ALLflow Elution Technologies Almond Proteins Rapid Test

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Marisa Pippi
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1 ALLflow Elution Technologies Almond Proteins Rapid Test Lateral Flow Kit Cat. # ETALMD-1007 Kit per la rilevazione rapida delle proteine della Mandorla in campioni alimentari ed ambientali Manuale d uso Leggere attentamente il manuale prima di procedere all uso del kit [1] User Manual - ALLwell Almond Protein ELISA Kit - Rev. 1-29/07/2016

1 Principio del test e suo utilizzo Questo test è stato progettato per l identificazione di bassi livelli di proteine della Mandorla fino a 2 ppm (la sensibilità dipende dalla matrice di utilizzo) in

2 1 Principio del test e suo utilizzo Questo test è stato progettato per l identificazione di bassi livelli di proteine della Mandorla fino a 2 ppm (la sensibilità dipende dalla matrice di utilizzo) in materie prime, prodotti finiti, acque di lavaggio industriale (CIP - Clean in Place Solution), campionamenti da superficie mediante tamponi. Il limite superiore di rilevamento è pari a ~10mg/ml di proteine di Mandorla in soluzione salina. Campioni che contengano più del 5% di Mandorla possono generare falsi negativi, per questa ragione è stata inserito un controllo interno, rappresentato dalla formazione di una terza linea nel test (Hook Line). Se la Hook Line non si evidenzia durante l esecuzione del test questo indica un sovraccarico del test, rendendo necessaria la diluizione del campione. Se la linea di controllo non è visibile durante l esecuzione del test, il test è da ritenersi non valido. Come tutti i metodi di analisi per il settore alimentare anche questo test deve essere testato sulla specifica matrice di interesse per escludere la presenza di inibitori che possono determinare risultati non attendibili. ALLflow ALMOND Rapid Test è prodotto dal nostro partner ELUTION TECHNOLOGIES. Questo manuale è la traduzione della versione del manuale originale. 2 Avvertenze Ogni lotto di soluzione viene validata in modo specifico per ciascun lotto LFD e non è intercambiabile con altri lotti. Per evitare problemi di contaminazioni non utilizzare la stessa pipetta per analizzare più campioni. Attendere che tutti i reagenti e il materiale siano a temperatura ambiente prima di effettuare l analisi. Utilizzare la quantità richiesta di reagente e aver cura di conservare il rimanente in un luogo refrigerato. Quattro gocce prelevate con una pipetta corrispondono a 100 µl circa. Per assistenza consultare i tecnici Generon ( - laboratorio@generon.it) o in alternativa il sito dove sono disponibili istruzioni video per il corretto utilizzo del test. [2] User Manual - ALLwell Almond Protein ELISA Kit - Rev. 1-29/07/2016

3 Contenuto del kit e dotazione necessaria Il kit contiene il seguente materiale per 25 test: Extraction/Running Buffer Lateral Flow Devices (LFD) Tubi per microcentrifuga 2 ml Tamponi per prelievo

3 3 Contenuto del kit e dotazione necessaria Il kit contiene il seguente materiale per 25 test: Extraction/Running Buffer Lateral Flow Devices (LFD) Tubi per microcentrifuga 2 ml Tamponi per prelievo Pipette Conservazione del kit: Le soluzioni possono essere conservate a temperatura ambiente per 90 giorni. Per tempi superiori conservare a 4-8 C. Non congelare nessun componente nel kit. I reagenti non devono essere esposti alla luce ultravioletta o a fonti di calore prolungato. Conservare in luogo pulito e asciutto Dotazione necessaria: Centrifuga: Richiesta per I campioni contenenti cioccolata Raccomandata per gli altri campioni ma non obbligatoria Vortex Raccomandato per gli altri campioni ma non obbligatorio Bilancia Richiesta Timer Richiesto Frullatore Richiesto 4 Preparazione campioni CIP (Clean in Place Solution) Step 1 - Prelevare 800 µl di Extraction Buffer e deporli in una provetta da microcentrifuga. Step 2 - Utilizzando la stessa pipetta aggiungere 200 µl di soluzione CIP, mescolare bene per circa 30 secondi. Questo è l Extracted Mixed Sample. Per ottenere i migliori risultati il ph del campione dovrebbe essere compreso tra 5 e 10. Se il ph è al di sopra o al di sotto di questi livelli, effettuare una diluizione mantenendo la proporzione 1:1 (100 µl di campione e 100 µl di soluzione) fino a che il ph non rientra in questi parametri. Questo può ridurre la sensibilità fino a 4 ppm. Se si analizza più di un campione, assicuratevi di non utilizzare la stessa pipetta per ciascun campione per evitare contaminazione incrociata. [3] User Manual - ALLwell Almond Protein ELISA Kit - Rev. 1-29/07/2016

5 Preparazione campioni prelevati con tampone Step 1 - Prelevare dal kit e siglare una microprovetta da centrifuga. Aggiungere 500 µl di Extraction Buffer nella provetta da microcentrifuga.

sulla superficie da analizzare e strofinare la superficie di interesse (vedi figura sottostante). Step 4 - Inserire il tampone nella provetta da microcentrifuga.

4 5 Preparazione campioni prelevati con tampone Step 1 - Prelevare dal kit e siglare una microprovetta da centrifuga. Aggiungere 500 µl di Extraction Buffer nella provetta da microcentrifuga. Step 2 - Imbibire un tampone pulito nella soluzione contenuta nella provetta da microcentrifuga avendo cura nell estrazione di eliminare la soluzione in eccesso Step 3 - Appoggiare il tampone bagnato sulla superficie da analizzare e strofinare la superficie di interesse (vedi figura sottostante). Step 4 - Inserire il tampone nella provetta da microcentrifuga. Step 5 - Mescolare diverse volte in modo da rilasciare il campione nella soluzione di estrazione. Step 6 Spezzare il bastoncino lasciando lo swab all interno e tappare il tubo. 6 Preparazione di campioni liquidi Step 1 - Prelevare dal kit e siglare una microprovetta da centrifuga. Step 2 - Aggiungere 900 µl di Extraction Buffer nella microprovetta da centrifuga Step 3 - Aggiungere 100 µl del campione dopo averlo mescolato. Agitare bene. Questo è l Extracted Mixed Sample. Nota: se il campione è troppo viscoso potrebbe non migrare correttamente lungo la strip. In questo caso è opportuno centrifugarlo e diluirlo 1:1 con Extraction Buffer prima di procedere. [4] User Manual - ALLwell Almond Protein ELISA Kit - Rev. 1-29/07/2016

5 7 Preparazione di campioni solidi e contenenti cioccolato Step 1 (A or B): A - Cioccolato liquido: Misurare 500 µl di campione rappresentativo del vostro ingrediente/prodotto in una provetta da 2 ml. Aggiungere 500 µl di soluzione di estrazione (Extraction Buffer) preriscaldata a ~50 C ed agitare vigorosamente. Procedere allo Step 2 NOTA: Per alcune matrici questo passaggio può ridurre la sensibilità fino a 4 ppm. B Campioni solidi (qualsiasi): Macinare finemente un campione rappresentativo. Pesare 0.2 g di campione macinato in una provetta da 2 ml. Aggiungere la soluzione di estrazione (Extraction Buffer) preriscaldata a ~50 C portando ad un volume di 2 ml. Mescolare bene facendo fondere l eventuale cioccolata presente. Procedere allo Step 5 Step 2 - Prelevare una provetta da 2 ml e siglarla Step 3 - Misurare 900 µl di soluzione di Extraction Buffer e metterli nella provetta siglata. Step 4 - Aggiungere 100 µl di campione dallo Step 1A ben mescolato. Step 5 - Centrifugare per secondi a RPM. Questo è l Extracted Mixed Sample [5] User Manual - ALLwell Almond Protein ELISA Kit - Rev. 1-29/07/2016

8 Procedure specifiche per l esecuzione del test Step 1 - Prelevare la strip LFD dalla confezione e posizionarla su di una superficie pulita, piatta e asciutta.

Step 3 - Depositare 100 μl del campione (4 gocce) sull area di applicazione (apertura rotonda) ad una estremità del supporto LFD Step 4 Avviare il timer ed attendere 11 minuti.

6 8 Procedure specifiche per l esecuzione del test Step 1 - Prelevare la strip LFD dalla confezione e posizionarla su di una superficie pulita, piatta e asciutta. Step 2 - Prelevare 100 μl di l Extracted Mixed Sample dallo strato centrale della soluzione, utilizzando la stessa pipetta di trasferimento usata per la preparazione dell'estratto. Step 3 - Depositare 100 μl del campione (4 gocce) sull area di applicazione (apertura rotonda) ad una estremità del supporto LFD Step 4 Avviare il timer ed attendere 11 minuti. 9 Intrepretazione dei risultati Un campione deve essere considerato negativo alla MANDORLA quando sono visibili solo la Control Line (C-line) e la Hook Line (linea centrale). Un campione deve essere considerato positivo alla MANDORLA quando sono visibili tutte e tre le linee. Se la Hook Line non fosse visibile il campione potrebbe essere molto contaminato da Mandorla e va pertanto diluito. Se la Control Line, non è visibile il test va ripetuto. NOTA: Letture effettuate dopo 15 minuti dalla semina del campione sono da considerarsi NON ATTENDIBILI. [6] User Manual - ALLwell Almond Protein ELISA Kit - Rev. 1-29/07/2016

7 10 Domande frequenti Domanda: il campione non riesce a migrare lungo la strip entro i primi 5 minuti. Risposta: potrebbe essere necessario centrifugare il campione se questo non è stato già fatto durante la preparazione. Se il campione è già stato centrifugato diluire ulteriormente il campione mantenendo la proporzione 1:1 con il tampone. Questo potrebbe ridurre la sensibilità a 1 ppm per alcune matrici. Domanda: sulla linea del test compare un punto rosso ma tutto il resto è chiaro. Risposta: centrifugare il campione e ripetere utilizzando un nuovo test. La causa potrebbe essere il particolato contenuto nel campione stesso. 11 Dichiarazione di non responsabilità Generon S.p.A. non si assume responsabilità di alcun tipo, esplicite o implicite, eccetto garantire che i materiali di cui i propri prodotti si compongono sono di qualità standard. In caso di materiale difettoso, Generon S.p.A. si impegna a fornire un prodotto sostitutivo. Generon S.p.A. non è tenuta a rispondere per qualunque danno, inclusi danni speciali o consequenziali o spese che derivano direttamente o indirettamente dall`uso di questo prodotto. L acquirente può duplicare questo documento, in tutto o in parte, solo per scopi interni, a condizione che questa nota venga riportata in tutte le copie. Nella duplicazione l acquirente si impegna a compiere ogni ragionevole sforzo per impedire l'uso non autorizzato e la distribuzione delle informazioni sulla proprietà. Questo manuale è la semplice traduzione in lingua italiana del manuale in lingua straniera presente nel kit. [7] User Manual - ALLwell Almond Protein ELISA Kit - Rev. 1-29/07/2016

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