PTH. FASE POST-ANALITICA: I dati ottenuti vengono validati tecnicamente poi clinicamente e quindi firmati digitalmente.

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1 PTH MODALITA' DI RICHIESTA: Pazienti interni: tramite modulo interno prestampato. Pazienti esterni: tramite richiesta del medico curante. PREPARAZIONE DEL PAZIENTE ALL'ESAME: Il paziente deve trovarsi in condizioni basali dopo un digiuno di circa 10 ore. MODALITA' DI RACCOLTA DEL CAMPIONE: - Prelievo venoso. - Utilizzo del sistema sottovuoto o di siringa monouso o butterfly. - Utilizzo provetta senza additivi (rosso-marrone). MODALITA DI TRASPORTO DEL CAMPIONE: Pazienti interni: da ogni stanza i campioni sono portati da un infermiere in un contenitore adeguato in laboratorio. Pazienti esterni: dalla sala prelievi (attigua al laboratorio) i campioni, attraverso l apposita finestra, sono consegnati al laboratorio. Vedi procedura. MODALITA' DI CONSERVAZIONE DEL CAMPIONE: La provetta madre dopo essere stata processata è conservata tra 2 e 8 C per 6 giorni Se il campione non può essere processato subito, il surnatante è raccolto mediante pipetta monouso in una provetta di plastica tappata, su cui è applicata l etichetta con codice a barre, e conservata secondo le modalità previste dalla metodica descritta nella scheda tecnica. Evitare congelamenti ripetuti. FASE PRE-ANALITICA: Sulla provetta madre è posta un etichetta con codice a barre che permette la trasmissione bidirezionale dei dati (esami richiesti e relativi risultati) tra il PC dello strumento e il PC gestionale. La provetta madre è centrifugata a 3750 rpm per 8 minuti. FASE ANALITICA: La provetta madre è posizionata sul rack porta campioni dello strumento LIAISON dalla preanalitica COBAS p 312, che provvede alla registrazione del check-in e quindi processata secondo le modalità analitiche previste. FASE POST-ANALITICA: I dati ottenuti vengono validati tecnicamente poi clinicamente e quindi firmati digitalmente. CRITERI DI VALIDAZIONE DEL DATO ANALITICO: Analisi dei controlli qualità interni secondo le regole di Westgard e controlli qualità esterni (VEQ). VALORI PANICO: Non applicabile. CARATTERISTICHE E DESCRIZIONE DEL METODO: Il test LIAISON 1-84 PTH è un dosaggio modificato di tipo sandwich in due step, a due siti, che utilizza due anticorpi policlonala per la cattura e il rilevamento della molecola PTH Il test utilizza un campione di 150 µl di siero umano o plasma con EDTA incubato con un anticorpo policlonale coniugato con isoluminolo ad elevata specificità per la regione N-terminale del peptide Successivamente all incubazione, particelle paramagnetiche rivestite con un altro anticorpo policlonale che si lega alla regione C-terminale della molecola 1-84 vengono aggiunte alla reazione ed incubate. L utilizzo di questi anticorpi assicura che venga rilevato solo il PTH 1-84 che non presenta reattività crociata con frammenti quali il PTH 7-84*. Dopo la seconda incubazione, il materiale non legato è rimosso mediante un ciclo di lavaggio. In seguito vengono aggiunti i reagenti starter che inducono una reazione di chemiluminescenza con andamento di tipo flash. Il segnale luminoso è misurato da un fotomoltiplicatore in unità relative di luce (RLU, relative light units) ed è proporzionale alla concentrazione di PTH 1-84 presente nei calibratori, nei controlli o nei campioni. * PTH 7-84 è utilizzato per fare riferimento alla raccolta di frammenti inattivi associati al PTH PRECISIONE, ACCURATEZZA E SENSIBILITA : Vedi scheda tecnica.

2 INTERFERENZE: Vedi scheda tecnica. SIGNIFICATIVITA (VARIABILITA ANALITICA E VARIABILITA BIOLOGICA): Vedi scheda tecnica. COMPILAZIONE, TRASMISSIONE E CONSEGNA REFERTI: I risultati, dopo la validazione tecnica sono controllati e validati clinicamente per poi essere firmati digitalmente dal responsabile del laboratorio o da chi ne fa le veci. Dopo la firma digitale i referti sono disponibili on line per essere visionati dai reparti se i pazienti sono interni. Per i pazienti esterni i referti possono essere stampati su richiesta alla segreteria o sono accessibili via internet tramite l utilizzo dell apposito codice rilasciato al momento dell accettazione del paziente dalla segreteria. PRINCIPALI CRITERI INTERPRETATIVI: Il PTH é prodotto da quattro ghiandole paratiroidee che sono situate nel collo dietro la tiroide. Normalmente, queste ghiandole secernono PTH nella circolazione sanguigna in risposta a bassi livelli di calcio nel sangue. L ormone paratiroideo quindi lavora in tre modi per aiutare a rialzare i livelli del calcio nel sangue fino alla normalità. Prende il calcio dalle ossa, stimola l attivazione della vitamina D nel rene (che a sua volta aumenta l assorbimento del calcio da parte dell intestino) e sopprime l escrezione di calcio nell urina (mentre incoraggia l escrezione di fosfato). Man mano che i livelli del calcio incominciano ad aumentare nel sangue, il PTH normalmente diminuisce. L ormone paratiroideo (PTH) aiuta il corpo a mantenere livelli stabili di calcio nel sangue. E parte di un ciclo di feedback che comprende calcio, PTH, vitamina D, e, fino a un certo punto, fosforo (fosfato) magnesio. Condizioni e malattie che sconvolgono questo ciclo di feedback possono causare aumenti o diminuzioni inappropriate dei livelli di calcio e PTH e portano a sintomi di ipercalcemia o ipocalcemia. TEMPO DI ATTESA PER L'ESAME: Uguale o inferiore a 8 ore. 08/04/2015

3 DiaSorin Inc 1951 Northwestern Ave - Stillwater, MN USA Tel Fax Modifiche: 1,4,5 Soppressioni: 5 1. USO PREVISTO Il test DiaSorin LIAISON 1-84 PTH è un immunodosaggio a chemiluminescenza (CLIA) per la determinazione quantitativa del PTH 1-84 che non presenta reazione crociata con il frammento PTH 7-84* nel siero umano e nel plasma con EDTA. Le misurazioni dei livelli dell ormone paratiroideo sono utilizzate per la diagnosi differenziale di ipercalcemia ed ipocalcemia secondarie a disturbi del metabolismo del fosforo e del calcio. Il kit è stato sviluppato per l esecuzione sulla serie di analizzatori LIAISON **. 2. SOMMARIO E SPIEGAZIONE DEL TEST 1 L ormone paratiroideo (PTH), un polipeptide costituito da 84 aminoacidi, svolge un ruolo critico nella regolazione dell omeostasi minerale e nel metabolismo osseo 2. Il PTH influenza l omeostasi minerale regolando il tasso di riassorbimento mediato di calcio e fosforo a livello del rene e stimolando la sintesi del calcitriolo renale. L effetto diretto del PTH sulle ossa consiste nello stimolare il processo di riassorbimento osseo degli osteoclasti, associato ad un aumento della formazione ossea. La concentrazione di calcio ionizzato nel plasma rappresenta il più importante regolatore della secrezione di PTH da parte della ghiandola paratiroide. Anche vitamina D e fosforo agiscono direttamente sulla sintesi e sulla secrezione del PTH. Iperparatiroidismo primario e secondario, insufficienza renale, sindrome da malassorbimento e pseudoipoparatiroidismo si associano a concentrazioni elevate di PTH 3. Concentrazioni diminuite di PTH coincidono con dosi elevate di latte arricchito di vitamina D, sindrome da latte ed alcali (milk-alkali-syndrome), Morbo di Boeck (sarcoidosi), ipertireosi, ingestione di tiazide e ipercalcemia da tumori maligni. Si osserva una diminuzione della concentrazione di PTH anche in presenza di ipercalciuria assorbitiva e ipoparatiroidismo. Nel corso degli ultimi decenni è stata sviluppata una serie di test sempre più sensibili per la misurazione del PTH 4. I primi test dotati di specificità per la porzione C-terminale del PTH erano di limitata utilità in quanto i pazienti affetti da malattia renale cronica (CKD) mantenevano livelli aumentati di frammenti inattivi che non venivano eliminati dall organismo a causa della funzionalità renale compromessa. Test di seconda generazione o dosaggi immunoradiometrici a due siti per la determinazione del PTH intatto sono stati sviluppati ed inizialmente ritenuti in grado di rilevare soltanto molecole attive del PTH Genericamente, questi dosaggi di tipo sandwich utilizzavano anticorpi di cattura specifici per la porzione C-terminale ed anticorpi di rivelazione specifici per la porzione N-terminale 1-34 della proteina del PTH Nell arco di dodici anni dal 1987 al 1998, si è progressivamente compreso che anche i dosaggi del PTH intatto erano compromessi: il 30-90% dei valori da essi riportati derivava dal frammento PTH 7-84* che si accumula anche nei pazienti uricemici. L elevata mancanza di uniformità dei dosaggi del PTH intatto reperibili in commercio ha compromesso la capacità di trarre un inferenza clinica comparabile 1,5. Più recentemente sono stati prodotti test di terza generazione. Dato che i frammenti PTH 7-84* non vengono rilevati, questi dosaggi conferiscono una maggiore uniformità relativa ai test diagnostici effettuati per la determinazione dei livelli di PTH Con la scomparsa del dosaggio Bio-Intact all inizio del , non sono stati più disponibili sul mercato test automatici per la determinazione dei livelli di PTH Grazie all introduzione del test LIASON 1-84 PTH, la stessa performance di livello superiore per una misurazione reale del 1-84 PTH 7 è ora disponibile su una piattaforma automatica affidabile. 3. PRINCIPIO DEL DOSAGGIO Il test LIAISON 1-84 PTH è un dosaggio modificato di tipo sandwich in due step, a due siti, che utilizza due anticorpi policlonala per la cattura e il rilevamento della molecola PTH Il test utilizza un campione di 150 µl di siero umano o plasma con EDTA incubato con un anticorpo policlonale coniugato con isoluminolo ad elevata specificità per la regione N-terminale del peptide Successivamente all incubazione, particelle paramagnetiche rivestite con un altro anticorpo policlonale che si lega alla regione C-terminale della molecola 1-84 vengono aggiunte alla reazione ed incubate. L utilizzo di questi anticorpi assicura che venga rilevato solo il PTH 1-84 che non presenta reattività crociata con frammenti quali il PTH 7-84*. Dopo la seconda incubazione, il materiale non legato è rimosso mediante un ciclo di lavaggio. In seguito vengono aggiunti i reagenti starter che inducono una reazione di chemiluminescenza con andamento di tipo flash. Il segnale luminoso è misurato da un fotomoltiplicatore in unità relative di luce (RLU, relative light units) ed è proporzionale alla concentrazione di PTH 1-84 presente nei calibratori, nei controlli o nei campioni. * PTH 7-84 è utilizzato per fare riferimento alla raccolta di frammenti inattivi associati al PTH ** LIAISON and LIAISON XL 1 / 10 IT

4 4. MATERIALI FORNITI IN DOTAZIONE Integrale di reagenti Particelle magnetiche (2,4 ml) Coniugato (12,0 ml) Tampone di analisi (25,0 ml) [SORB] [CONJ] Numero di test 100 [BUF AS] ProClin 300 è un marchio registrato di Rohm and Haas Co. Particelle magnetiche rivestite con anticorpo policlonale diretto contro PTH 1-84, BSA, tampone fosfato, surfattante e 0,1% di ProClin 300 e 0,05% di gentamicina solfato. Anticorpo ad elevata specificità per la regione N-terminale del peptide PTH 1-84 coniugato con un derivato dell isoluminolo, in tampone fosfato, BSA, surfattante, 0,1% di ProClin 300 e 0,05% di gentamicina solfato. Tampone fosfato, BSA, surfattante, bloccanti, 0,09% di ProClin 300 e 0,045% di gentamicina solfato. Tutti i reagenti sono forniti pronti all'uso. L ordine dei reagenti rispecchia la disposizione dei contenitori nell integrale di reagenti. Ulteriori componenti non presenti nell integrale di reagenti [CAL 1] Siero equino, PTH 1-84, inibitore della proteasi, 0,09% di sodio azide e 0,2% di 2 flaconi ProClin 300. Ricostituire in 2 ml di acqua distillata o deionizzata. Aliquotare e (Liofilizzato) conservare il calibratore ricostituito a -20ºC. [CAL 2] Siero equino, PTH 1-84, inibitore della proteasi, 0,09% di sodio azide e 0,2% di 2 flaconi ProClin 300. Ricostituire in 2 ml di acqua distillata o deionizzata. Aliquotare e (Liofilizzato) conservare il calibratore ricostituito a -20ºC. Standardizzazione: Le concentrazioni (pg/ml) del calibratore LIAISON 1-84 PTH Calibrator prendono come riferimento un preparato interno di PTH umano sintetico (1-84). Materiali richiesti, ma non forniti (relativi al sistema) LIAISON XL Analyzer LIAISON Analyzer LIAISON Wash/System Liquid (REF ) LIAISON Wash/System Liquid (REF ) LIAISON XL Waste Bags (REF X0025) LIAISON Waste Bags (REF ) LIAISON XL Cuvettes (REF X0016) LIAISON Module (REF ) LIAISON XL Starter Kit (REF ) LIAISON Starter Kit (REF ) LIAISON XL Disposable Tips (REF X0015) LIAISON XL Starter Kit (REF ) LIAISON Cleaning Kit (REF ) LIAISON Light Check (REF ) LIAISON Light Check 12 (REF ) Materiali richiesti ma non forniti LIAISON 1-84 PTH Control Set (REF ) Ulteriori materiali raccomandati: LIAISON 1-84 PTH Specimen Diluent (REF ) 5. AVVERTENZE E PRECAUZIONI PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO Non per uso interno o esterno sull'uomo o su animali. SICUREZZA GENERALE: Tutti i campioni, tutti i reagenti biologici e tutti i materiali usati per effettuare il dosaggio devono essere considerati potenzialmente in grado di trasmettere agenti infettivi. Evitare il contatto con la pelle, gli occhi o le mucose. Durante l'esecuzione del test seguire le abituali pratiche di igiene industriale. Non mangiare, bere, fumare o applicare cosmetici nel laboratorio in cui si esegue il dosaggio. Non pipettare soluzioni con la bocca. Evitare il contatto con ogni tipo di materiale potenzialmente infettivo indossando camici da laboratorio, protezioni per gli occhi/il viso e guanti monouso. Lavare accuratamente le mani al termine di ciascun dosaggio. Evitare schizzi o la formazione di aerosol quando si maneggiano, diluiscono o trasferiscono campioni o reattivi. Eventuali perdite di reattivo dovranno essere decontaminate con una soluzione di candeggina al 10% (contenente ipoclorito di sodio allo 0,5%) e smaltite come potenzialmente infettive. I materiali di rifiuto devono essere smaltiti secondo le disposizioni vigenti e le linee guida impartite dagli enti aventi competenza nel territorio dove ha sede il laboratorio e la regolamentazione vigente in ciascun paese. Non usare kit o componenti dopo la data di scadenza indicata sull'etichetta. 2 / 10 IT

5 INFORMAZIONI SUI PERICOLI CHIMICI E DI SICUREZZA: I reagenti di questo kit sono classificati in base allo standard US OSHA Hazard Communication standard; alle leggi sul diritto di conoscenza degli stati USA individuali; alle regolamentazioni sul controllo dei prodotti del Canadian Centre for Occupational Health and Safety e alle direttive applicabili dell'unione Europea (vedi foglio dati sicurezza del materiale per ulteriori informazioni). GHS/CLP: ProClin Sodio azide CAS No.: Reagenti: [SORB] [CONJ] [CAL 1] [CAL 2] [CAL 1] [CAL 2] [BUF AS] Classificazione: Sensibilizzazione cutanea, categoria di pericolo 1 Non richiesto Avvertenza: Attenzione Non richiesto Pittogramma: None required Indicazione Di Pericolo: Consigli Di Prudenza: GHS07 Punto esclamativo H317 - Può provocare una reazione allergica cutanea. P261 Evitare di respirare la nebbia/ gli aerosol. P272 Gli indumenti da lavoro contaminati non devono essere portati fuori dal luogo di lavoro. P280 Indossare guanti/ indumenti protettivi/ Proteggere gli occhi. Non richiesto Non richiesto REAGENTI CONTENENTI SODIO AZIDE: Alcuni reagenti di questo kit contengono sodio azide. La sodio azide può reagire con le tubature in piombo o rame e formare azidi metalliche altamente esplosive. Al momento dello smaltimento, sciacquare con abbondante acqua al fine di evitare la formazione di azide. Per ulteriori informazioni, consultare la sezione "Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts (Decontaminazione degli scarichi dei lavandini dei laboratori per rimuovere i sali di azide)" nel manuale per la gestione della sicurezza Guide- Safety Management No. CDC-22, pubblicato dai Centri per il controllo e la prevenzione delle malattie di Atlanta, GA, PREPARAZIONE DELL'INTEGRALE DI REAGENTI Prendere nota delle importanti precauzioni per la manipolazione dei reattivi di seguito descritte: 1. Risospensione di particelle magnetiche Le particelle magnetiche devono essere completamente risospese prima di inserire l integrale nello strumento. Per garantire la sospensione completa delle particelle, osservare le fasi di seguito indicate: Prima di rimuovere il sigillo, girare la rotellina posta in corrispondenza del vano delle particelle magnetiche fino a quando il colore della sospensione vira al marrone. Agitare delicatamente orizzontalmente può favorire la sospensione delle particelle magnetiche (evitare la formazione di schiuma). Controllare visivamente il fondo del fiala delle particelle magnetiche per confermare la risospensione di tutte le particelle magnetiche depositate. Ripetere al bisogno sino alla completa risospensione delle particelle magnetiche. Dopo aver rimosso la pellicola protettiva, asciugare accuratamente la superficie di ciascun setto per eliminare l eventuale liquido residuo. 2. Formazione di schiuma nei reattivi Al fine di garantire prestazioni ottimali dell integrale, si raccomanda di evitare la formazione di schiuma nei reattivi. Osservare le raccomandazioni sotto specificate per evitare tale evento: Prima di usare l integrale, controllare visivamente i reattivi, in particolare i calibratori per escludere la presenza di schiuma. Nel caso si riscontri la presenza di schiuma dopo la risospensione delle particelle magnetiche, posizionare l integrale sullo strumento e lasciare sciogliere la schiuma. L integrale è pronto per l uso quando la schiuma è sciolta e l integrale è rimasto sullo strumento ed è stato mescolato per almeno 30 minuti. 3 / 10 IT

6 3. Caricamento dell integrale di reattivi nell area reattivi Analizzatore LIAISON Posizionare l integrale di reattivi nell area reattivi dell analizzatore con l etichetta del codice a barre rivolta verso sinistra e lasciare riposare per 30 minuti prima dell uso. L analizzatore mescola automaticamente e risospende completamente le particelle magnetiche. Seguire le istruzioni indicate nel Manuale operativo dell analizzatore per caricare i campioni ed iniziare il test. Analizzatore LIAISON XL L analizzatore LIAISON XL è dotato di un dispositivo magnetico a stato solido incorporato che favorisce la dispersione delle microparticelle prima del posizionamento di un integrale di reattivi nell area reattivi dello strumento. Per ulteriori dettagli fare riferimento al manuale operativo dell analizzatore. a. Inserire l integrale di reattivi nell apposita fessura. b. Lasciare l integrale di reattivi nel dispositivo magnetico a stato solido per almeno 30 secondi (massimo alcuni minuti). Ripetere secondo necessità. Posizionare l integrale di reattivi nell area reattivi dell analizzatore con l etichetta del codice a barre rivolta verso sinistra e lasciare riposare per 15 minuti prima dell uso. Lo strumento mescola automaticamente e risospende completamente le particelle magnetiche. Seguire le istruzioni indicate nel Manuale operativo dell analizzatore per caricare i campioni ed iniziare il test. 7. CONSERVAZIONE E STABILITÀ DELL'INTEGRALE DI REAGENTI Alla consegna, l'integrale di reagenti deve essere conservato al buio e mantenuto in posizione verticale per facilitare la risospensione delle particelle magnetiche. Se l integrale è conservato sigillato, i reagenti sono stabili a 2-8 C fino alla data di scadenza. Non congelare. L integrale di reagenti non deve essere usato dopo la data di scadenza riportata sulle etichette del kit e dell integrale. Dopo l apertura, gli integrali di reagenti possono essere riposti nella scatola del kit e conservati in posizione verticale ad una temperatura di 2-8 C oppure collocati sull analizzatore LIAISON o sull analizzatore LIAISON XL. Gli integrali correttamente conservati hanno una stabilità dopo l apertura di 4 settimane. Consultare la sezione 10 per verificare gli intervalli di calibrazione. 8. PRELIEVO E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI Con questo kit si può usare siero umano o plasma con EDTA. Prelevare un campione di sangue con tecniche asettiche mediante venipuntura. Lasciare coagulare i campioni di siero e separare il siero dal coagulo il più presto possibile dopo il prelievo. Chiarificare per filtrazione o centrifugazione prima del test i campioni che presentano materiale in sospensione (particolato), opalescenza, lipemia o residui eritrocitari. Non usare campioni fortemente emolizzati o lipemici, né campioni che presentano materiale in sospensione o evidente contaminazione microbica. Il volume minimo richiesto è di 350 µl. Eliminare le bolle d'aria eventualmente presenti prima del dosaggio. I campioni di siero o plasma con EDTA sono stabili per massimo 7 ore a temperatura ambiente e per massimo di 24 ore a una temperatura di 2-8 C. Se i campioni sono stati scongelati, agitarli con cura prima di dosarli. I campioni possono essere sottoposti a 3 cicli di congelamento-scongelamento. I campioni congelati sono stabili per un massimo di 6 mesi a una temperatura di -20 C. Accertarsi che i campioni giungano a destinazione entro i tempi di seguito indicati: 1) Non spedire il siero sul coagulo o campioni con EDTA sulle cellule. 2) Il siero e il plasma con EDTA devono essere separati dalle cellule/dal coagulo, congelati a una temperatura di -20 C o inferiore e spediti con ghiaccio secco. Il livello di temperatura per tutta la durata della spedizione non deve superare (essere più di caldo di) -20 C. 9. CALIBRATORI LIVELLO 1 E 2 I calibratori LIAISON 1-84 PTH sono forniti liofilizzati. Ricostituire ogni flacone con 2,0 ml di acqua distillata o deionizzata. Lasciare riposare i flaconi per 5 minuti a temperatura ambiente, mescolare delicatamente per inversione per 30 minuti prima dell'uso. Trasferire almeno 650 µl (calibrazione in triplicato ) in una provetta di vetro o plastica. Applicare sulla provetta l'etichetta con il codice a barre appropriata. Collocare la provetta nell Analizzatore LIAISON 0 nell Analizzatore LIAISON XL. Calibrare come descritto nel Manuale Operativo LIAISON. I calibratori LIAISON 1-84 PTH devono essere aliquotati dopo la ricostituzione nel caso in cui non vengano immediatamente dosati. È stato dimostrato che i calibratori 1-84 PTH sono stabili per 1 ora se conservati a temperatura ambiente (18-22 C). I calibratori liquidi rimanenti devono essere aliquotati in un minimo di 650 µl e congelati. Possono essere usati per 1 ciclo di congelamento-scongelamento e conservati sino a 2 mesi ad una -20 C. Il calibratore e il lotto dell'integrale di reagenti sono specifici per il lotto del kit. Non utilizzare calibratori associati a un diverso lotto di reagenti nello stesso test. 4 / 10 IT

7 10. CALIBRAZIONE Ai singoli integrali di reagenti LIAISON 1-84 PTH è applicata un etichetta con codice a barre riportante informazioni specifiche per la calibrazione di quel particolare lotto di integrale di reagenti. Il test dei calibratori specifici per il dosaggio consente di regolare la curva principale (master curve) assegnata in base ai valori RLU (relative light units, unità relative di luce) rilevati. Ogni soluzione di calibrazione consente di eseguire 4 calibrazioni. Una ritaratura in triplicato si rende necessaria ogniqualvolta si verifica una delle condizioni seguenti: Quando viene caricato un nuovo lotto di reagenti (integrale di reagenti o reagenti starter). Ogni 28 giorni se conservati ad una temperatura di 2-8 C dopo ogni utilizzo. Ogni 7 giorni se conservati sull Analizzatore LIAISON o Analizzatore LIAISON XL. Dopo che sull'analizzatore LIAISON o Analizzatore LIAISON XL è stato effettuato un intervento di assistenza tecnica. Se i valori ottenuti dai controlli di qualità risultano fuori limite. Intervallo di misurazione. Il test DiaSorin LIAISON 1-84 PTH prevede l intervallo di misurazione compreso fra 4 e 1800 pg/ml. 11. PROCEDIMENTO OPERATIVO Per ottenere prestazioni analitiche ideali, è necessario attenersi scrupolosamente al Manuale operativo dello strumento LIAISON. LIAISON Analyzer. Tutti i parametri del test vengono identificati attraverso i codici a barre riportati sull etichetta dell integrale di reattivi. Nel caso in cui il codice a barre non possa essere letto dallo strumento, l integrale non può essere usato. Non gettare l integrale; contattare il supporto tecnico DiaSorin locale per istruzioni. LIAISON XL Analyzer. Tutti i parametri del test vengono identificati dalle informazioni codificate nel Tag per identificazione a radiofrequenza (Radio Frequency IDentification transponder, RFID Tag) nell integrale di reattivi. Nel caso in cui il RFID Tag non possa essere letto, l integrale non può essere usato. Non gettare l integrale; contattare il supporto tecnico DiaSorin locale per istruzioni. Nel caso in cui i codici a barre esterni dei calibratori non potessero essere letti, i dati presenti sulle etichette esterne dei calibratori (sotto il codice a barre) possono essere inseriti manualmente nella serie LIAISON. Fare riferimento al manuale operativo dello strumento per informazioni più dettagliate. Le LIAISON Analyzer operazioni da eseguire con lo strumento sono le seguenti: 1. Versare calibratori, controlli o campioni nel modulo di reazione. 2. Versare il tampone per il dosaggio e il coniugato. 3. Incubare. 4. Versare le particelle magnetiche rivestite nel modulo di reazione. 5. Incubare. 6. Lavare con la soluzione di lavaggio/sistema. 7. Aggiungere i reagenti starter e misurare la luce emessa. Le LIAISON XL Analyzer operazioni da eseguire con lo strumento sono le seguenti: 1. Versare il tampone per il dosaggio e il coniugato. 1. Versare calibratori, controlli o campioni nel modulo di reazione. 3. Incubare. 4. Versare le particelle magnetiche rivestite nel modulo di reazione. 5. Incubare. 6. Lavare con la soluzione di lavaggio/sistema. 7. Aggiungere i reagenti starter e misurare la luce emessa. 12. CONTROLLO DI QUALITÀ Il controllo di qualità deve essere eseguito una volta al giorno per ogni giorno di utilizzo oppure secondo quando indicato nelle linee guida o secondo i requisiti delle norme locali o degli enti di accreditamento. Si raccomanda all'operatore di consultare la documentazione CLSI C24-A3 e 42 CFR (c) per le direttive sulle pratiche idonee di controllo della qualità. Il LIAISON 1-84 PTH Kit Control Set (310631) serve per controllare un eventuale malfunzionamento sostanziale dei reagenti. I controlli LIAISON devono essere dosati in singolo per monitorare le prestazioni del test. Se i valori dei controlli rientrano nei range attesi indicati nel certificato di analisi, il test è valido. Se i valori dei controlli sono al di fuori dei range attesi, il test non è valido e i risultati dei pazienti non possono essere riportati. Nel caso in cui si osservi un insuccesso del controllo, si dovrà eseguire una ricalibrazione del saggio e dovranno essere ripetute le analisi dei controlli e dei campioni dei pazienti. 5 / 10 IT

8 Devono essere valutate le prestazioni di altri controlli per assicurarne la compatibilità con questo test prima dell'uso. È indispensabile stabilire intervalli di valori appropriati per tutti i materiali utilizzati per il controllo di qualità. L intervallo delle concentrazioni di ogni controllo è stampato sul certificato di analisi e indica i limiti stabiliti da DiaSorin per i valori dei controlli ottenuti con dosaggi affidabili. 13. INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI L Analizzatore LIAISON calcola automaticamente la concentrazione di PTH nei campioni. Questa concentrazione è espressa in pg/ml. Per convertire i risultati in unità di misura SI, usare la seguente formula: pg/ml x 0,106 = pmol/l. I calibratori e i controlli possono produrre diversi valori RLU o risultati di dosaggio su LIAISON e LIAISON XL, ma i risultati per il paziente sono equivalenti. 14. LIMITI DEL DOSAGGIO 1. I risultati devono essere valutati insieme ad altri riscontri clinici e laboratoristici al fine di aiutare il medico a prendere decisioni riguardo al trattamento di ogni singolo paziente. 2. Una buona tecnica ed una rigida osservanza delle istruzioni sono requisiti indispensabili per ottenere risultati affidabili. 3. I campioni fortemente emolizzati, itterici o lipemici e i campioni che presentano materiale in sospensione o evidente contaminazione microbica non sono raccomandati e non dovrebbero essere testati. 4. Contaminazione batterica o cicli ripetuti di congelamento e scongelamento dei campioni possono influenzare i risultati del test. 5. Non riscaldare siero inattivato o plasma con EDTA. Non è possibile scambiare gli integrali fra analizzatori di tipo diverso (LIAISON e LIAISON XL). Una volta che un integrale è stato inserito in un particolare tipo di analizzatore dovrà sempre essere utilizzato su di esso sino ad esaurimento. A causa dei problemi di rintracciabilità derivanti dalla precedente affermazione, non potranno essere conclusi follow-up dei pazienti fra tipi di analizzatori diversi ma dovranno essere eseguiti su un tipo di analizzatore specifico (LIAISON o LIAISON XL). 15. VALORI PREVISTI Per stabilire il range di valori di riferimento per il test LIAISON 1-84 PTH sono stati utilizzati campioni di siero e plasma con EDTA accoppiati ottenuti da 125 soggetti adulti apparentemente sani provenienti dal Midwest negli Stati Uniti. Campione Concentrazione mediana per il PTH 1-84 Intervallo osservato 95% (pg/ml) Siero (125) 15,3 pg/ml 6,5-36,8 pg/ml Plasma con EDTA (125) 16,1 pg/ml 6,7-38,8 pg/ml Campione Intervallo assoluto Siero (125) 4,6-58,1 pg/ml Plasma con EDTA (125) 4,0-57,1 pg/ml Campione Intervallo assoluto con livelli di 25-OH vitamina D dei soggetti >30 ng/ml Siero (82) 4,6-38,4 pg/ml Plasma con EDTA (82) 4,0-39,4 pg/ml Campione Range assoluto con livelli di 25-OH vitamina D dei soggetti >30 ng/ml e 8,5 mg/dl calcio totale 10,1 mg/dl Siero (74) 5,5-38,4 pg/ml Plasma con EDTA (74) 4,6-39,4 pg/ml Considerare questi limiti solo a titolo di riferimento. È importante che ogni laboratorio stabilisca un intervallo di riferimento proprio. 6 / 10 IT

9 16. CARATTERISTICHE SPECIFICHE DELLE PERFORMANCE 16.1 Correlazione tra pazienti/comparazione metodologica: 206 campioni di plasma con EDTA (199 campioni clinici + 7 campioni di PTH 1-84 arricchiti) sono stati complessivamente testati con il test LIAISON 1-84 PTH e con un altro metodo IRMA manuale in osservanza al documento CLSI EP9 ed hanno prodotto la seguente comparazione; LIAISON 1-84 PTH = 1,02 (metodo di riferimento) - 5,2; R = 0,981. Valore per il LIAISON 1-84 PTH (pg/ml) 1800 Correlazione metodologica: Test LIAISON 1-84 PTH rispetto al metodo di riferimento IRMA LIAISON = 1,02(metodo di riferimento) - 5, R = 0, Valore del PTH per il metodo di riferimento IRMA (pg/ml) 16.2 Precisione con l analizzatore LIAISON : Due controlli del kit e 7 campioni contenenti concentrazioni di analita preparate in modo da coprire l intero range del test sono stati esaminati in duplicato, due volte al giorno, per venti giorni lavorativi su due strumenti LIAISON utilizzando un unico lotto di reagenti, onde stabilire la ripetibilità e la riproducibilità del test LIAISON 1-84 PTH. Ripetibilità Campione KC 1 KC Numero di determinazioni Media (pg/ml) 25, ,2 21,2 39, Deviazione standard (pg/ml) 1,22 9,50 0,73 1,14 1,34 5,97 15,55 39,56 70,48 Coefficiente di variazione (%CV) 4,7% 3,8% 5,9% 5,4% 3,4% 3,0% 3,8% 3,5% 3,8% Riproducibilità Campione KC 1 KC Numero di determinazioni Media (pg/ml) 25, ,2 21,2 39, Deviazione standard (pg/ml) 2,14 15,28 1,10 1,76 2,54 10,67 29,7 61,9 104,3 Coefficiente di variazione (%CV) 8,5% 6,2% 9,0% 8,3% 6,5% 5,4% 7,1% 5,5% 5,6% 16.3 Precisione con l analizzatore LIAISON XL: Due controlli del kit e 7 campioni contenenti concentrazioni di analita preparate in modo da coprire l intero range del test sono stati esaminati in duplicato, due volte al giorno, per venti giorni lavorativi su due strumenti LIAISON utilizzando un unico lotto di reagenti, onde stabilire la ripetibilità e la riproducibilità del test LIAISON 1-84 PTH. Ripetibilità Campione KC 1 KC Numero di determinazioni Media (pg/ml) 28,5 288,5 10,6 16,6 33,5 171,3 377,7 876, Deviazione standard (pg/ml) 1,4 13,8 0,46 0,60 1,0 6,5 12,4 32,4 51,6 Coefficiente di variazione (%CV) 4,9% 4,8% 4,3% 3,6% 3,1% 3,8% 3,3% 3,7% 3,1% 7 / 10 IT

10 Riproducibilità Campione KC 1 KC Numero di determinazioni Media (pg/ml) 28,5 288,5 10,6 16,6 33,5 171,3 377,7 876, Deviazione standard (pg/ml) 2,0 16,2 0,59 0,79 1,4 8,6 15,3 38,9 78,0 Coefficiente di variazione (%CV) 7,2% 5,6% 5,5% 4,7% 4,1% 5,0% 4,0% 4,4% 4,7% La tabella di seguito riportata riassume la precisione che è possibile prevedere nel corso del test con un numero di cicli di analisi e/o di strumenti inferiore. Livello Ripetibilità prevista Riproducibilità prevista 4-20 pg/ml 10% 12% pg/ml 6% 9% 16.4 LoQ (o sensibilità funzionale): In base ad un metodo adattato dal documento CLSI EP17, la sensibilità funzionale per il test LIAISON 1-84 PTH, è definita come la concentrazione alla quale il CV (%) inter-analitico supera il 20%. La sensibilità funzionale ottenuta dall'analisi di regressione del profilo di precisione è 4 pg/ml Sensibilità analitica: In base ad un metodo adattato dal documento CLSI EP17, la sensibilità analitica per il test LIAISON 1-84 PTH, definita come la dose minima rilevabile che è possibile distinguere da zero di 2 deviazioni standard, è 1,7 pg/ml Test di diluizione per l'esattezza del dosaggio: Cinque campioni di ciascun tipo, plasma con EDTA e siero, sono stati diluiti ed analizzati con il test LIAISON 1-84 PTH in osservanza al documento CLSI EP6-A. I risultati per ciascun tipo di campione sono stati analizzati in termini di regressione lineare della concentrazione di PTH osservata rispetto alla concentrazione di PTH prevista. L equazione risultante per i campioni di plasma con EDTA è la seguente: PTH osservato = 1,00 (PTH previsto) - 18,8, R = 0,999. L equazione risultante per i campioni di siero è la seguente: PTH osservato = 1,00 (PTH previsto) - 15,9, R = 0,999. Test di diluizione per l'esattezza del dosaggio 2500 Osservato = 1,00 (previsto) 18,8 R = 0,999 Concentrazione di PTH osservata (pg/ml) Osservato = 1,00 (previsto) - 15,9 R = 0,999 Campioni di EDTA Campioni di siero Concentrazione di PTH prevista (pg/ml) 8 / 10 IT

11 16.7 Recupero Tre campioni sierici arricchiti ad alta concentrazione e campioni con EDTA arricchiti e 3 campioni sierici a bassa concentrazione e campioni con EDTA sono stati analizzati puri. Successivamente sono stati preparati i campioni di recupero miscelando percentuali definite dei campioni ad alta e a bassa concentrazione e analizzandoli in cinque replicati. Campioni di siero Campione di siero ad alta concentrazione 1 (HS1) 2 HS1 : 1LS1 1 HS1 : 1LS1 1 HS1 : 2LS1 Campione di siero a bassa concentrazione 1 (LS1) Campione di siero ad alta concentrazione 2 (HS2) 2 HS2 : 1LS2 1 HS2 : 1LS2 1 HS2 : 2LS2 Campione di siero a bassa concentrazione 2 (LS2) Campione di siero ad alta concentrazione 3 (HS3) 2 HS3 : 1LS3 1 HS3 : 1LS3 1 HS3 : 2LS3 Campione di siero a bassa concentrazione 3 (LS3) Concentrazione definita , , ,9 Prevista pg/ml Osservata pg/ml % recupero 101% 91% 94% 98% 95% 97% 103% 97% 101% Recupero medio 98% DS 0,037 Campioni di plasma con EDTA Campione con EDTA ad alta concentrazione 1 (HS1) 2 HS1 : 1LS1 1 HS1 : 1LS1 1 HS1 : 2LS1 Campione con EDTA a bassa concentrazione 1 (LS1) Campione con EDTA ad alta concentrazione 2 (HS2) 2 HS2 : 1LS2 1 HS2 : 1LS2 1 HS2 : 2LS2 Campione con EDTA a bassa concentrazione 2 (LS2) Campione con EDTA ad alta concentrazione 3 (HS3) 2 HS3 : 1LS3 1 HS3 : 1LS3 1 HS3 : 2LS3 Campione con EDTA a bassa concentrazione 3 (LS3) Concentrazione definita , , ,52 Prevista pg/ml Osservata pg/ml % Recupero 94% 91% 92% 94% 94% 93% 94% 88% 94% Recupero medio 93% DS 0, Specificità La reattività crociata del test LIAISON 1-84 PTH rispetto ai frammenti di PTH umano indicati di seguito è stata misurata a concentrazioni di pg/ml per ciascun frammento. Frammento % Reattività crociata hpth % hpth % hpth % hpth % hpth % hpth % hpth % 16.9 Effetto gancio a dosi elevate: Non è stato osservato nessun effetto gancio a dosi elevate con concentrazioni di PTH fino a pg/ml. 9 / 10 IT

12 16.10 Sostanze interferenti Studi controllati su sostanze potenzialmente interferenti a due livelli di PTH non hanno evidenziato alcuna interferenza alla concentrazione massima per ogni sostanza di seguito elencata nel test LIAISON 1-84 PTH. Il test era basato sul documento CLSI-EP7-A2. Farmaco/Sostanza Emoglobina Bilirubina Trigliceridi Colesterolo Albumina Acetaminofene Alendronato Aspirina Etidronato Ibuprofene Pamidronato Risedronato Vitamina D2 Vitamina D3 Calcitriolo Alfacalcidolo Fattore reumatoide Concentrazione testata 200 mg/dl 20 mg/dl mg/dl 500 mg/dl mg/dl 35 mg/dl 8 mg/dl 50 mg/dl 105 mg/dl 40 mg/dl 18 mg/dl 6 mg/dl 240 ng/ml 240 ng/ml 1 ng/ml 2,5 ng/ml 1080 IU/ml 17. References/Bibliografia/Bibliographie/Referenzen/Referencias/Referências/Referenser/ Referencer/Irodalom/Literatura/Referanser/Bibliografia/Referencie/Referinte/ЛИТЕРАТУРА/ Βιβλιογραφια αναφορές 1. Moe SM, Drueke TB 2009 KDIGO Clinical Guidelines for the diagnosis, Evaluation, Prevention and treatment of Chronic Kidney Disease-Mineral and Bone Disorder (CKD-MBD) Kidney International, 76, Supplement 113, S1 S130. Summary and Explanation of the Test section has been paraphrased from 3.1, pp. S28-S Blumsohn A. Al Hadan A 2002 Parathyroid Hormone: What Are We Measuring and Does It Matter? Annals of Clinical Biochemistry 39. pp Segre GV, Niall HD, Habener JF, Potts Jr, JT 1974 Metabolism of Parathyroid Hormone: Physiologic and Clinical Significance Am J Med 56(6), Moe SM, Sprague SM Chapter 52: Mineral Bone Disorders in Chronic Kidney Disease. In: Brenner and Rector s The Kidney, 8 th Edition, WB Saunders Company, Philadelphia, PA. 2007, pp Souberbielle JC et al 2006 Inter-Method Variability of PTH Measurement: Implication for the Care of CKD Patients Kidney International 70(2), Cantor T 2005 Parathyroid Hormone Assay Drift: An Unappreciated Problem in Dialysis Patient Management Seminars in Dialysis 18(5): IFU: Whole PTH TM (1-84) Specific Immunoradiometric (IRMA) Assay, Scantibodies Laboratory Inc. (Part Number: 3KG056). DiaSorin Inc Northwestern Avenue P.O. Box 285 Stillwater, MN DiaSorin S.p.A., Saluggia (VC) Italy 10 / 10 IT

13 DiaSorin Inc 1951 Northwestern Ave - Stillwater, MN USA Tel Fax Modifiche: 3 Soppressioni: LIAISON 1-84 PTH Specimen Diluent (REF ) 1. USO PREVISTO Il diluente per campioni LIAISON 1-84 PTH Specimen Diluent deve essere usato con il test LIAISON 1-84 PTH per diluire i campioni dei pazienti con livelli elevati di PTH 1-84 > 1800 pg/ml. Il Set di diluenti per campioni LIAISON 1-84 PTH è concepito per l uso con il saggio LIAISON 1-84 PTH (310630) e la famiglia di Analizzatori a LIAISON. 2. MATERIALI FORNITI IN DOTAZIONE 4 flaconi da 3 ml ciascuno, contenenti siero equino con additivi stabilizzatori e 0,2% di ProClin AVVERTENZE E PRECAUZIONI Sicurezza generale: Tutti i campioni, tutti i reagenti biologici e tutti i materiali usati per effettuare il dosaggio devono essere considerati potenzialmente in grado di trasmettere agenti infettivi. Evitare il contatto con la pelle, gli occhi o le mucose. Durante l'esecuzione del test seguire le abituali pratiche di igiene industriale. Non mangiare, bere, fumare o applicare cosmetici nel laboratorio in cui si esegue il dosaggio. Non pipettare soluzioni con la bocca. Evitare il contatto con qualsiasi tipo di materiale potenzialmente infettivo indossando camici da laboratorio, protezioni per gli occhi/il viso e guanti monouso. Lavare accuratamente le mani al termine di ciascun dosaggio. Evitare schizzi o la formazione di aerosol quando si maneggiano, diluiscono o trasferiscono campioni o reagenti. Eventuali perdite di reagente dovranno essere decontaminate con una soluzione di candeggina al 10% (ipoclorito di sodio 0,5%) e smaltite come potenzialmente infettive. I materiali di rifiuto devono essere smaltiti secondo le disposizioni vigenti e le linee guida impartite dagli enti competenti nel territorio dove ha sede il laboratorio e secondo la regolamentazione vigente in ciascun paese. Non usare kit o componenti dopo la data di scadenza indicata sull'etichetta. Informazioni sui pericoli chimici e di sicurezza: I reagenti di questo kit sono classificati in base allo standard US OSHA Hazard Communication; alle leggi sul diritto di conoscenza dei singoli stati USA; alle regolamentazioni sul controllo dei prodotti del Canadian Centre for Occupational Health and Safety e alle direttive applicabili dell'unione Europea (vedere la scheda dati di sicurezza del materiale per ulteriori informazioni). GHS/CLP: ProClin CAS No.: Reagenti: [DIL SPE] Classificazione: Sensibilizzazione cutanea, categoria di pericolo 1 Avvertenza: Attenzion Pittogramma: Indicazione Di Pericolo: Consigli Di Prudenza: GHS07 Punto esclamativo H317 - Può provocare una reazione allergica cutanea. P261 Evitare di respirare la nebbia/ gli aerosol. P272 Gli indumenti da lavoro contaminati non devono essere portati fuori dal luogo di lavoro. P280 Indossare guanti/ indumenti protettivi/ Proteggere gli occhi. LIAISON 1-84 PTH Specimen Diluent (REF ) 1 / 2 IT

14 4. PREPARAZIONE ED USO Il diluente per campioni è fornito in forma liquida ed è pronto per l'uso. Il rapporto di diluizione consigliato per i campioni del paziente ad alta concentrazione è di 1:2 o 1:4. I risultati finali dei campioni devono essere corretti in base al fattore di diluizione. Esempio 1:2: 200 µl di campione del paziente ad alta concentrazione μl di diluente. Esempio 1:4: 100 µl di campione del paziente ad alta concentrazione µl di diluente. 5. CONSERVAZIONE Alla consegna, conservare il diluente per campioni a 2-8 C. Se correttamente conservato a 2-8 C, il diluente per campioni rimane stabile fino alla data di scadenza impressa sui flaconi. Se correttamente conservato a 2-8 C, il diluente per campioni rimane stabile per 4 settimane dall apertura. La presenza di materiali in sospensione (particolato) nel liquido o una deviazione significativa rispetto ai risultati precedenti, possono essere elementi indicativi del deterioramento del prodotto. 6. LIMITI I campioni di plasma con EDTA diluiti con il diluente per campioni devono essere conservati in ghiaccio dopo la diluizione e testati immediatamente (entro 60 minuti). ProClin 300 è un marchio registrato di Rohm and Haas Co. DiaSorin Inc Northwestern Avenue P.O. Box 285 Stillwater, MN DiaSorin S.p.A., Saluggia (VC) Italy LIAISON 1-84 PTH Specimen Diluent (REF ) 2 / 2 IT