IMMUVIEW. L. pneumophila Test per la ricercar dell antigene urinario di ITALIANO
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1 IMMUVIEW S. pneumoniae e L. pneumophila Test per la ricercar dell antigene urinario di ITALIANO Test a flusso laterale combinato per il rilevamento qualitativo di antigeni di S. pneumoniae e L. pneumophila nelle urine e S. pneumoniae nel liquido cerebrospinale 1
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3 TEST PER LA RICERCA DELL ANTIGENE URINARIO DI S. PNEUMONIAE E L. PNEUMOPHILA IMMUVIEW Per uso diagnostico in vitro Uso previsto Il test ImmuView per la ricerca dell antigene urinario di S. pneumoniae e L. pneumophila è destinato alla diagnosi di infezioni da Streptococcus (S.) pneumoniae e Legionella (L.) pneumophila mediante rilevamento di antigeni urinari per uno o entrambi S. pneumoniae e L. pneumophila di sierogruppo 1. Il dosaggio è inoltre destinato alla diagnosi delle infezioni da S. pneumoniae mediante rilevamento dell'antigene S. pneumoniae nel liquido cerebrospinale (CSF). Il test è un test a flusso laterale noto anche come dosaggio immunocromatografico a flusso laterale. Descrizione Il test ImmuView per la ricerca dell antigene urinario di S. pneumoniae e L. pneumophila è un test a flusso laterale rapido per il rilevamento qualitativo di S. pneumoniae in campioni di urina umana e CSF e di antigeni di L. pneumophila di sierogruppo 1 in campioni di urina umana. Il test è efficace nella diagnosi presuntiva di polmonite da pneumococco causata da S. pneumoniae o Legionella polmonite (malattia del legionario) causata da L. pneumophila sierogruppo 1, in concomitanza con la coltura e altri metodi. Il trattamento corretto e precoce è di vitale importanza per la prognosi di entrambe le malattie e pertanto i metodi rapidi per confermare entrambe le malattie nella fase iniziale sono molto importanti al fine di iniziare il trattamento antibiotico appropriato il prima possibile. 3
4 Principio Il test ImmuView per la ricerca dell antigene urinario di S. pneumoniae e L. pneumophila è un test a flusso laterale rapido per la rilevazione di S. pneumoniae e L. pneumophila mediante l'uso dello stesso test. Limitazioni Il test ImmuView per la ricerca dell antigene urinario di S. pneumoniae e L. pneumophila non è stato convalidato per l'uso con campioni di urina di bambini sotto gli 8 anni. Il test ImmuView per la ricerca dell antigene urinario di S. pneumoniae e L. pneumophila è stato convalidato usando solo campioni di urina e CSF. Altri campioni (ad es. siero o altri fluidi corporei) che possono contenere antigeni non sono stati convalidati. La sensibilità del test ImmuView per la ricerca dell antigene urinario di S. pneumoniae e L. pneumophila durante il test dei campioni di CSF è stato convalidato solo per S. pneumoniae. La diagnosi di infezione da S. pneumoniae o L. pneumophila non può essere basata esclusivamente su evidenza clinica o radiologica. Un risultato negativo non esclude un'infezione da Legionella, in quanto può essere causata da altri sierogruppi e specie di Legionella. Non esiste un singolo test di laboratorio soddisfacente per la malattia del legionario. Pertanto, i risultati della coltura, PCR, sierologia e/o metodi di rilevamento dell'antigene devono essere usati insieme ai risultati clinici per effettuare una diagnosi accurata. 4
5 Un risultato negativo non esclude un'infezione da S. pneumoniae. Il risultato di questo test, nonché della coltura, della sierologia o di altri metodi di rilevamento degli antigeni, devono essere usati insieme ai risultati clinici per effettuare una diagnosi accurata. I test di campioni di urina prelevati da pazienti che sono stati vaccinati in relazione a S. pneumoniae negli ultimi 6 giorni possono causare risultati falsi positivi nel test ImmuView per la ricerca dell antigene urinario S. pneumoniae e L. pneumophila. La lettura dei risultati del test prima di 15 minuti o dopo 20 minuti può fornire risultati non corretti. Il test non ha lo scopo di sostituire la PCR o la coltura. 5
6 Materiali forniti 1 provetta con 22 strisce 0,5 ml di controllo positivo combinato per S. pneumoniae e L. pneumophila 0,5 ml di controllo negativo combinato per S. pneumoniae e L. pneumophila 2,5 ml di running buffer (RB) 1 pinzetta 22 pipette di trasferimento 22 provette 1 portaprovette in cartone Una breve guida si trova all'interno della scatola e a pagina 8 di questo documento. Materiali necessari ma non forniti Timer Provette di trasporto/contenitori di raccolta CSF o delle urine standard sterili. Raccolta dei campioni Raccogliere il campione di urina in un contenitore standard sterile (con o senza acido borico come conservante). Se il campione viene testato entro 24 ore può essere conservato a temperatura ambiente. In alternativa, il campione può essere conservato a 2-8 C per 1 settimana o congelato (-20 C) per almeno 2 settimane. Assicurarsi che i campioni raggiungano sempre la temperatura ambiente prima di eseguire il test. I campioni di CSF dovrebbero essere testati il più presto possibile dopo il campionamento o essere conservati congelati fino a quando è possibile eseguire il test. 6
7 Procedura I controlli positivi e negativi devono seguire la stessa procedura come se fosse un campione di urina o CSF. Il controllo positivo deve essere visibile sulla linea dei test di controllo e sulla linea dei test S. pneumoniae e L. pneumophila. Il controllo negativo deve essere visibile solo sulla linea di controllo. 1. Portare il campione di urina o CSF del paziente a temperatura ambiente. Centrifugare con cura prima del test.* 2. Posizionare una provetta nel supporto di cartone. 3. Riempire la pipetta di trasferimento con urina o CSF e aggiungere 3 gocce (120 µl) di campione alla provetta di test (tenere la pipetta in posizione verticale).** 4. Aggiungere 2 gocce (90 µl) di running buffer (RB) alla provetta di test (tenere la bottiglia del buffer in posizione verticale). 5. Centrifugare delicatamente la provetta. 6. Prendere il contenitore del "test", aprirlo ed estrarre il numero necessario di strisce del test, poi chiuderlo saldamente. 7. Inserire la striscia nella provetta. 8. Attendere 15 minuti. 9. Sollevare la striscia reattiva dalla provetta. Leggere il risultato entro 5 minuti. *** 10. Smaltire la striscia utilizzata dopo l'interpretazione del risultato. * Se il campione di urina contiene sangue visibile, confermare un risultato positivo facendo bollire il campione per 10 minuti. ** Il test è stato anche convalidato per l'uso di soli 10 μl di CSF aggiungendo 200 μl di running buffer. *** In caso contrario, il risultato del test potrebbe non essere attendibile. 7
8 Breve guida Adição de amostras Adicionar o tampão contínuo e girar cuidadosamente Adicionar o teste e aguardar 15 minutos 3 gotas (120 µl) 2 gotas (90 µl) Teste válido A: Controlo B: Legionella C: S. pneumoniae A B C A B C A B C A B* C* A B C * Observe atentamente. A intensidade das linhas B e C pode variar de muito clara a ténue. Legionella e S. pneumoniae positivo Legionella positivo S. pneumoniae positivo Legionella and S. pneumoniae positive * Negativa Teste inválido repetir A A A A B B B B C C C C Nenhum controlo teste inválido Nenhum controlo teste inválido Três linhas cinzentas/púrpura - teste inválido, fervura recomendada Linha incompleta - teste inválido 8
9 Interpretazione dei risultati La linea del test di controllo nella parte superiore apparirà viola/grigia, ma può anche essere più blu o rossa a seconda che il campione sia positivo per S. pneumoniae o L. pneumophila di sierogruppo 1. Solo una linea intera indica un risultato positivo - i puntini non indicano un risultato positivo (vedere il risultato del test numero 9, pagina 8). Un campione positivo sia per la Legionella sia per S. pneumoniae mostrerà una linea rosa/rossa nella metà inferiore del test per la positività a S. pneumoniae seguita da una linea blu al centro per la positività a L. pneumophila di sierogruppo 1, mentre nella parte superiore del test comparirà una linea di controllo viola/grigia (vedere il risultato del test numero 1, pagina 8). Un campione positivo per la Legionella mostrerà una linea blu per la positività a L. pneumophila di sierogruppo 1, mentre nella parte superiore del test apparirà, invece, una linea di controllo viola/grigia (vedere il risultato del test numero 2, pagina 8). Un campione positivo per S. pneumoniae mostrerà una linea rosa/rossa per la positività a S. pneumoniae di sierogruppo 1, mentre nella parte superiore del test apparirà, invece, una linea di controllo viola/grigia (vedere il risultato del test numero 3, pagina 8). È bene osservare da vicino. Anche in presenza di una linea molto debole per la Legionella o S. pneumoniae o per entrambi, il risultato del test è positivo (vedere il risultato del test numero 4, pagina 8). La "Scorecard" allegata può aiutare a stabilire se il risultato del test è positivo o negativo. Un campione negativo mostrerà una singola linea di controllo viola/grigia nella parte superiore del test (vedere il risultato del test numero 5, pagina 8). Un risultato negativo non esclude un'infezione da S. pneumoniae o Legionella, vedere le limitazioni. Nota: tre linee di test di colore viola/grigio non indicano un risultato positivo. (vedere il risultato del test numero 8, pagina 8). 9
10 Se si osservano tre linee grigie, il risultato può essere confermato facendo bollire il campione di urina per circa 10 minuti. L'ebollizione può essere utilizzata anche per la conferma di un risultato positivo poiché gli antigeni di Legionella e S. pneumoniae sono stabili al calore. Ricordarsi di lasciare raffreddare il campione di urina a temperatura ambiente prima di ritestare il campione. Se non viene osservata alcuna linea di controllo, il test non è valido e il campione deve essere sottoposto a nuovo test (vedere i risultati dei test numeri 6 e 7, pagina 8). Sensibilità e specificità clinica per l'urina La sensibilità clinica della linea di test S. pneumoniae è stata ottenuta testando campioni di urine retrospettivi di pazienti con un campione positivo di emocoltura relativo a S. pneumoniae 1. La sensibilità clinica della linea di test per L. pneumophila è stata ottenuta testando campioni di urina retrospettivi di pazienti con malattia dei legionari confermata in base ai criteri ECDC. 1. La specificità clinica delle linee di test S. pneumoniae e L. pneumophila sono state ottenute testando campioni di urina di pazienti con infezioni del tratto urinario e campioni negativi di emocoltura. Inoltre, non è stata rilevata alcuna reazione incrociata tra campioni di urina di S. pneumoniae e L. pneumophila di sierogruppo 1. I valori di sensibilità sono stati calcolati utilizzando l'intervallo di confidenza Wilson del 95%. 10
11 Casi di S. pneumoniae confermati (71 campioni) ImmuView positivo 60 negativo 11 Sensibilità ImmuView 85% (CL: 74-91%) Comparatore positivo 55 negativo 16 Sensibilità comparatore 77% (CL: 66-86%) Casi confermati di Legionella pneumophila (99 campioni) ImmuView positivo 88 negativo 11 Sensibilità ImmuView 89% (CL: 81-94%) Comparatore positivo 71 negativo 28 Sensibilità comparatore 72% (CL: 62-80%) Specificità S. pneumoniae 99% (75/76 CL: %) L. pneumophila 100% (76/76 CL: %) 11
12 Accordo positivo con altri UAT L'accordo positivo di S. pneumoniae è stato eseguito in una popolazione campione contenente campioni positivi di emocoltura. L'accordo positivo di L. pneumophila è stato eseguito in una popolazione campione contenente campioni di coltura e/o PCR positivi. L'accordo positivo è stato calcolato con un intervallo di confidenza di Wilson del 95%, dividendo il numero di campioni ImmuView per il numero di campioni positivi trovati dal comparatore. S. pneumoniae Comparatore Campioni positivi di emocoltura positivo negativo Totale ImmuView positivo negativo Totale Accordo positivo 97% (58/60 CL: 89-99%) L. pneumophila Comparatore positivo a PCR e/o coltura positivo negativo Totale ImmuView positivo negativo Totale Accordo positivo 98% (64/65 CL: %) 12
13 Accordo negativo con altri UAT L'accordo negativo S. pneumoniae è stato eseguito in una popolazione campione contenente casi non-pneumococcici (n = 90 campioni batteremici e n = 6 nonbatteremici). 2. L'accordo negativo L. pneumophila è stato eseguito in una popolazione campione sottoposta a pre-screening con EIA dell'antigene urinario. Tutti i campioni inclusi nel pool hanno mostrato un risultato negativo quando si utilizza il comparatore (EIA dell'antigene urinario) non- Comparatore casi di pneumococco positivo negativo Totale ImmuView positivo negativo Totale Accordo negativo 100% (93/93 CL: %) EIA dell'antigene urinario negativo diretto a L. pneumophila sg. 1 positivo Comparatore negativo Totale ImmuView positivo negativo Totale Accordo negativo 100% (456/456 CL: %) 13
14 Sensibilità e specificità analitiche per i campioni di urina Per determinare la sensibilità analitica e la specificità del test ImmuView per la ricerca dell antigene urinario di S. pneumoniae e L. pneumophila sono stati testati un pannello di 92 sierotipi S. pneumoniae, gli 8 sottogruppi di L. pneumophila di sierogruppo 1, 16 specie di L. pneumophila non di sierogruppo 1, 4 specie di Legionella e un pannello di 116 potenziali reattivi incrociati (vedere la tabella a pagina 15). Non sono state rilevate reazioni incrociate. Il pannello di 116 potenziali reattivi incrociati è stato inoculato in urina negativa a una concentrazione di 10 7 CFU/ml. Le prestazioni analitiche del test sono: Sensibilità (n = 100) 100%. Specificità (n = 116) 100% 14
15 Acinetobacter (4) L. catenaforme S. mutans B. subtilis L. rhamnosus S. parasanquis B. pertussis L. monocytogenes S. sanquis B. catarrhalis M. morganii S. saprophyticus C. albicans (4) M. olsoensis S. Thomson C. aquaticum (2) N. cineria S. typhimurium Corynebacterium sp. N. gonorrhoeae (3) S. marcescens E. cloacea (4) N. lactamica S. aureus (6) E. coli (10) N. meningitidis S. epidermidis (5) E. faecalis (5) N. polysak S. saprophyticus E. faecium P. mirabilis (2) S. maltophilia E. durans P. vulgaris (2) Streptococcus gruppo A (2) G. vaginalis Pseudomonas (2) Streptococcus gruppo B (10) H. influenzae (11) Ps. aeruginosa (4) Streptococcus gruppo C H. parainfluenzae Ps. stutzeri Streptococcus gruppo F K. oxytoca (2) S. bredeney Streptococcus gruppo G K. pneumoniae (3) S. epidermidis Streptococcus gruppo L Lactobacillus S. glostrup 15
16 Sensibilità e specificità clinica per CSF La sensibilità della linea di test di S. pneumoniae è stata ottenuta testando 12 campioni di CSF che erano positivi alla coltura S. pneumoniae e 15 campioni CSF inoculati con S. pneumoniae. La specificità della linea di test S. pneumoniae è stata ottenuta testando 170 campioni di CSF negativi da donatori negativi. Sensibilità Specificità S. pneumoniae 100% (27/27) 98.8% (168*/170) L. pneumophila N/A 100% (170/170) * 2 campioni sono stati testati e sono risultati positivi e confermati positivi sia con un altro test a flusso laterale per S. pneumoniae sia con ImmuLex S. pneumoniae Omni. Non è stato possibile coltivare batteri relativi ai campioni, il che può essere causato da un congelamento e uno scongelamento del campione eseguito troppe volte. La sensibilità della linea di test relativa a L. pneumophila non è stata convalidata poiché è stato riportato solo un caso di meningite da Legionella. La linea di test relativa a L. pneumophila era pari al 100% (170/170). Conservazione e durata Conservare a temperatura ambiente. La data di scadenza è stampata sulla confezione. 16
17 Certificato di qualità Lo sviluppo, la produzione e la vendita di kit diagnostici in vitro di SSI Diagnostica sono garantiti in termini di qualità e certificati conformemente alla norma ISO Bibliografia 1. Jørgensen, Uldum, Sørensen, Skovsted, Otte, Elverdal. (2015) Evaluation of a new lateral flow test for detection of Streptococcus pneumoniae and Legionella pneumophila urinary antigen. J Microbiol Methods. 116 (2015): Athlin, Iversen, Özenci. (2017) Comparison of the ImmuView and the BinaxNOW antigen tests in detection of Streptococcus pneumoniae and Legionella pneumophila in urine. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 6 giugno Epub 6 giugno D. Lindsay et al. 2014, Poster on ESGLI 2016: Evaluation of the ImmuView urinary antigen test for the detection of Legionella pneumophila and Streptococcus pneumoniae. 17
18 Informazioni e ordini SSI Diagnostica A/S Herredsvejen Hillerød Danimarca T info@ssidiagnostica.com ssidiagnostica.com, immuview.com shop.ssidiagnostica.com 18
19 10 a edizione maggio
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