Citogenetica costituzionale

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1 Pagina 1 di 24 Citogenetica costituzionale CARIOTIPO AD ALTA RISOLUZIONE DA SANGUE FETALE CARIOTIPO AD ALTA RISOLUZIONE LINFOCITI FETALI 8 GAW Vedi "Cariotipo standard da sangue fetale". L'esame è indicato in caso di presenza di malformazioni fetali. CARIOTIPO AD ALTA RISOLUZIONE DA SANGUE PERIFERICO CARIOTIPO AD ALTA RISOLUZIONE SANGUE PERIFERICO 40 coltura 48 h e coltura sincronizzata 72 h Risoluzione bande (ISCN 2013) 550 GAW Il bandeggio utilizzato può essere GAW o GTG. Vedi "Cariotipo standard da sangue periferico". L'esame è indicato in caso di ritardo mentale associato a dismorfismi/malformazioni. CARIOTIPO AD ALTA RISOLUZIONE E MOSAICISMO DA SANGUE FETALE CARIOTIPO AD ALTA RISOLUZIONE LINFOCITI FETALI 8 coltura sincronizzata 72 h Risoluzione bande (ISCN 2013) 550 GAW Il bandeggio utilizzato può essere GAW o GTG. Vedi "Cariotipo standard da sangue fetale". L'esame è indicato in caso di presenza di malformazioni fetali STUDIO MOSAICISMO CROMOSOMICO 40 coltura 48 h e coltura sincronizzata 72 h Risoluzione bande (ISCN 2013) 550 coltura sincronizzata 72 h Il bandeggio utilizzato può essere GAW o GTG. Per i Linfociti Fetali la prestazione viene erogata in 8 giorni.

2 Pagina 2 di 24 CARIOTIPO AD ALTA RISOLUZIONE E MOSAICISMO DA SANGUE PERIFERICO CARIOTIPO AD ALTA RISOLUZIONE SANGUE PERIFERICO 40 GAW Vedi "Cariotipo standard da sangue periferico". L'esame è indicato in caso di ritardo mentale associato a dismorfismi/malformazioni STUDIO MOSAICISMO CROMOSOMICO 40 CARIOTIPO STANDARD DA LIQUIDO AMNIOTICO CARIOTIPO DA LIQUIDO AMNIOTICO 21 coltura sincronizzata 72 h Risoluzione bande (ISCN 2013) 550 coltura sincronizzata 72 h Il bandeggio utilizzato può essere GAW o GTG. Per i Linfociti Fetali la prestazione viene erogata in 8 giorni. ACCETTAZIONE: la richiesta deve essere inserita nel sistema informatico dalla struttura richiedente, indicando sempre le "Motivazioni prelievo". PRELIEVO: I primi 2 ml prelevati NON devono essere inseriti nel campione destinato all'analisi citogenetica. Inviare 2 provette sterili di polistirene, tappo a vite da 15 ml (totale ml). DOCUMENTAZIONE DA ALLEGARE AI CAMPIONI: 1) modulo AVR-PPC M/P01/12 "Acquisizione consenso al test genetico" firmato da Medico e paziente 2) modulo AVR-PPC M/P01/18 "Richiesta esame citogenetico prenatale" 3) fotocopia dell impegnativa ed eventualmente ricevuta ticket se dovuto (si raccomanda di riportare esattamente le diciture complete sulla impegnativa ( coltura e analisi del cariotipo ). Nota: In caso di richieste inserite nel sistema informatico per le quali non venga eseguito il prelievo, compilare il modulo M/P01/07 "Liquido amniotico non inviato". CARIOTIPO STANDARD DA MATERIALE ABORTIVO NON PLACENTARE CARIOTIPO SU MATERIALE ABORTIVO NON PLACENTARE CARIOTIPO STANDARD DA METAFASI DI FIBROBLASTI 9150 CARIOTIPO DA METAFASI DI FIBROBLASTI coltura in situ coltura da espianto CONSERVAZIONE: I campioni devono essere mantenuti nel range di temperatura fra 19 C e 36 C. TRASPORTO: Per i contenitori di trasporto da utilizzare e le modalità di invio vedi "Cariotipo m.abort.placentare" oppure "Campioni di Citogenetica" nel "Manuale prelievi e raccolta campioni". Vedi "Cariotipo su m.abort.placentare" ad eccezione della: RACCOLTA MATERIALE: il materiale idoneo per l'analisi citogenetica (frammenti di cute o tessuto parenchimale o frammenti di cordone ombelicale) deve essere posto in contenitori sterili (provetta 50 ml tappo a vite o, in mancanza, contenitore sterile per urine) contenente preferibilmente terreno di coltura RPMI 1640 (richiedibile al laboratorio di Citogenetica) o, in mancanza, soluzione fisiologica sterile (non adeguata per conservazione superiore alle 4 ore). Utilizzare un contenitore diverso per ogni tipo di tessuto raccolto.

3 Pagina 3 di 24 CARIOTIPO STANDARD DA SANGUE FETALE CARIOTIPO DA SANGUE FETALE 8 ACCETTAZIONE: L'esame deve essere concordato con il laboratorio ( ) che provvede all'inserimento della richiesta nel sistema informatico. DOCUMENTAZIONE DA ALLEGARE AI CAMPIONI 1) modulo AVR-PPC M/P01/12 "Acquisizione consenso al test genetico" firmato da Medico e paziente 2) modulo AVR-PPC M/P01/18 "Richiesta esame citogenetico prenatale" 3) fotocopia dell impegnativa (si raccomanda di riportare esattamente le diciture complete sulla impegnativa: coltura e analisi del cariotipo ). CARIOTIPO STANDARD DA SANGUE PERIFERICO CARIOTIPO DA SANGUE PERIFERICO coltura 48 h e coltura sincronizzata 72 h CONSERVAZIONE: I campioni devono essere mantenuti nel range di temperatura fra 19 C e 36 C. TRASPORTO: Per i contenitori di trasporto da utilizzare e le modalità di invio vedi "Cariotipo m.abort.placentare" oppure "Campioni di Citogenetica" nel "Manuale prelievi e raccolta campioni". ACCETTAZIONE: L'esame deve essere prenotato al numero telefonico La richiesta deve essere inserita nel sistema informatico dalla struttura richiedente, indicando sempre le "Motivazioni prelievo". DOCUMENTAZIONE DA ALLEGARE AI CAMPIONI Pazienti ricoverati: 1) modulo AVR-PPC M/P01/12 "Acquisizione consenso al test genetico" firmato da Medico e paziente 2) modulo AVR-PPC M/P01/19 "Richiesta esame citogenetico sangue periferico". Pazienti ambulatoriali: 1) modulo AVR-PPC M/P01/12 "Acquisizione consenso al test genetico" firmato da Medico e paziente 2) modulo AVR-PPC M/P01/19 "Richiesta esame citogenetico sangue periferico". 3) fotocopia dell impegnativa ed eventualmente ricevuta ticket se dovuto (si raccomanda di riportare esattamente le diciture complete sulla impegnativa: coltura e analisi del cariotipo ). Alternativamente i pazienti ambulatoriali (sempre prenotati) possono recarsi presso gli ambulatori di consulenza genetica con la sola impegnativa (indicare in tal caso sulla impegnativa anche la motivazione di invio) nel giorno programmato: in tal caso la documentazione sarà a cura dell ambulatorio di consulenza genetica. coltura sincronizzata 72 h CONSERVAZIONE: I campioni devono essere mantenuti nel range di temperatura fra 19 C e 36 C. TRASPORTO: Per i contenitori di trasporto da utilizzare e le modalità di invio vedi "Cariotipo m.abort.placentare" oppure "Campioni di Citogenetica" nel "Manuale prelievi e raccolta campioni".

4 Pagina 4 di 24 CARIOTIPO STANDARD DA VILLI CORIALI (dir+mesench) Cariot.villi cor(met.dir+colt) CARIOTIPO DA CELLULE MESENCHIMALI DEL VILLO 21 ACCETTAZIONE: la richiesta deve essere inserita nel sistema informatico dalla struttura richiedente, indicando sempre le "Motivazioni prelievo". PRELIEVO: inviare 1 provetta sterile di polistirene contenente terreno di trasporto (fornito dal laboratorio) con un minimo di mg di villi coriali DOCUMENTAZIONE DA ALLEGARE AI CAMPIONI: 1) modulo AVR-PPC M/P01/12 "Acquisizione consenso al test genetico" firmato da Medico e paziente 2) modulo AVR-PPC M/P01/18 "Richiesta esame citogenetico prenatale" 3) fotocopia dell impegnativa ed eventualmente ricevuta ticket se dovuto (si raccomanda di riportare esattamente le diciture complete sulla impegnativa ( coltura e analisi del cariotipo ). Nota: In caso di richieste inserite nel sistema informatico per le quali non venga eseguito il prelievo, compilare il modulo M/P01/07 "Liquido amniotico non inviato". 00 CARIOTIPO DA METAFASI SPONTANEE DI VILLI CORIALI CARIOTIPO STANDARD E MOSACICISMO DA METAFASI DI FIBROBLASTI 9150 CARIOTIPO DA METAFASI DI FIBROBLASTI STUDIO MOSAICISMO CROMOSOMICO Coltura mesenchimale coltura semidiretta Risoluzione bande (ISCN 2013) 0 coltura sincronizzata 72 h CONSERVAZIONE: I campioni devono essere mantenuti nel range di temperatura fra 19 C e 36 C. TRASPORTO: Per i contenitori di trasporto da utilizzare e le modalità di invio vedi "Cariotipo m.abort.placentare" oppure "Campioni di Citogenetica" nel "Manuale prelievi e raccolta campioni". Per i Linfociti Fetali la prestazione viene erogata in 8 giorni.

5 Pagina 5 di 24 CARIOTIPO STANDARD E MOSAICISMO DA SANGUE FETALE CARIOTIPO DA SANGUE FETALE 8 ACCETTAZIONE: L'esame deve essere concordato con il laboratorio ( ) che provvede all'inserimento della richiesta nel sistema informatico. DOCUMENTAZIONE DA ALLEGARE AI CAMPIONI 1) modulo AVR-PPC M/P01/12 "Acquisizione consenso al test genetico" firmato da Medico e paziente 2) modulo AVR-PPC M/P01/18 "Richiesta esame citogenetico prenatale" 3) fotocopia dell impegnativa (si raccomanda di riportare esattamente le diciture complete sulla impegnativa: coltura e analisi del cariotipo ) STUDIO MOSAICISMO CROMOSOMICO 40 coltura 48 h e coltura sincronizzata 72 h CARIOTIPO STANDARD E MOSAICISMO DA SANGUE PERIFERICO CARIOTIPO DA SANGUE PERIFERICO coltura sincronizzata 72 h CONSERVAZIONE: I campioni devono essere mantenuti nel range di temperatura fra 19 C e 36 C. TRASPORTO: Per i contenitori di trasporto da utilizzare e le modalità di invio vedi "Cariotipo m.abort.placentare" oppure "Campioni di Citogenetica" nel "Manuale prelievi e raccolta campioni". Per i Linfociti Fetali la prestazione viene erogata in 8 giorni. ACCETTAZIONE: L'esame deve essere prenotato al numero telefonico La richiesta deve essere inserita nel sistema informatico dalla struttura richiedente, indicando sempre le "Motivazioni prelievo". DOCUMENTAZIONE DA ALLEGARE AI CAMPIONI Pazienti ricoverati: 1) modulo AVR-PPC M/P01/12 "Acquisizione consenso al test genetico" firmato da Medico e paziente 2) modulo AVR-PPC M/P01/19 "Richiesta esame citogenetico sangue periferico". Pazienti ambulatoriali: 1) modulo AVR-PPC M/P01/12 "Acquisizione consenso al test genetico" firmato da Medico e paziente 2) modulo AVR-PPC M/P01/19 "Richiesta esame citogenetico sangue periferico". 3) fotocopia dell impegnativa ed eventualmente ricevuta ticket se dovuto (si raccomanda di riportare esattamente le diciture complete sulla impegnativa: coltura e analisi del cariotipo ). Alternativamente i pazienti ambulatoriali (sempre prenotati) possono recarsi presso gli ambulatori di consulenza genetica con la sola impegnativa (indicare in tal caso sulla impegnativa anche la motivazione di invio) nel giorno programmato: in tal caso la documentazione sarà a cura dell ambulatorio di consulenza genetica STUDIO MOSAICISMO CROMOSOMICO 40 coltura sincronizzata 72 h coltura sincronizzata 72 h CONSERVAZIONE: I campioni devono essere mantenuti nel range di temperatura fra 19 C e 36 C. TRASPORTO: Per i contenitori di trasporto da utilizzare e le modalità di invio vedi "Cariotipo m.abort.placentare" oppure "Campioni di Citogenetica" nel "Manuale prelievi e raccolta campioni". Per i Linfociti Fetali la prestazione viene erogata in 8 giorni.

6 Pagina 6 di 24 CARIOTIPO STANDARD SU VILLI CORIALI (QF-PCR + METODO COLTURA) 00 INDAGINE MOLECOLARE PER RICERCA DI ANEUPLOIDIE CROMOSOMICHE 10 utilizzata QF-PCR mediante kit Devyser Complete v2 (IVD/CE) e corsa elettroforetica su 3500 Genetic Analyzer Applied Biosystems ACCETTAZIONE: la richiesta deve essere inserita nel sistema informatico dalla struttura richiedente, indicando sempre le "Motivazioni prelievo". Vengono accettati per qf-pcr i campioni di villi coriali inviati all'analisi base di cariotipo su villi coriali. PRELIEVO: vedi "Cariotipo standard da villi coriali". In caso di prelievo molto scarso e con forte componente deciduale allegare prelievo di sangue periferico materno (per modalità vedi QF-PCR Sangue periferico) DOCUMENTAZIONE DA ALLEGARE AI CAMPIONI: vedi "Cariotipo standard da villi coriali". CONSERVAZIONE E TRASPORTO: vedi "Cariotipo standard da villi coriali" QF-PCR comuni aneuploidie e metodo coltura CARIOTIPO DA CELLULE MESENCHIMALI DEL VILLO 21 ACCETTAZIONE: la richiesta deve essere inserita nel sistema informatico dalla struttura richiedente, indicando sempre le "Motivazioni prelievo". PRELIEVO: inviare 1 provetta sterile di polistirene contenente terreno di trasporto (fornito dal laboratorio) con un minimo di mg di villi coriali DOCUMENTAZIONE DA ALLEGARE AI CAMPIONI: 1) modulo AVR-PPC M/P01/12 "Acquisizione consenso al test genetico" firmato da Medico e paziente 2) modulo AVR-PPC M/P01/18 "Richiesta esame citogenetico prenatale" 3) fotocopia dell impegnativa ed eventualmente ricevuta ticket se dovuto (si raccomanda di riportare esattamente le diciture complete sulla impegnativa ( coltura e analisi del cariotipo ). Nota: In caso di richieste inserite nel sistema informatico per le quali non venga eseguito il prelievo, compilare il modulo M/P01/07 "Liquido amniotico non inviato". CONSERVAZIONE DI MATERIALE PER TEST GENETICO Conservazione materiale per test genetico 15 ESTRAZIONE ACIDI NUCLEICI Estrazione di Acidi Nucleici 15 Coltura mesenchimale Metodo utilizzato Estrazione DNA QIAGEN QIAamp DNA BLOOD MINI KIT CONSERVAZIONE: I campioni devono essere mantenuti nel range di temperatura fra 19 C e 36 C. TRASPORTO: Per i contenitori di trasporto da utilizzare e le modalità di invio vedi "Cariotipo m.abort.placentare" oppure "Campioni di Citogenetica" nel "Manuale prelievi e raccolta campioni".

7 Pagina 7 di 24 FISH COSTITUZIONALE SONDE ALFOIDI ANALISI IBRIDAZIONE IN SITU FLUORESCENTE (FISH) 7 00 ANALISI IBRIDAZIONE IN SITU FLUORESCENTE (FISH) FISH COSTITUZIONALE SONDE COSMIDICHE 9137 ANALISI IBRIDAZIONE IN SITU FLUORESCENTE (FISH) ANALISI IBRIDAZIONE IN SITU FLUORESCENTE (FISH) FISH COSTITUZIONALE SONDE PAINTING ANALISI IBRIDAZIONE IN SITU FLUORESCENTE (FISH) ANALISI IBRIDAZIONE IN SITU FLUORESCENTE (FISH) 7 FISH PANNELLO COMPLETO SUBTELOMERI IBRIDAZIONE IN SITU FLUORESCENTE (FISH) REG.SUBTELOMERICHE IBRIDAZIONE IN SITU FLUORESCENTE (FISH) REG. SUBTELOMERICHE QF-PCR LIQUIDO AMNIOTICO 9129 INDAGINE MOLECOLARE PER RICERCA DI ANEUPLOIDIE CROMOSOMICHE utilizzata QF-PCR mediante kit Devyser Complete v2 (IVD/CE) e corsa elettroforetica su 3500 Genetic Analyzer Applied Biosystems ACCETTAZIONE: la richiesta deve essere inserita nel sistema informatico dalla struttura richiedente, indicando sempre le "Motivazioni prelievo". Vengono accettati campioni di LA se: a) settimana di gestazione 19+1 b) su indicazione da consulenza genetica. PRELIEVO: vedi "Cariotipo standard da liquido amniotico". Prelevare 3-4 ml in più rispetto al cariotipo nelle medesime provette del cariotipo. In caso di prelievo ematico allegare prelievo di sangue periferico materno (vedi QF-PCR Sangue periferico) DOCUMENTAZIONE DA ALLEGARE AI CAMPIONI: vedi "Cariotipo standard da liquido amniotico". CONSERVAZIONE e TRASPORTO: vedi "Cariotipo standard da liquido amniotico".

8 Pagina 8 di 24 QF-PCR SANGUE FETALE 9129 INDAGINE MOLECOLARE PER RICERCA DI ANEUPLOIDIE CROMOSOMICHE 10 utilizzata QF-PCR mediante kit Devyser Complete v2 (IVD/CE) e corsa elettroforetica su 3500 Genetic Analyzer Applied Biosystems ACCETTAZIONE: L'esame deve essere concordato con il laboratorio ( ) che provvede all'inserimento della richiesta nel sistema informatico. Vengono accettati campioni di SF su indicazione da consulenza genetica. PRELIEVO: inviare ml di sangue fetale in EDTA DOCUMENTAZIONE DA ALLEGARE AI CAMPIONI vedi "Cariotipo standard da sangue fetale". QF-PCR SANGUE PERIFERICO 9129 INDAGINE MOLECOLARE PER RICERCA DI ANEUPLOIDIE CROMOSOMICHE 10 CONSERVAZIONE e TRASPORTO: vedi "Cariotipo standard da sangue fetale" utilizzata QF-PCR mediante kit Devyser Complete v2 (IVD/CE) e corsa elettroforetica su 3500 Genetic Analyzer Applied Biosystems ACCETTAZIONE: L'esame deve essere concordato con il laboratorio ( ) che provvede all'inserimento della richiesta nel sistema informatico. Vengono accettati campioni di sangue periferico per QF-PCR se: a) su indicazione da consulenza genetica b) in caso di prelievo di Liquido Amniotico ematico c) in caso di prelievo di Villo coriale molto scarso e/o con forte componente deciduale PRELIEVO: inviare 2 provette EDTA da 3 ml di sangue periferico DOCUMENTAZIONE DA ALLEGARE AI CAMPIONI 1) modulo AVR-PPC M/P01/12 "Acquisizione consenso al test genetico" firmato da Medico e paziente 2) modulo AVR-PPC M/P01/18 "Richiesta esame citogenetico prenatale" specificando il materiale, le motivazioni e l'esame prenatale di riferimento CONSERVAZIONE e TRASPORTO: vedi "Cariotipo standard da sangue periferico"

9 Pagina 9 di 24 QF-PCR VILLI CORIALI 9129 INDAGINE MOLECOLARE PER RICERCA DI ANEUPLOIDIE CROMOSOMICHE 10 utilizzata QF-PCR mediante kit Devyser Complete v2 (IVD/CE) e corsa elettroforetica su 3500 Genetic Analyzer Applied Biosystems ACCETTAZIONE: la richiesta deve essere inserita nel sistema informatico dalla struttura richiedente, indicando sempre le "Motivazioni prelievo". Vengono accettati per qf-pcr i campioni di villi coriali inviati all'analisi base di cariotipo su villi coriali. PRELIEVO: vedi "Cariotipo standard da villi coriali". In caso di prelievo molto scarso e con forte componente deciduale allegare prelievo di sangue periferico materno (per modalità vedi QF-PCR Sangue periferico) DOCUMENTAZIONE DA ALLEGARE AI CAMPIONI: vedi "Cariotipo standard da villi coriali". CONSERVAZIONE E TRASPORTO: vedi "Cariotipo standard da villi coriali".

10 Pagina 10 di 24 Citogenetica oncoematologica CARIOTIPO ONCOEMATOLOGICO DA MIDOLLO OSSEO CARIOTIPO ONCOEMATOLOGICO Colture cellulari 7 GAW coltura senza stimolazione mitogenica aggiuntiva 24 h e 48 h Risoluzione bande (ISCN 2013) 0 Vedi "Cariotipo oncoematologico da sangue periferico" CARIOTIPO ONCOEMATOLOGICO DA SANGUE PERIFERICO CARIOTIPO ONCOEMATOLOGICO GAW ACCETTAZIONE: L'esame deve essere prenotato al numero telefonico dalle ore 10 alle ore 13 da Lunedì a Venerdì. Per diagnosi urgente è prevista prenotazione in soprannumero. I prelievi devono essere effettuati comunque Lunedì, Martedì e Mercoledì per un analisi completa. Prelievi inevitabili al Giovedì o al Venerdì devono raggiungere il laboratorio entro due ore dal prelievo e consentiranno la sola coltura 24 e 96 ore (+ diretta se LAL) al Giovedì e la coltura 72 ore (+ diretta se LAL) al Venerdì. La richiesta deve essere inserita nel sistema informatico dalla struttura richiedente, indicando sempre le "Motivazioni prelievo". DOCUMENTAZIONE DA ALLEGARE AI CAMPIONI Pazienti ricoverati: 1) modulo AVR-PPC M/P01/12 "Acquisizione consenso al test genetico" firmato da Medico e paziente (solo per il primo cariotipo) 2) modulo AVR-PPC M/P01/17 "Richiesta esame citogenetico oncoematologico". Pazienti ambulatoriali: 1) modulo AVR-PPC M/P01/12 "Acquisizione consenso al test genetico" firmato da Medico e paziente (solo per il primo cariotipo) 2) modulo AVR-PPC M/P01/17 "Richiesta esame citogenetico oncoematologico" Colture cellulari 7 coltura senza stimolazione mitogenica aggiuntiva 24 h e 48 h Risoluzione bande (ISCN 2013) 0 CONSERVAZIONE: I campioni devono essere mantenuti nel range di temperatura fra 19 C e 36 C. TRASPORTO: Per i contenitori di trasporto da utilizzare e le modalità di invio vedi "Cariotipo m.abort.placentare" oppure "Campioni di Citogenetica" nel "Manuale prelievi e raccolta campioni". FISH ONCOEMATOLOGICA SONDE ALFOIDI MIDOLLO OSSEO ANALISI IBRIDAZIONE IN SITU FLUORESCENTE (FISH) oncoematol Colture cellulari 7 7

11 Pagina 11 di 24 FISH ONCOEMATOLOGICA SONDE ALFOIDI SANGUE PERIFERICO ANALISI IBRIDAZIONE IN SITU FLUORESCENTE (FISH) oncoematol Colture cellulari 7 7 FISH ONCOEMATOLOGICA SONDE COSMIDICHE MIDOLLO OSSEO ANALISI IBRIDAZIONE IN SITU FLUORESCENTE (FISH) oncoematol Colture cellulari 7 20 Vedi "Cariotipo oncoematologico da sangue periferico" Per diagnosi di leucemie acute l'accettazione può avvenire dal Lunedì al Venerdì previo contatto con il laboratorio. FISH ONCOEMATOLOGICA SONDE COSMIDICHE SANGUE PERIFERICO ANALISI IBRIDAZIONE IN SITU FLUORESCENTE (FISH) oncoematol Colture cellulari 7 20 Vedi "Cariotipo oncoematologico da sangue periferico" Per diagnosi di leucemie acute l'accettazione può avvenire dal Lunedì al Venerdì previo contatto con il laboratorio. FISH ONCOEMATOLOGICA SONDE PAINTING MIDOLLO OSSEO ANALISI IBRIDAZIONE IN SITU FLUORESCENTE (FISH) oncoematol Colture cellulari 7 7 FISH ONCOEMATOLOGICA SONDE PAINTING SANGUE PERIFERICO ANALISI IBRIDAZIONE IN SITU FLUORESCENTE (FISH) oncoematol Colture cellulari 7 7

12 Pagina 12 di 24 Genetica molecolare oncoematologica Ricerca mutazione gene FLT3 (ITD e TKD) ANALISI MUTAZIONALE GENE FLT3 Analisi mutazionale gene FLT3 Internal Tandem Duplication (ITD) e dominio Tirosinchinasico (TKD D835/I836) ACCETTAZIONE La richiesta deve essere inserita nel sistema informatico dalla struttura richiedente, compilando sempre i campi: 1) Prima Motivazione: indicare "analisi per diagnosi", "studio di controllo", ecc. 2) Motivazione Descrittiva: indicare la patologia e il sospetto diagnostico 3) Note: indicare eventuali informazioni aggiuntive (non compariranno sul referto di Genetica) DOCUMENTAZIONE DA ALLEGARE AI CAMPIONI Modulo AVR-PPC M/P01/28 "Richiesta esame di Genetica molecolare Oncoematologica" opportunamente compilato. PRELIEVO I prelievi devono essere in provette tappo lilla (tipo emocromo) con anticoagulante EDTA; sul modulo di richiesta AVR-PPC M/P01/28 è indicato il numero delle provette da prelevare in relazione all esame/materiale richiesto; l accettazione informatica genera in automatico una sola etichetta di prelievo, occorre procedere alla ristampa della medesima per tante volte quante sono le provette indicate. CONSERVAZIONE e TRASPORTO I campioni devono essere mantenuti a temperatura ambiente e/o 4C e devono arrivare presso il Laboratorio di Pievesestina dal Lunedì al Venerdì entro e non oltre le ore 12.. I prelievi e la richiesta devono essere messi in busta chiusa con indicata la seguente dicitura: "LABORATORIO UNICO DI AREA VASTA ROMAGNA GENETICA MOLECOLARE ONCOEMATOLOGICA (II PIANO) Tel " Per eventuali dubbi o precisazioni si prega di contattare il laboratorio (Tel ). Estrazione DNA; Reazione polimerasica a catena (PCR); Digestione enzimatica ed elettroforesi capillare mediante sequenziatore ABI 3500; kit Invivoscribe: LeukoStrat FLT3 Mutation Assay- ABI Fluorescence Detection Analisi mutazione DNA per FLT Estrazione DNA (da Conservazione DNA (da

13 Pagina 13 di 24 Ricerca mutazione gene nucleofosmina NPM RICERCA MUTAZIONI GENE NPM1(nucleofosmina) 45 Analisi mutazionale del gene NPM1 Estrazione DNA; Reazione polimerasica a catena (PCR) e sequenziamento automatico di parte dell'esone 12 (nt ) del gene NPM Analisi mutaz.dna x NPM Estrazione DNA (da Conservazione DNA (da

14 Pagina 14 di 24 Ricerca mutazione JAK2 V617F RICERCA MUTAZIONE V617F nel gene Janus Kinase 2 (JAK2) Ricerca della mutazione V617F Estrazione DNA da sangue intero; Analisi quantitativa in Real Time PCR (kit MutaQuant Ipsogen) Estrazione DNA JAK Conservazione DNA JAK2 Ricerca qualitativa trascritti MLL-AF4B associati alla t(4;11) RICERCA RIARRANGIAMENTO MLL- AF4B associato a t(4;11) Analisi qualitativa MLL- AF4 Estrazione RNA; Retrotrascrizione; PCR mediante metodica BIOMED I; Elettroforesi su gel d'agarosio Estrazione RNA Conservazione RNA

15 Pagina 15 di 24 Ricerca qualitativa trascritti AML1-ETO associati alla t(8;21) RICERCA RIARRANGIAMENTO AML1- ETO associato a t (8;21) Analisi qualitativa AML1- ETO Estrazione RNA; Retrotrascrizione; PCR mediante metodica BIOMED I; Elettroforesi su gel d'agarosio Estrazione RNA Conservazione RNA Ricerca qualitativa trascritti BCR-ABL p190 associati alla t(9;22) ANALISI QUALITATIVA BCR-ABL p190 associato alla t(9;22) Analisi qualitativa BCR- ABL p190 Estrazione RNA; Retrotrascrizione; PCR mediante metodica BIOMED I; Elettroforesi su gel d'agarosio Estrazione RNA Conservazione RNA

16 Pagina 16 di 24 Ricerca qualitativa trascritti BCR-ABL p210 associati alla t(9;22) ANALISI QUALITATIVA BCR-ABL p210 associato alla t(9;22) Analisi qualitativa BCR- ABL p210 Estrazione RNA; Retrotrascrizione; PCR mediante metodica BIOMED I; Elettroforesi su gel d'agarosio Estrazione RNA Conservazione RNA Ricerca qualitativa trascritti MYH11-CBFbeta associati alla inv(16) RICERCA RIARRANGIAMENTO CBFbeta-MYH11 associato a inv(16) Analisi qualitativa riarrangiamento CBFbeta-MYH11 Estrazione RNA; Retrotrascrizione; PCR mediante metodica BIOMED I [kit Nanogen "inv(16) Oligomix Alert kit"]; Elettroforesi su gel d'agarosio Estrazione RNA Conservazione RNA

17 Pagina 17 di 24 Ricerca qualitativa trascritti PML-RARalfa associati alla t(15;17) RICERCA RIARRANGIAMENTO PML- RARalfa associato a t(15;17) Analisi qualitativa PML- RARalfa Estrazione RNA; Retrotrascrizione; PCR mediante metodica BIOMED I; Elettroforesi su gel d'agarosio Estrazione RNA Conservazione RNA Ricerca QUANTITATIVA trascritti BCR-ABL p190 associati alla t(9;22) ANALISI QUANTITATIVA BCR-ABL p190 associato alla t(9;22) Analisi quantitativa BCR- ABL p190 Estrazione RNA; Retrotrascrizione; Realtime PCR (kit Nanogen "Philadelphia p190 Alert Q-PCR kit") con l'utilizzo di ABI PRISM 7900 SDS e sistema TaqMan Estrazione RNA Conservazione RNA

18 Pagina 18 di 24 Ricerca QUANTITATIVA trascritti BCR-ABL p210 associati alla t(9;22) ANALISI QUANTITATIVA BCR-ABL p210 associato alla t(9;22) Analisi quantitativa BCR- ABL p210 Estrazione RNA; Retrotrascrizione; Realtime PCR (kit Nanogen "Philadelphia p210 Alert Q-PCR kit") con l'utilizzo di ABI PRISM 7900 SDS e sistema TaqMan Estrazione RNA Conservazione RNA Ricerca QUANTITATIVA trascritto WT ANALISI QUANTITATIVA DEL TRASCRITTO WT1 Analisi quantitativa del trascritto WT1 Estrazione RNA; Retrotrascrizione; Realtime RT-PCR (kit Nanogen "WT1 ELN) Estrazione RNA Conservazione RNA

19 Pagina 19 di 24 Ricerca riarrangiamento BCL-1 t(11;14) RICERCA RIARRANGIAMENTO DEL GENE BCL1/JH t(11;14) Analisi Qualitativa BCL1/JH (MTC) Estrazione DNA; Reazione polimerasica a catena (PCR) ed elettroforesi su gel di agarosio; kit per lo studio molecolare della traslocazione t(11;14) Master Diagnostica (amplificazione nested) Estrazione DNA (da Conservazione DNA (da

20 Pagina 20 di 24 Ricerca riarrangiamento BCL-2 t(14;18) RICERCA RIARRANGIAMENTO DEL GENE BCL2/JH t(14;18) Analisi Qualitativa BCL2/JH, varianti MBR e mcr Estrazione DNA; Reazione polimerasica a catena (PCR) ed elettroforesi su gel di agarosio; kit Nanogen: BCL2 oligomix Alert kit (amplificazione nested) Estrazione DNA (da Conservazione DNA (da

21 Pagina 21 di 24 Ricerca riarrangiamento IGVH RIARRANGIAMENTO GENI IMMUNOGLOBULINE VDJ-IgH (FR1; FR2; FR3) Riarrangiamento dei geni della catena pesante delle immunoglobuline VDJ- IgH (FR1; FR2; FR3) Estrazione DNA; Reazione polimerasica a catena (PCR) ed elettroforesi capillare con Genescan analisi; Kit Invivoscribe: IdentiClone IgH gene Clonality Assay Estrazione DNA (da Conservazione DNA (da

22 Pagina 22 di 24 Ricerca riarrangiamento TCR-GAMMA RICERCA RIARRANGIAMENTO DEL GENE T-cell receptor (TCR) gamma Riarrangiamento TCR gamma Estrazione DNA; Reazione polimerasica a catena (PCR) ed elettroforesi capillare con Genescan analisi; Kit Invivoscribe: IdentiClone T cell Receptor gene Rearrangement Assay Estrazione DNA (da Conservazione DNA (da

23 Pagina 23 di 24 Sequenziamento geni immunoglobuline IgVH SEQUENZIAMENTO GENI IMMUNOGLOBULINE IgVH 45 Sequenziamento geni della regione variabile della catena pesante delle Immunoglobuline (IgVH) Metodiche effettuate Estrazione DNA; Reazione polimerasica a catena (PCR) con FR1 BIOMED-2 primers e sequenziamento automatico; Analisi delle sequenze con IMGT/V data base Analisi mutazione per geni IgVH Estrazione DNA (da Conservazione DNA (da

24 Pagina 24 di 24 HFE ANALISI MUTAZIONI GENE HFE - EMOCROMATOSI EREDITARIA TIPO I ANALISI MUTAZIONE GENE HFE - EMOCROMATOSI EREDITARIA TIPO I Ricerca delle mutazioni: C282Y, H63D, S65C Estrazione DNA (QIAGEN DNA BLOOD MINI KIT); PCR real time (kit Experteam Hemochromatosis mut. kit-rq HE01.RQ) L'esame comprende la ricerca delle tre principali mutazioni del gene HFE: C282Y, H63D, S65C ACCETTAZIONE: I prelievi possono essere effettuati tutti i giorni, escluso il sabato e i prefestivi. N.B.: per i pazienti esterni l'accesso NON è possibile presso i Centri prelievi ma solo tramite l'ambulatorio di Genetica medica (prenotazione al numero telefonico ). La richiesta deve essere inserita nel sistema informatico dalla struttura richiedente, indicando sempre le "Motivazioni al prelievo". DOCUMENTAZIONE DA ALLEGARE AI CAMPIONI: Pazienti ricoverati: 1) modulo AVR-PPC M/P01/12 "Acquisizione consenso al test genetico" firmato da Medico e paziente 2) nota informativa per Emocromatosi AVR-PPC T/P01/07, firmata dal paziente 3) modulo AVR-PPC M/P01/20 "Richiesta analisi molecolare emocromatosi". Pazienti ambulatoriali: 1) modulo AVR-PPC M/P01/12 "Acquisizione consenso al test genetico" firmato da Medico e paziente 2) nota informativa per Emocromatosi AVR-PPC T/P01/07, firmata dal paziente 3) modulo AVR-PPC M/P01/20 "Richiesta analisi molecolare emocromatosi". 4) fotocopia dell impegnativa ed eventualmente ricevuta ticket se dovuto (si raccomanda di riportare esattamente sull'impegnativa la dicitura completa: Emocromatosi: analisi 3 mutazioni, estrazione e conservazione DNA ). PRELIEVO: riempire due provette da emocromo TRASPORTO: inserire le provette in un contenitore secondario rigido (es. barattolo da 1000 ml per pezzi anatomici) insieme alla documentazione necessaria (inserita in sacchetto di plastica trasparente). Tale contenitore deve essere provvisto di una etichetta esterna recante la dicitura Campioni per Laboratorio di CITOGENETICA. Inserire i contenitori secondari nell apposito contenitore terziario di colore GIALLO (disponibile nei punti di spedizione). Il contenitore terziario deve giungere, di norma, entro le ore 14, al Laboratorio di Pievesestina, Se non è possibile l'invio in giornata, conservare a + 4 C fino al giorno seguente. L'invio può essere effettuato a temperatura ambiente.