5-Diagnostics. Distribuito da Biotoxik
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- Ruggero Guidi
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2 5-Diagnostics Distribuito da Biotoxik Questa linea è stata realizzata per tutti gli specialisti dei processi emostatici e sono capaci di soddisfare le esigenze dei clienti nei vari settori, dalla ricerca in laboratorio, alle cliniche 5-Diagnostics offre una gamma di prodotti necessaria per il controllo di qualità delle industrie farmaceutiche sia durante che a fine produzione secondo la Farmacopera Europea 8.0
3 Substrati Cromogenici e Fluorogenici
4 Substrati cromogenici perchè dobbiamo usarli? Peptide with specific cleavage site for specific protease Conferma/Determinazione di un attività enzimatica o di un cofattore nelle preparazioni farmaceutiche: Eparine, Rec. FVIII, FVII) Rilevamento delle impurità nei preparati farmaceutici, come iniettabili tipo immunoglobuline, vaccini, albumine etc. Misurazione del percorso di attivazione di contatto della coagulazione nelle immunoglobuline, nei vaccini, ma anche nei dispositivi medici (ginocchia artificiali, fianchi, ecc)
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6 Substrato cromogenico Larga gamma PRODUCT Pefachrome PK substrate for Plasma Kallikrein Pefachrome PK 8092 substrate for Plasma Kallikrein Pefachrome TH substrate for Thrombin Pefachrome TH 5244 substrate for Thrombin Pefachrome TH 5247 substrate for Thrombin Pefachrome TH 5251 substrate for Thrombin Pefachrome FXIIa/TH 5253 substrate for Thrombin Pefachrome TH 5256 substrate for Thrombin Pefachrome TH 8198 substrate for Thrombin Pefachrome TG substrate for Thrombin Generation Pefachrome upa 5260 substrate for Urokinase Pefachrome upa 8294 substrate for Urokinase Pefachrome PL 5261 substrate for Plasmin Pefachrome PL 5262 substrate for Plasmin Pefachrome PL 5263 substrate for Plasmin Pefachrome PL 5264 substrate for Plasmin Pefachrome PL 5272 substrate for Plasmin Pefachrome TRY 5274 substrate for Trypsin Pefachrome FXa 5277 substrate for Factor Xa Pefachrome FXa 5279 substrate for Factor Xa Pefachrome FXa substrate for Factor Xa Pefachrome FXa 8092 substrate for Factor Xa Pefachrome FXa 8595 substrate for Factor Xa Pefachrome FXa/LAL 5288 substrate for bacterial endotoxins Pefachrome 6017 substrate for Factor XIIa Pefachrome C1E 5603 substrate for C1-Esterase Pefachrome Pca substrate for Activated Protein C Pefachrome FXIa substrate for Factor XIa Pefachrome tpa substrate for tpa Pefachrome FVIIa substrate for Factor VIIa FORMULA H-D-Abu-CHA-Arg-pNA 2AcOH H-D-Pro-Phe-Arg-pNA 2HCl H-D-CHG-Ala-Arg-pNA 2AcOH Tos-Gly-Pro-Arg-pNA AcOH H-D-CHG-But-Arg-pNA 2AcOH H-D-CHA-Ala-Arg-pNA 2AcOH H-D-CHA-Gly-Arg-pNA 2AcOH CH3OCO-Gly-Pro-Arg-pNA AcOH H-D-Phe-Pip-Arg-pNA 2HCl H-β-Ala-Gly-Arg-pNA 2AcOH Cbo-Glu(OtBu)-Gly-Arg-pNA AcOH pyro-glu-gly-arg-pna HCl Tos-Gly-Pro-Lys-pNA AcOH H-D-But-CHA-Lys-pNA 2AcOH H-D-Nva-CHA-Lys-pNA 2AcOH H-D-Nle-CHA-Lys-pNA 2AcOH H-D-Nle-CHA-Lys-pNA 2HCl Bz-Val-Gly-Arg-pNA AcOH CH3SO2-D-Leu-Gly-Arg-pNA AcOH CH3OCO-D-CHG-Gly-Arg-pNA AcOH CH3OCO-D-CHA-Gly-Arg-pNA AcOH Suc-Ile-Glu (γ-pip)-gly-arg-pna, HCl Cbo-D-Arg-Gly-Arg-pNA 2HCl CH3OCO-D-CHA-Gly-Arg-pNA AcOH H-D-CHA-Gly-Arg-pNA 2AcOH CH3CO-Lys(Cbo)-Gly-Arg-pNA AcOH H-D-Lys(Cbo)-Pro-Arg-pNA 2AcOH Z-Aad-Pro-Arg-pNA AcOH CH3SO2-D-CHA-Gly-Arg-pNA AcOH CH3SO2-D-CHA-Abu-Arg-pNA AcOH
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10 EU/US Pharmacopoeia Substrati cromogenici
11 Substrati cromogenici usati per il QC di afiia in accordo con la EP Il test nel controllo di qualità secondo la EP richiede: Trombina Umana Antitrombina Tamponi Substrato cromogenico: Attn: Il Kit completo che include tutti i reagenti è in fase di preparazione! D-Phe-Pip-Arg-pNA = Pefachrome TH
12 Substrati cromogenici per QC of afxa in accordo con la EP Il test nel controllo di qualità secondo la EP richiede: Bovine FXa Antitrombina Attn: Il Kit completo che include tutti i reagenti è in fase di preparazione! Tamponi Substrato cromogenico Cho-D-Arg-Gly-Arg-pNa = Pefachrome FXa 8595
13 Substrati cromogenici per QC di Prekallikrein activator in accordo con la EP : Il test nel controllo di qualità secondo la EP richiede: Kallikrein Tampone Substrato cromogenico H-D-Pro-Phe-Arg-pNa = Pefachrome TH 5250
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15 Substrati cromogenici per il QC di FVIII in accordo con la EP Il test nel controllo di qualità secondo la EP richiede: Factor X, IXa, FVIII Attivatore Fosfolipidi FXa Inibitore Tampone Substrato cromogenico Z-D-Arg-Gly-arg-pNA = Pefachrome FXa 8595
16 Substrati cromogenici per il QC di FVII in accordo con la EP Il test nel controllo di qualità secondo la EP richiede: Factor X Tromboplastina Tampone Calcio Substrato cromogenico Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA = Pefachrome FXa 8595 Substrati cromogenici per il QC dell' Attività antitrombinica in accordo con la EP Il test nel controllo di qualità secondo la EP richiede: Trombina Tamponi Substrato cromogenico Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA = Pefachrome FXa 8595
17 Substrati cromogenici per il QC di FXIa in accordo con la EP Activated FXI: impurità nelle immunoglobuline per via endovenosa(ivid, SCID) N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-pNa: Pefachrome TH (Pefa-5114), FXIa CS FX
18 NaPTT per il QC delle impurità in accordo con EP FXI attivato associato a impurezze delle immunoglobuline per via endovenosa/sottocutanea (IVID, SCID) NaPTT è utilizzato per rilevare il contatto di attivazione e l'ipercoagulabilità NaPTT è un reagente sintetico fosfolipidico: Misura il tempo di formazione coagulare Tempi di coagulazione in accordo con la EP NaPTT + PNP + Sample Seconds to Clot formation PNP: Pooled Normal Plasma
19 NaPTT per il QC die dispositivi medici in accordo con la ISO Dispositivi medici Deve essere testato il prodotto finale o la materia prima
20 NaPTT per il QC dei dispositivi medici in accordo con la ISO Dispositivi medici Deve essere testato il prodotto finale o la materia prima
21 NaPTT per il QC die dispositivi medici in accordo con la ISO
22 NaPTT per il QC die dispositivi medici in accordo con la ISO ISO Guideline B.3.1. L'APTT è di alcun valore nella valutazione in vitro delle interazioni sangue / dispositivo in quanto le sostanze attivanti mascherano l'eventuale attivazione causata dal dispositivo o dai materiali che lo compongono -> non attivato aptt = NaPTT. B.3.4 Materiali generatori di trombina esposti a un sistema di coagulazione intatto in presenza di fosfolipidi (vedi B.3.1) genererà trombina che può essere misurata mediante conversione di un substrato cromogenico. Questo metodo ha una variabilità molto inferiore rispetto ai test di coagulazione convenzionale. B.3.7 Riduzione significativa dei test specifici per i fattori della coagulazione (per esempio a meno del 50% del normale o del livello di controllo) e fattori della coagulazione seguiti dall'esposizione di sangue per un materiale o dispositivo sottoposto a condizioni standard suggerisce un accelerato consumo di tali fattori per assorbimento, coagulazione o altri meccanismi.
23 Inibitori di Proteasi
24 Inibitori di Proteasi Pefabloc Che cosa è? Inhibition of Hydrolysis by specific proteases
25 Quali sono i buoni inibitori della proteasi?serine-proteasi La neutralizzazione delle serin- proteasi in ogni preparato biologico (le serinproteasi idrolizzano (distruggono) le proteine e sono considerate come impurità indesiderate) Stabilizzazione delle proteine durante il rivestimento sulle superfici Stabilizzazione di proteine durante specifiche fasi di purificazione Stabilizzazione non specifica delle proteine
26 Pefabloc vasta gamma di prodotti inibitori della serin-proteasi Pefabloc SC Inibitore irreversibile delle serine proteasi Pefabloc TH Inibitore competitivo della Trombina Pefabloc FG Inibisce la polimerizzazione della fibrina, modifica le proprietà meccaniche deil coagulo della fibrina e può dissociarsi in fibrina non stabilizzata Pefabloc PK* Inibitore selettivo di Kallikrein Pefabloc upa6074*lmw Inibitore di Urochinasi tpa/xa* Inibitore reversibile e competitivo di tripsina come le serin-proteasi Pefabloc FXa* Inibitore del Factore Xa Pefabloc SP* Inibitore competitivo LMW Serine Protease *Disponibile su richiesta e solo per discrete quantità
27 Pefabloc: Properties Pefabloc SC (Sulfonyl Fluorides, traditional inhibitors of serine proteases) Potency Most potent inhibitor, irreversible inhibitor Less potent, irreversible Toxicity Very low toxicity Toxic In weak basic solution Very slowly hydrolized hydrolyzed Inhibition of proteases in large volumes (work up of fermentations, extractions of animal tissues or plants) Improved not in use Solubility Excellent in water and aequous media PMSF has to be dissolved in organic solvents like DMSO Presence of Albumin No delayed inhibition towards thrombin (can be used in serum, plasma) Purity free from cartilage, bone or plasma components, extremely pure form of gelatin type A, meeting all purity requirements for gelatin of the Pharmacopoeias USP XXII, Eur.Ph., DAB 9, Ph.H. VII and Pharmacopoeia Japonica 10th Ed. [2]. Delayed inhibition Different purity degrees available, but mostly contaminated with impurities, many BSA are low quality products
28 Aprotinin Inibitore polivalente reversibile delle serin proteasi Protezione, stabilizzazione di proteine ed enzimi durante l'isolamento / purificazione. Purificazione di urochinasi, tripsina e chimotripsina su aprotinin immobilizzato Quantificazione di attività callicreina in miscele di esterasi e proteasi Inibizione dell'attività della proteasi che possono ridurre la durata delle cellule nelle colture di cellule e tessuti. Stabilizzazione delle proteine, anticorpi durante il rivestimento su superfici Attn: Aprotinina è utilizzato anche in vivo - il prodotto 5Diagnostic viene utilizzato solo in laboratori per RUO! Riduce le perdite ematiche perioperatorie, fabbisogno trasfusionale in pazienti ad alto rischio di grave perdita di sangue durante e dopo bypass cardiopolmonare (CPB).
29 Prionex
30 Che cosa è PRIONEX preparato da collagene della pelle suina altamente purificata privo di cartilagine, ossa e componenti del plasma, è considerato come una forma estremamente pura di gelatina di tipo A, riunisce tutti i requisiti di purezza per la gelatina richiesti dalle Pharmacopoeias USP XXII, Eur.Ph., DAB 9, Ph.H. VII and Pharmacopoeia Japonica 10th Ed. [2]. privo di lipidi, polisaccaridi e acidi nucleici.
31 Che cosa è PRIONEX - Continuazione trattamento termico (145 C 1 ora), l'inattivazione del virus, BSE e agenti infettivi scrapie-like. nessuna attività enzimatica, nessuna conosciuta attività di inibitore enzimatico, no immuni proteine reattive. derivato da fonte suina, non di derivazione bovina -> nessun agente BSE.
32 Prionex Properties Prionex Pig Collagen Peptide Fraction Solubility Aqueous solution eliminates additional manufacturing steps! HSA / BSA Human or Bovine Serum Albumin Poor solubility Batch to Batch Variability (strong argument) Stabilization of biological activity in solution* Stabilization during Lyophilization* Prolongation of shelve life of protein Denaturation by Ethanol, Urea or chaotropic agents Highly processed product with no/little batch to batch variability Improved Regular Improved Regular Improved Regular Improved Regular Purity free from cartilage, bone or plasma components, extremely pure form of gelatin type A, meeting all purity requirements for gelatin of the Pharmacopoeias USP XXII, Eur.Ph., DAB 9, Ph.H. VII and Pharmacopoeia Japonica 10th Ed. [2]. High batch to batch variability Different purity degrees available, mostly contaminated with impurities, many low quality products in the market * Gaffney et al, 1996 J. Pharm. Pharmacol.)
33 wasting your time with customers using regular, non high grade BSA!
Cascata della coagulazione
Cascata della coagulazione Struttura del fibrinogeno Aα blue Bβ verde γ rosso 17 ponti S-S Parte del frammento E contenente i ponti S-S intercatena Frammento D I fibrinopeptidi hanno carica negativa
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