I germi sentinella. I meccanismi di resistenza e le tecniche analitiche. Fabio Dall Ara. 22/02/2012 Pievesestina

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1 I germi sentinella I meccanismi di resistenza e le tecniche analitiche Fabio Dall Ara 22/02/2012 Pievesestina

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3 Germi sentinella PATOGENI PRIMARI O CONVENZIONALI, in grado di provocare malattia anche in soggetti in partenza sani : Micobatteri tubercolari, Neisseria meningitidis, Legionella pneumophila, Francisella tularensis, Bacillus anthracis, Clostridium difficile, Vibrio cholerae, ecc. ecc. ecc. POTENZIALE DI PATOGENICITA Colonizzazione della superficie epiteliale o mucosa Penetrazione, moltiplicazione ed invasione dell ospite Danni all ospite (enzimi, tossine, biofilm, infiammazione, reazione antigene-anticorpo, immunità cellulo-mediata, ecc.) VIRULENZA definisce l espressione e il grado di realizzazione, da parte dei ceppi, del potenziale di patogenicità proprio della specie di appartenenza.

4 Resistenze sentinella MRSA VRE VRSA VISA o GISA ESBL KPC MBL MDRO o XDRO Staphylococcus aureus meticillino resistente Enterococco vancomicina resistente Staphylococcus aureus vancomicina resistente Staphylococcus aureus vancomicina o glicopeptidi intermedio Ceppo produttore di b-lattamasi a spettro esteso Ceppo produttore di carbapenemasi Ceppo multiresistente o totalmente resistente

5 La parete dei batteri

6 1941 Roberto Serra SCDO Microbiologia - ASO SG Battista - Torino

7 1946 Roberto Serra SCDO Microbiologia - ASO SG Battista - Torino

8 1960 Roberto Serra SCDO Microbiologia - ASO SG Battista - Torino

9 Roberto Serra SCDO Microbiologia - ASO SG Battista - Torino 1960

10 Il gene meca La meticillino resistenza è dovuta all acquisizione del gene meca che è incluso in un elemento mobile chiamato staphylococcal chromosomal cassette (SCCmec). Il gene meca codifica la produzione della proteina PBP2a, una PBP2 mutante con bassa affinità alla meticillina, non saturata e quindi funzionalmente bloccata da concentrazioni altrimenti letali di questo antibiotico. Essa è in grado di vicariare le funzioni normalmente svolte dalla altre PBP ad elevata affinità funzionalmente bloccate.

11 Antibiogramma Vitek2

12 Test di conferma MRSA 21 mm

13 Screening MRSA 1. cefoxitina 4 mg/ml 2. substrato cromogeno per evidenziare la produzione di a-glucosidasi

14 Vancomicina 1956 La vancomicina è un glicopeptide che si lega all estremità D- alanina-d-alanina del pentapeptide ed impedisce l azione della transpeptidasi sequestrandone il substrato. L-alanina Acido D-glutamico L-lisina D-alanina D-alanina + Edoardo Carretto Policlinico S. Matteo, Pavia modificata

15 Resistenza alla vancomicina 1986 VRE N-acetilglucosamina acido muramico L-alanina L-alanina L-alanina Acido D-glutamico L-lisina pentapeptide Acido D-glutamico L-lisina Acido D-glutamico L-lisina D-alanina D-alanina D-alanina D-alanina D-lattato D-serina VanA VanB VanD VanM VanC VanE VanG VanL Gli aminoacidi terminali D-ala-D-lac e D-ala-D-ser del pentapeptide hanno una ridotta affinità alla vancomicina e rendono il ceppo resistente.

16 Antibiogramma Vitek2

17 Test di conferma VRE

18 Pietro E. Varaldo ESCMID Postgraduate Education Course Venezia 2010

19 Screening VRE Vancomicina 6 mg/ml

20 Francesco Luzzaro Ospedale di Circolo e Fondazione Macchi, Varese

21 VISA GISA Changes in cell wall structure in S. aureus also result in vancomycin resistance, which is most commonly heterogeneous (formerly referred to as VISA or hvisa isolates). Edoardo Carretto Policlinico S. Matteo, Pavia

22 VISA - GISA

23 VISA - GISA

24 VISA - GISA For Staphylococcus spp. the breakpoints are 2/2 mg/l. These breakpoints avoid reporting GISA/VISA isolates intermediate, as serious infections with GISA/VISA isolates are not treatable with increased doses of vancomycin.

25 ESBL Beta Lattamasi a Spettro Esteso Classicamente questo termine è stato riservato agli enzimi, codificati da geni plasmidici, capaci di idrolizzare le cefalosporine di 3 a e 4 a generazione (ceftazidime e cefotaxime) ed i monobattami (aztreonam). Sono inibiti in vitro dall acido clavulanico e da altri inibitori delle β-lattamasi (sulbactam, tazobactam). A dispetto della loro grande variabilità e della loro differente origine, le ESBL hanno uno spettro di attività simile che comprende tutte le penicilline (eccetto la temocillina) e tutte le cefalosporine, ma non sono attive su cefamicine (cefoxitina e cefotetan) e carbapenemi (imipenem, meropenem, ertapenem e doripenem).

26 Antibiogramma Vitek2 Tutti i ceppi di Enterobacteriaceae, esclusi E. coli, K. pneumoniae, e P. mirabilis, che producono ESBL devono essere confermati con test manuali utilizzando il loro migliore inibitore, l acido clavulanico.

27 Test di conferma x ESBL ESBL pos AmpC neg ESBL neg AmpC pos ESBL pos AmpC pos

28 Carbapenemasi Le carbapenemasi sono b-lattamasi col più largo spettro di attività in grado di inattivare penicilline, cefalosporine, associazioni b-lattamico con inibitori delle b-lattamasi, cefamicine e carbapenemi (imipenem, meropenem, ertapenem e doripenem). Sono inibite da acido amino-fenilboronico (classe A) ed EDTA o acido dipicolinico (classe B). I geni che codificano per le carbapenemasi sono a localizzazione cromosomica (SME, IMI, NMC-A) e più spesso plasmidica (KPC, GES, IMP, VIM, NDM, OXA-48).

29 Antibiogramma Vitek2

30 Test di conferma x carbapenemasi NEG CLOXA AFBA KPC+ MBL+ AmpC+ AFBA + DPA DPA

31 Definizione di MDRO

32 Definizione di MDRO

33 Pseudomonas aeruginosa MDRO

34 Acinetobacter baumannii MDRO

35 P. aeruginosa ed A. baumannii

36 Conferma MIC imipenem e meropenem con Etest

37 GRAZIE PER L ATTENZIONE