DOSAGGI REALIZZABILI PER LA DIAGNOSI DI GESTAZIONE Fisiologia della Riproduzione, Facoltà di Medicina Veterinaria di Perugia
STORIA - Antichità - Interesse per la diagnosi di gestazione - 600 anni prima della nostra era... Egiziani Urina femmine presunte gravide Germinazione dei semi Processo Rapido... Processo Lento... Diagnosi positiva Diagnosi negativa
DIAGNOSI PRECOCE GESTAZIONE individuazione inseminazioni infruttuose individuazione casi di infertilità ECOGRAFIA Tecniche di laboratorio: riconoscimento precoce stato gestativo evoluzione stato gestativo fino al parto
Dosaggi realizzabili...
Piano di lavoro Early Pregnancy Factor Progesterone Estrogeni Gonadotropine Corioniche Ormone Lattogeno Placentare Proteine Specifiche o Associate alla Gestazione Fisiologia della Riproduzione, FMV, Università di Perugia
Segnali emessi dal conceptus inizio della gestazione Vacca: più domande che risposte Rilevabili nella circolazione materna? Early Pregnancy Factor
Early Pregnancy Factor EPF = Fattore immuno-soppressore Cocchiara et al., 1986 Fattore di crescita Athanasas-Platsis et al., 2000
Early Pregnancy Factor - Test ECF TM Informazioni (Web site) - Concepto Diagnostics Rilevazione del 94-95 % di vacche gestanti tra il 6-20 giorno di gestazione Applicable nel sangue e nel latte Risultati Cordoba et al. 2001 Sensibilità 86 % Specificità 4 % Precisione 46 % (J Dairy Sci, v. 84, p. 1884-89) Risultati Gandy et al. 2001 Rilevazione di manze non gestanti: 44 % tra il 1-3 giorno 56 % tra il 7-9 giorno Risultati : siero o latte (fresco o congelato) (Theriogenology, v. 56, p. 637-47) EPF
Test EPF ECF TM http://www.concepto-diagnostics.com
Piano di lavoro Early Pregnancy Factor - Progesterone - P4 EPF P4
Progesterone Ruolo indispensabile per il mantenimento gestazione Alla base dello sviluppo dei primi metodi di diagnosi ormonale (anni 70) Dosaggi nel plasma e nel latte P4
Progesterone Tab. I. Interpretazione dei risultati otteni dal dosaggio RIA del P4. Risultati* Campioni Negativo Dubbio Positivo Plasma 0,5 a 1 ng/ml 1 a 2 ng/ml > 2 ng/ml Latte 8 ng/ml 8 a 11 ng/ml > 11 ng/ml Crema di L. < 1 ng/10µl - > 1 ng/10µl *Nei risultati si possono osservare variazioni quantitativei ; sono dovute al genere di tecnica impiegata e da variazioni individuali. Derivaux et Ectors (1980) P4
Progesterone DG con dosaggio del P4 (momento del prelievo in rapporto al ciclo estrale) P4
Progesterone LIMITI Finestra dei tempi Precisione del dosaggio soglia, dubbi Degradazione possibile da parte dei GR Falsi positivi: alterazioni del ciclo cisti luteali pseudogravidanze, idrometra P4
Piano di lavoro Early Pregnancy Factor - Progestérone - Estrogeni - Est EPF P4 Est
Estrogeni Sintesi apprezzabile nella donna, topo, suino e giumenta nei ruminanti, sintesi scarsa durante la prima metà della gestazione
Estrogeni Ruolo... Favoriscono la vascolarizzazione locale Aumentano la sintesi di proteine Fleet et Heap, 1982 Esercitano effetti immuno-modulatori Effetti amplificati dalla sensibilizzazione preliminare del progesterone Gabrilovac et al., 1988 Medina et Kincade, 1994
Estrogeni Caratteristiche Scarsa secrezione di estrogeni da parte della placenta Presenza delle forme libere (estrone e estradiolo 17 ) a dei livelli molto bassi fino al 100 giorno di gestazione ed anche più tardi. (Hirako et al. 2000) Presenza delle forme coniugate (estrone solfato ) rilevabili a partire dal 90-100 giorno (Takahashi et al. 1997) Est
Estrogeni Estrogeni dosaggio buon indicatore vitalità placentare vitalità fetale Concentrazione dell estrone solfato nella vacca con gestazione semplice (- - - ) o multipla (- - -) Dobson et al. (1993) Est
Estrogeni Caduta loro concentrazione = disfunzione funzione fetoplacentare Aumento = segno di «benessere» fetale Segnale «tardivo»: permette di seguire l ultima parte della gravidanza
Estrogeni nelle varie specie
Piano di lavoro Early Pregnancy Factor - Progesterone - Estrogeni - Gonadotropine Corioniche - GC EPF P4 Est GC
Gonadotropine Corioniche Contrariamente ai primati (hcg) e agli equidi (ecg e dcg) Non espresse nella placenta dei ruminanti Possibile espressione della sotto-unità beta Assenza d espressione della sotto-unità alfa! Nilson et al. 1991 GC
Nella donna hcg: human Chorionic Gonadotropin hpl: human Placental Lactogen o hcs: human Chorionic Somatomammotropin SP: Schwangerschafts protéines Steroidi: Progesterone, pregnandiolo, estrogeni
Definizione dell hcg Glicoproteina costituita da 2 sub-unità e legate da un legame non covalente
Struttura dell hcg Molto vicina a quella del LH Struttura primaria, secondaria e terziaria vicina a quella del LH umano hcg consta di 30 amminoacidi in più della sub-unità del LH Physiologie de la Reproduction, FMV, ULg
Struttura tridimensionale dell hcg. Sub-unià in rosso, sub-unità in blu, ponti bisolfuro in nero Structure, 1994 2:545-558
Ruolo del hcg Segnale embrionale Mantenimento del corpo luteo Trasformazione del corpo luteo ciclico in corpo luteo gravidico Stimola la secrezione di progesterone
hcg La secrezione di un ormone gonadotropo dal trofoblasto e poi dalla placenta spiega la trasformazione del corpo luteo gravidico nei primati (hcg, mcg, ) hcg: human Chorionic Gonadotropin mcg: monkey Chorionic Gonadotropin
Concentrazione del hcg Rilevabile dal 9 giorno dopo il concepimento Si eleva considerevolmente nel 1 trimestre della gestazione Resta alto fino al parto
Profilo plasmatico del hcg
Negli equini ecg: equine Chorionic Gonadotropin o PMSG: Pregnant Mare Serum Gonadotropin PL: non rilevabile SP: non descritta Steroidi: derivati degli estrogeni
Definizione dell ecg/pmsg Glicoproteina costituita da 2 sub-unità e legate da un legame non covalente L ecg contiene il 47% di carbone idrato ed il 13% di acido sialico Non si trova nell urina, ma nel sangue materno (contrariamente all hcg )
Struttura dell ecg Molto simile a quella del LH equino Sequenza amminoacidica identica Differente glicosilazione
Concentrazione dell ecg Rilevabile dopo il 38 giorno di gestazione Aumenta considerabilmente tra il 40 ed il 120 giorno della gestazione Scompare dopo il 150 giorno di gestazione
Ruolo dell ecg: interviene dopo il 38 giorno di gestazione Provoca il sopraggiungere di nuove ovulazioni Provoca la formazione di nuovi corpi lutei Stimola la secrezione di progesterone da parte di «C.L. accessori» fino al momento in cui comincia la sintesi placentare
Ormone Corionico Gonadotropo Nella donna e nella cavalla, le gonadotropine corioniche (placenta) sono costituite da 2 sub-unità ( e ) come le gonatropine FSH e LH! Nei ruminanti Nilson et al. (1991) hanno mostrato l assenza dell espressione del gene codificante per la sub-unità alfa nella placenta dei ruminanti
Gonadotropine corioniche Contrariamente ai primati (hcg) e agli equidi (ecg) Non si esprime nella placenta dei ruminanti Possibile espressione della sub-unità beta Assenza d espressione della sub-unità alfa! Nilson et al. 1991 Physiologie de la Reproduction, FMV, ULg
Piano di lavoro Early Pregnancy Factor - Progesterone - Estrogeni - Gonadotropine Corioniche - Ormone Lattogeno Placentare - PL EPF P4 Est GC PL
Ormone Lattogeno Placentare Storia... Osservazione iniziale di Selye et al., 1933 Fino ad oggi, sono state ritrovate nel topo, nel ratto, nella donna, nella capra, nella pecora e nella vacca... e non è stata ritrovata nella giumenta, nella scrofa, né nei carnivori (cagna, gatta)
Trophoblast Wooding et Beckers (1987) 42
ATTIVITA BIOLOGICA -Mammogenesis e Lattogenesis - Fetal growth activity - Crescita lobulo-alveolare della ghiandola mammaria e per la produzione del latte: pecore e capre - Crescita fetale: bovina. 43
Ormone Lattogeno Placentare Profili plasmatici del bpl nella madre (- - -) e nel feto (- - -) PL
Ormone Lattogeno Placentare EPF IFN P4 Lattogeno Placentare Variazione individuale dell ormone lattogeno placentare: tra il 26-100 g PL
Ormone Lattogeno Placentare 40-45 gg di gestazione La concentrazione aumenta gradualmente per avere un picco nell ultimo terzo della gestazione La concentrazione decresce progressivamente nelle 36 h che precedono il parto
Piano di lavoro Early Pregnancy Factor - Progesterone - Estrogeni - Gonadotropine Corioniche - Ormone Lattogeno Placentare - Proteine Specifiche o Associate alla Gestazione - PAG EPF P4 Est GC PL PAG
CHE COS E L ECOGRAFIA? E una metodica che permette di ottenere immagini degli organi interni utilizzando onde ultrasonore ad altra frequenza Gli echi derivanti dalle onde sono registrati e visualizzati su monitor in tempo reale
ECO SI Ecografia addominale (fegato, colecisti, vie biliari, milza, pancreas, reni e vescica. Ecografia pelvica (utero, ovaie, vescica) Ecografia superficiale (tiroide, muscoli, tendini, mammella, articolazioni)
ECO NO OSSO ARIA Hanno impedenze acustiche da riflettere tutti gli ultrasuoni e generare una superficie bianca Tale situazione impedirà lo studio di ciò che è al loro interno o dietro di loro