CLASSIFICAZIONE DELLE COLORAZIONI: Le colorazioni, indipendentemente dal meccanismo d azione del colorante, possono essere divise in due gruppi: 1. colorazioni istomorfologiche (nucleo, citoplasma, tessuto nervoso,collagene, ecc...); 2. colorazioni istochimiche (per me>ere in evidenza le sostanze chimiche contenute nei tessu( e la loro posizione).
Coloran( basici legano sostanze acide de>e basofile Ematossilina, blu di me(le, di toluidina, (onina, verde me(le, azzurro B, fucsina Coloran( acidi Eosina, Arancio G, Verde luce legano sostanze basiche de>e acidofile Ematossilina eosina : Ematossilina colora in viole>o sostanze acide (acidi nucleici) Eosina colora in rosa sostanze basiche (proteine del citosol)
COLORAZIONE EMATOSSILINA/EOSINA (EE): L ematossilina è una sostanza vegetale isolata da un estra>o di legno azzurro (legno di campeggio, Haematoxylum campechianum ) un albero originario del centro America. Questa è di per sé incolore (o si presenta so>o forma di cristalli giallo- bruni) incapace di colorare. Il vero colorante non è l ematossilina, ma il suo prodo>o di ossidazione: l emateina (per questo all ematossilina vanno aggiunte sostanze ossidan( come il permanganato dipotassio, l idrato di potassio, iodato di sodio, ecc.). Ematossilina Emateina Ematossilina Emateina
Colorazione tricromica Azan- Mallory Vengono impiega( tre coloran( acidi per diversificare le stru>ure: q Blu di Anilina q Fucsina acida q Orange G
Azan Mallory Colorazione elekva per evidenziare le fibre collagene del connekvo. Si usano due coloran( in sequenza: Azocarminio Colora in rosso: - I Nuclei delle Cellule e gli Eritroci( Colora in rosso tenue: - Il Citoplasma Miscela di Mallory Miscela formata da: Blu di Anilina, Orange G e Acido Ossalico. Colora intensamente di blu: - Le Fibre Collagene Colora in azzurro: - Le Mucine Colora in arancio: - Le Cellule del Sangue - Le Fibre Muscolari
Azan- Mallory
Carboidra( - Reazione PAS (acido periodico di Schiff) (colora in rosso gli zuccheri) 1. tra>amento acido periodico ossidazione gruppi alcolici in gruppi aldeidici 2. tra>amento reakvo di Schiff (fucsina + acido solforico) incolore lega aldeidi colore
Acidi nucleici 1. Miscela: Verde me(le e Pironina colora DNA, croma(na RNA (nucleolo, zone basofile del citoplasma) 2. Reazione di Feulgen Colora in rosso/viola il DNA a. idrolisi con HCl scinde legame glucosidico (purina/ desossiribosio) liberando il gruppo aldeidico del desossiribosio b. tra>amento con reakvo di Schiff colore rosso
v La proprietà istochimica delle fibre re(colari, de>a argirofilia o argentofilia, è rappresentata dalla capacità di legare sali d argento. v In seguito ad opportuno tra>amento riducente, danno origine ad argento metallico, di colore nero. v Le fibre re(colari tra>ate con metodiche di argentofilia (c.d. impregnazione argen(ca come il metodo di Gomori) si presentano come una delicata rete di fibrille nere.
Si fa precedere l'impregnazione argen(ca da una fissazione con osmio e bicromato di potassio, questo procedimento fa sì che il nitrato d argento precipi( su tu>a la cellula e su tuk i prolungamen(, evidenziandone la forma: tu>o è omogeneamente ed intensamente di colore nero.
Colora quindi sia le stru>ure argirofile che argentaffini. Colora solo alcuni neuroni, che appaiono quindi isola(. Sezioni di 20-30 micron per poter osservare il percorso dei prolungamen(. Colora intensamente di nero: - Pirenoforo - Prolungamen(
Prevede la colorazione con nitrato d'argento, ma non il pretra>amento con osmio e bicromato di potassio, che si ha nel metodo di Golgi. Me>e in evidenza soltanto le stru>ure argirofile all'interno del neurone, le neurofibrille. Si o>engono informazioni sull interno della cellula, par(colarmente sulle neurofibrille. Si intravede il nucleo.
Colora giallino- marrone: - Il Neurone Colora marrone- nero - Le Neurofibrille
Striscio di sangue v Quando le cellule che si trovano disperse in un mezzo liquido, come le cellule del sangue, si esaminano agevolmente con la tecnica degli strisci. v Gli strisci di cellule in monostrato vengono osservati al microscopio dopo essiccamento, fissazione e colorazione
May- Grünwald- Giemsa Miscela: Blu di Me(lene (basico), Eosina (acido) E poi Giemsa (blu i nuclei e rosa il citoplasma) Colora rosa- arancio: - Gli Eritroci( Colora blu porpora: - I nuclei Colora marrone leggero: - Il Citoplasma dei Neutrofili Colora viole>o- rosa e lillà: - I Granuli dei Neutrofili Colora arancio- rosso brillante: - I Granuli degli Eosinofili Colora blu oltremare:- I Granuli dei Basof
Colorazione (se le sezioni sono paraffinate) u immersione in xilolo per rimozione della paraffina u re- idratazione (passaggi in serie discendente di alcoli 100, 95, 80, 70, 50%) u passaggio in acqua dis(llata u colorazione con coloran( idrosolubili u scala di alcoli crescen( per disidratare di nuovo le sezioni u passaggio in xilolo u montaggio con DPX