENSIBILIZZATI E RELATIVA CLASSIFICAZIONE (Vedi tabella 3)
17 TEST POTERE IRRITANTE (28 GIORNI) Protocollo n 0505M24I CONCLUSIONI La tabella ed i grafici precedentemente riportati riassumono i valori degli indici di eritema e di edema rilevati ad ogni singolo volontario e consentono di classificare il prodotto: sottoposto alla sperimentazione clinica atta a valutare l eventuale potere irritante o sensibilizzante, mediante Tests Epicutanei Ripetuti come: NON IRRITANTE e IPOALLERGENICO (dotato di BASSA SENSIBILIZZAZIONE) MONITOR Prof. Plinio RICHELMI SPERIMENTATORE Dr. Fernando Marco BIANCHI CONTROLLO QUALITÀ Dott. Claudio ANGELINETTA SPONSOR
18 TEST CITOTOSSICITÀ GEL SU BASE ACQUA DEIONIZZATA E DEPURATA (Esente da: alcool, solventi e sostanze grasse) TEST CITOTOSSICITÀ Valutazione della citotossicità di un dispositivo medico di classe I attraverso un saggio in vitro su colture cellulari di cheratinociti CELLULE UMANE COLTIVATE Protocollo n 0505M24V 16 Dicembre 2005 I. Z. S. della Lombardia e dell Emilia Romagna (ENTE SANITARIO DI DIRITTO PUBBLICO) CENTRO DI RICERCA APPLICATA AI SUBSTRATI CELLULARI BRESCIA (ITALIA) VALUTAZIONE IN VITRO DELLA POTENZIALE CITOTOSSICITA DI UN PRODOTTO Il cheratinocita è il principale tipo cellulare che compone l epidermide e partecipa attivamente a tutti gli aspetti funzionali che la caratterizzano. I cheratinociti utilizzati negli esperimenti in vitro qui condotti sono di tipo primario, cioè provengono da una biopsia di cute sana di un donatore. La metodica MTT valuta la vitalità di cellule in vitro esposte a diverse concentrazioni di prodotto rispetto a cellule non trattate. Il test MTT consente inoltre di evidenziare la dose soglia di tollerabilità della sostanza in esame per i cheratinociti e, se esiste, la dose in grado di stimolare la crescita cellulare. RISULTATI* I risultati ottenuti con il saggio MTT sono messi in grafico contro le concentrazioni, per ottenere curve dose-risposta. La curva di citotossicità ottenuta serve per determinare: - la curva di regressione teorica, - il valore di IC 50 (Concentrazione Inibente la crescita cellulare del 50%) teorico. Il valore IC 50 indica la concentrazione di prodotto necessaria per inibire la crescita cellulare del 50%. IC 50 è un parametro che consente di valutare il potenziale irritante di un composto, secondo lo schema seguente: IC 50 < 0,5 indica un forte effetto citotossico/irritante. IC 50 tra 0,5 e 1,5 indica un moderato effetto citotossico/irritante. IC 50 > 1,5 indica assenza di qualsiasi effetto citotossico/irritante. *Rielaborazione dei dati sperimentali forniti dal: Centro Ricerca applicata ai Substrati Cellulari - I. Z. S. della Lombardia e dell Emilia Romagna - Brescia
19 TEST CITOTOSSICITÀ Protocollo n 0505M24V MODALITÀ DI ESECUZIONE DEL TEST IN VITRO SU COLTURE DI CELLULE UMANE COLTIVATE Un numero adeguato di cellule ( cell/pz, 25 passaggio) viene seminato nei pozzetti (piastra da 96 pozzetti, 150 µl/pz di sospensione cellulare), quando viene raggiunta una confluenza del 60-70% viene addizionando terreno fresco contenente diluizioni scalari della sostanza in esame e degli standard. Pozzetti con cellule non trattate costituiscono i controlli negativi. L incubazione con il prodotto prosegue overnight per 24 ore. Dopo aver sostituito il terreno con terreno fresco più MTT, le cellule vengono incubate per 3 ore a 37 C. Quindi le cellule vengono sottoposte a diversi lavaggi per eliminare i residui di soluzione MTT. La lettura spettrofotometrica viene eseguita alla lunghezza d onda di 540 nm. CURVE STANDARD
20 TEST CITOTOSSICITÀ Protocollo n 0505M24V STANDARD NEGATIVO VALUTAZIONE DELLA CITOTOSSICITÀ VALUTAZIONE DELLA CITOTOSSICITÀ DEL PRODOTTO 5 1,67 0,56 0,19 0,06 0,02 5
21 TEST CITOTOSSICITÀ Protocollo n 0505M24V RIEPILOGO DEI DATI RILEVATI E VALUTAZIONE DELL EVENTUALE CITOTOSSICITÀ DEL PRODOTTO IL CAMPIONE DENOMINATO: NON EFFETTUA EFFETTI CITOTOSSICI ALLE CONCENTRAZIONI TESTATE SU CHERATINOCITI IN VITRO DI CONSEGUENZA: IL PRODOTTO RISULTA POTENZIALMENTE PRIVO DI ATTIVITÀ IRRITANTE CONTROLLO QUALITÀ Dott. Claudio ANGELINETTA SPONSOR
22 BIBLIOGRAFIA
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24 Euro-Pharma s.r.l. Torino - Tel Fax info@europharma.it /2014
Luogo e data di emissione:brescia 3 Febbraio 2003.
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