DETERMINAZIONE DELLA CARICA MICROBICA TOTALE (CMT)
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1 DETERMINAZIONE DELLA CARICA MICROBICA TOTALE (CMT) Protocollo n. 178/2013 COMMITTENTE Farmacia Soldani Salvini CAMPIONI OLIVE CREMA DI BELLEZZA (lotto 27 Marzo 2013) DATA RAPPORTO 06/05/2013 Supervisore dello studio : Professor Stefano Manfredini Cattedra di Chimica Farmaceutica e Tossicologica DIPARTIMENTO DI SCIENZE DELLA VITA E BIOTECNOLOGIE, Università di Ferrara Via Fossato di Mortara, 17/ Ferrara Italy Ricercatore scientifico: Dott.ssa Alberta Vandini Presso: Dipartimento di Microbiologia Università di Ferrara Via Fossato di Mortara, 17/ Ferrara Il presente rapporto non può essere riprodotto parzialmente senza approvazione scritta di AMBROSIALAB srl 1
2 METODICA : DETERMINAZIONE DELLA CARICA MICROBICA TOTALE (CMT) O TOTAL VIABLE COUNT (TVC) 1-TERRENI COLTURALI Tryptone Soya Agar (TSA) per il metodo di semina in inclusione in piastra Petri. 2-DILUENTE Soluzione di acqua distillata per duplice osmosi inversa (Millipore) e sostanze disattivanti. 3-PROCEDURA In condizioni di asepsi sotto cappa a flusso laminare verticale si preleva una grammo di prodotto finito in esame e si procede alla prima diluizione in diluente opportuno (Tryptone water oppure soluzione di Ringer). Questa prima diluizione è definita preparazione della diluizione madre corrispondente alla diluizione 1:10 ( 10-1 ). Si procede al metodo per inclusione in piastre Petri con terreno opportuno per ogni diluizione. Per ogni campione si preparano n.2 piastre Petri per la soluzione madre e per ogni diluizione successiva. 4-TEMPERATURA E TEMPO DI INCUBAZIONE Si incuba in termostato per 2 giorni a 37 C +/- 2 C per favorire la crescita dei batteri e per 3 giorni a 25 C +/- 2 C per i miceti (funghi e lieviti). 5-LETTURA DEI RISULTATI La lettura dei risultati si esegue moltiplicando la relativa diluizione per il numero di colonie contate e calcolando la media dei valori ottenuti; il risultato si esprime come < 10 u.f.c./gr. o ml in assenza di crescita e come X x 10 n u.f.c./gr. o ml in presenza di crescita, dove X rappresenta la media delle colonie contate e n il fattore di diluizione. Se si riscontra una crescita microbica del valore compreso tra 500 e 10 3 si eseguirà la ricerca dei patogeni con terreni selettivi. Il risultato < 10 u.f.c./gr. o ml non significa sterilità del prodotto, ma è il limite del metodo. 6-RICERCA PATOGENI In base alla normativa vigente si ricercano i patogeni, utilizzando i terreni di coltura e la metodologia adeguata. 2
3 I terreni selettivi per differenziare in modo ottimale i diversi patogeni sono i seguenti: MACCONKEY AGAR+ MUG MANNITOL SALT AGAR CETRIMIDE AGAR SABOURAUD DEXTROSE AGAR + CLF Escherichia coli Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans 7-TEMPERATURA E TEMPO DI INCUBAZIONE + 35 C +/- 2 C per 48 h. per i batteri; + 25 C +/- 2 C per 72 h. per i miceti. 8-RIFERIMENTI NORMATIVI Il valore di accettabilità del risultato microbiologico del prodotto in esame deve rispettare i criteri e i limiti di accettabilità emanati ed indicati dalla normativa vigente n.713 e deve essere conforme ai criteri di accettabilità emanati da Cosmetic, Toiletry and Perfumery Association (CTPA UK) (ed. 1990), da Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association (CTFA USA) (ed. 1993) e da Farmacopea Ufficiale (FUI) ed. XI. 3
4 RISULTATI TVC PRODOTTO: OLIVE CREMA DI BELLEZZA LOTTO 27 mar.2013 CARICA MICROBICA TOTALE RISULTATO CFU/GR Criterio accettabilità BATTERI/MICETI TOTALI AEROBI MESOFILI <10 ACCETTABILE RICERCA PATOGENI PATOGENI ASSENTI ACCETTABILE Criteri definiti da FARMACOPEA EUROPEA /PH. EUROPE criteria for results interpretation : Batteri / Bacteria : Miceti / Fungi: INFERIORI A 1000 / grammo PATOGENI ASSENTI 4
5 RESPONSABILITA DEL SUPERVISORE DELLO STUDIO Con la presente dichiaro che lo studio microbiologico attinente a questo rapporto è stato eseguito sotto la mia supervisione, secondo il protocollo sperimentale ed il piano di qualità da me supervisionato e in ottemperanza alle Buone Pratiche di Laboratorio (GLP). Tutte le osservazioni e dati registrati durante questa prova sono riportati fedelmente in questa relazione. Certifico la rilettura di questo rapporto e confermo il mio consenso con il suo contenuto. Il Supervisore dello studio Professor Stefano Manfredini Firma 5
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