QuickTox TM Kit for QuickScan

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1 QuickTox TM Kit for QuickScan Common Extraction Common Extraction Accessory Set (ACC105) Cat.# GX12496 Aflatoxin Flex (AQ-309 BG) Cat.# GX12376 DON Flex (AQ-304 BG) Cat.# GX12208 Fumonisin Flex (AQ-311 BG) Cat.# GX12210 Versione del Software QS Update 2 o successiva Manuale d uso Leggere attentamente il manuale prima di procedere all uso del kit Via San Geminiano, San Prospero (MO)- Italia : : : immunolab@generon.it : [1] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan Common Extraction - Rev. 1-23/10/2017

2 1 Common Extraction Accessory Set Il Common Extraction Accessory Set è utilizzabile con i seguenti kit: GX12376 QuickTox kit for Aflatoxin Flex GX12208 QuickTox kit for DON Flex GX12210 QuickTox kit for Fumonisin Flex Il protocollo dell estrazione comune consente di ricercare diverse micotossine (aflatossine, deossinivalenolo e fumonisine) sulla medesima preparazione di un campione di mais. Importante: richiede un campione da 25g o 50g e un tempo di corsa delle strip di 4 minuti. Contenuto del set: Buffer DB5 (173 ml) Elementi non forniti: 50 bustine solubili in acqua di Buffer EB17 (GX12382, necessarie solo se non si acquista il QuickTox kit for Aflatoxin Flex (GX12376)) Note importanti: È richiesta la versione del software QS Update 2 o successiva. Per ogni lotto scansionare i Multi-Matrix Barcode (MMBC) presenti in ciascun QuickTox kit una sola volta. Generon può fornire tutti i materiali necessari ad eseguire l analisi non presenti nei kit: bilancia (Cat. # ACC3039); barattoli per la pesata (Cat. # ACC3525); pipette a volume variabile da 200 µl (Cat. # ACC3015) e 1000 µl (Cat. # ACC3014); puntali da 1000 µl (Cat. # ACC3514); microcentrifuga (Cat. # ACC1064) o filtri di carta (Cat. # ACC3504); microtubi (Cat. # ACC1564); agitatore meccanico (Cat. # ACC1912); termoblocco (GX12458); tubi trasparenti (Cat. # ACC2510); cilindro graduato (Cat. # ACC1506). 2 Precauzioni SICUREZZA Leggere attentamente la scheda di sicurezza del Buffer DB5 e delle bustine di EB17 prima di maneggiarli. GENERALE Leggere le istruzioni, incluse le precauzioni di sicurezza, prima di utilizzare i kit. Le strip sono sensibili all umidità pertanto si consiglia di conservarle all interno del tubo ben chiuso. Il tappo contiene silice disseccante che le proteggerà. Evitare di piegare le strip in quanto questo comprometterebbe il loro normale funzionamento. Portare i kit a temperatura ambiente (20-24 C) prima di iniziare le analisi. Agitare immediatamente dopo l aggiunta dell acqua al campione contenente la bustina solubile di EB17. Testare gli estratti entro 5 minuti dalla diluizione in buffer DB5 per risultati ottimali. L analisi deve essere eseguita nel range di temperatura C. [2] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan Common Extraction - Rev. 1-23/10/2017

3 3 Matrice validata e Range di GX12376 QuickTox kit for Aflatoxin Flex: Il QuickTox kit for Aflatoxin Flex fornisce risultati quantitativi per la presenza di aflatossine totali nel range ppb: Matrice validata (Matrix Group) Protocollo Risultati riportati nel range: (LOD)* massimo* Range Base 0-30 ppb 2.7 ppb 30 ppb Mais (MG1) Diluizione A 0 ->100 ppb 30 ppb 100 ppb Diluizione B 0 -> 300 ppb 100 ppb 300 ppb GX12208 QuickTox kit for DON Flex: Il QuickTox kit for DON Flex fornisce risultati quantitativi per la presenza di deossinivalenolo nel range ppm: Matrice validata Protocollo (LOD)* massimo* Mais (MG21) Range Base 0.2 ppm 8 ppm Diluizione A 2 ppm 30 ppm GX12210 QuickTox kit for Fumonisin Flex: Il QuickTox kit for Fumonisin Flex fornisce risultati quantitativi per la presenza di fumonisine nel range ppm: Matrice validata Protocollo Risultati riportati nel range: (LOD)* massimo* Mais Estrazione Comune (MG4) Range Base 0-9 ppm 1.5 ppm 7 ppm Alta sensibilità ppm 0.2 ppm 1.5 ppm * I risultati al di sotto del LOD o superiori al limite massimo di devono essere considerati meno accurati. [3] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan Common Extraction - Rev. 1-23/10/2017

4 4 Scansione dei Codici a Barre (MMBC) Ciascun kit contiene uno o due fogli con i codici a barre (Multi-Matrix Barcode; MMBC) da scansionare. In particolare i kit Aflatoxin Flex e Fumonisin Flex contengono un unico MMBC, mentre il kit DON Flex contiene due MMBC (per il protocollo dell estrazione comune è possibile scansionare solo il foglio con il codice a barre DF MG21). Scansione dei fogli con i codici a barre (MMBC) di ciascun kit: 1. Mettere il foglio con i codici a barre sul vetro del QuickScan rivolto verso il basso. 2. Nella schermata principale del software QS cliccare su Read Test e attendere la scansione. 3. Sullo schermo apparirà un messaggio con il/i gruppo/i di matrici riconosciuto/i. 4. Cliccare su ok. QuickTox kit for Aflatoxin Flex QuickTox kit for DON Flex (per l estrazione comune scansionare solo il foglio con il codice a barre DF MG21) QuickTox kit for Fumonisin Flex Note importanti: La scansione del codice a barre viene memorizzata per l intero lotto di strip in uso; non è quindi necessario riscansionare fino al cambio del lotto. Il foglio con i codici a barre è specifico per il lotto; alla ricezione di un kit con un lotto diverso è necessario scansionare il MMBC corrispondente. Si raccomanda di mantenere costantemente aggiornato il software del QuickScan all ultima versione disponibile; sarebbe preferibile pertanto che il PC a cui lo scanner è collegato fosse on-line in modo che gli aggiornamenti vengano visti automaticamente. [4] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan Common Extraction - Rev. 1-23/10/2017

5 5 Preparazione del campione 1. Raccogliere un campione rappresentativo del materiale da analizzare seguendo le indicazioni sul campionamento della UE e comunque possibilmente almeno 1-2 Kg. 2. Macinare tutto il campione arrivando ad una granulometria tale che il 95% passi attraverso un setaccio da 20 Mesh (0.8 mm). 3. Mescolare accuratamente tutto il materiale macinato prima di effettuare il sub-campionamento per minimizzare la variabilità. 4. Pesare 25 g o 50 g di campione in un contenitore grande a sufficienza da garantire un'adeguata agitazione del campione. 5. Eseguire l estrazione come riportato nella seguente tabella: Mais 25 g di campione 50 g di campione 1. Aggiungere 1 bustina di buffer EB17 (idrosolubile)* 2. Aggiungere 75 ml di acqua** Agitare immediatamente il campione per 10 secondi per dissolvere la bustina 1. Aggiungere 2 bustine di buffer EB17 del buffer EB17 e per bagnare l intero (idrosolubile)* campione 2. Aggiungere 150 ml di acqua** * Utilizzare l EB17 fornito nel QuickTox kit for Aflatoxin Flex. Se si eseguono test su campioni da 50 grammi o se non si acquista il QuickTox Aflatoxin Flex, è necessario acquistare a parte le bustine di EB17 (Cat# GX12382). ** Usare acqua distillata, deionizzata o acqua non gassata. 6. Agitare il campione (scegliere una delle seguenti possibilità): - con un agitatore orbitale (Cat# ACC1912) ad alta velocità per 1 minuto oppure - vigorosamente a mano per 2 minuti. 7. Chiarificare l estratto (scegliere una delle seguenti possibilità): - riempire un microtubo con l estratto, centrifugare per 30 secondi a 7200 rpm (Cat# ACC1064) e prelevare lo strato liquido superiore per eseguire il test oppure - inserire un apposito filtro in carta plissettata (Cat# ACC3504) in un recipiente vuoto, versare l'estratto nel filtro (filtrazione per un massimo di 2 minuti) e rimuovere il filtro per recuperare l'estratto filtrato nel contenitore. L estratto ottenuto è ora pronto per le analisi. 8. Accendere e settare l incubatore (GX12458) a 22 C almeno 10 minuti prima dell esecuzione del test. Assicurarsi che la temperatura sia stabile e che lo schermo indichi OK prima di iniziare l analisi. [5] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan Common Extraction - Rev. 1-23/10/2017

6 6 Diluizione del campione con Buffer DB5 Inserire nell incubatore un tubo trasparente per ciascuna reazione. Con un puntale trasferire nei tubi i volumi di Buffer DB5 come indicato nella tabella 6.1 (o nella Guida Rapida ). Con puntali nuovi aggiungere ai tubi i volumi di estratto come indicato nella tabella 6.1 (o nella Guida Rapida ). Con la pipetta mescolare bene la soluzione prelevandola e rilasciandola dal puntale. Per il test Fumonisin Flex trasferire 200 µl di estratto diluito in un tubo trasparente ed elimina il tubo blu. Acclimatare i campioni per 2 minuti a 22 C nell incubatore. Miscela di reazione per i diversi kit AQ-309 BG QuickTox kit for Aflatoxin Flex AQ-304 BG QuickTox kit for DON Flex AQ-311 BG QuickTox kit for Fumonisin Flex DB5 100 µl in tubo trasparente 100 µl in tubo trasparente 3 ml in tubo blu Estratto 100 µl in tubo trasparente 100 µl in tubo trasparente 50 µl in tubo blu Trasferire µl in tubo trasparente Tab.6.1 NOTA: I campioni non accuratamente mescolati e/o pipettati influenzeranno negativamente i risultati del test. Non riutilizzare campioni diluiti. 7 Esecuzione del QuickTox Strip Test 1. Mettere le strip nei tubi (contenenti Buffer DB5 e campione estratto) all interno dell incubatore facendo attenzione ad inserire ciascuna strip nella miscela di reazione corrispondente. La freccia all estremità della strip indica il lato da inserire nel tubo. 2. Attendere 4 minuti. 3. Tagliare immediatamente e buttare le estremità delle strip coperte dal nastro con la freccia. 4. Inserire le strip nel QuickScan per la lettura. [6] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan Common Extraction - Rev. 1-23/10/2017

7 8 Lettura della strip 1. Fare doppio clic sull icona QuickScan (QS) per aprire il programma di lettura. Apparirà il menu principale (Fig1). 2. Inserire le strip nel carrello con il codice a barre rivolto verso il basso e vicino all impugnatura (Fig.2). 3. Inserire Il carrello nel lettore (Fig.3). 4. Leggere le strip cliccando su "Read Test" sul software QS e attendere che il QS termini la scansione (Fig.4). 5. Selezionare il «matrix group» di appartenenza per ogni strip analizzata selezionandolo dall apposito menu a tendina (Fig. 5): per il kit QuickTox Aflatoxin Flex (GX12376) e per il kit QuickTox DON Flex (GX12208) è disponibile solo una curva (AF MG1 e DF MG21, rispettivamente), mentre per il kit QuickTox Fumonisin Flex (GX12210) è necessario scegliere la curva FM MG4 dal menu a tendina (Fig.5). Cliccare Next. 6. Nella finestra successiva è necessario selezionare 1:A nella colonna Select Dilution nella riga corrispondente alla strip del kit QuickTox Fumonisin Flex (GX12210), mentre nelle righe corrispondenti alle strip dei kit QuickTox Aflatoxin Flex (GX12376) e del kit QuickTox DON Flex (GX12208) lasciare la diluizione 1:1 di default (Fig.6). Se si esegue un test seguendo il paragrafo Procedure di Diluizione (paragrafo 9), selezionare in Select Dilution la diluizione effettuata. 7. Nella stessa finestra è possibile inserire i dettagli identificativi dell analisi (Fig.7). Affinché l immagine delle strip venga salvata inserire almeno il nome del campione nello spazio Sample ID e premere Invio (Enter) sulla tastiera. Fig.1 Fig.2 Fig.3 Fig.4 Fig.5 Fig.6 Fig.7 Se si desidera stampare immediatamente il report di analisi, premere il comando PRINT in basso a destra. Premere CLOSE per chiudere la finestra di lettura. Per rivedere o stampare i risultati in un secondo momento, doppio clic sulla cartella REPORTS sul desktop. Per visualizzare il registro di tutte le analisi eseguite, cliccare sul comando DATA LOG nella schermata iniziale del programma. [7] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan Common Extraction - Rev. 1-23/10/2017

8 9 Procedure di Diluizione GX12376 QuickTox kit for Aflatoxin Flex: Per campioni con livelli di contaminazione maggiori di 30 ppb (> 30 ppb nel Range Base) di aflatossine. I campioni risultati > 30 ppb con il Range Base possono essere diluiti e ritestati per estendere il range di. 1. Preparare la Soluzione di Diluizione dissolvendo una bustina di EB17 in 150 ml di acqua distillata/deionizzata. La soluzione di diluizione non è limpida e può essere conservata a temperatura ambiente per 30 giorni. Agitare bene prima dell'uso. 2. DILUIZIONE A: ppb 2.a In un nuovo microtubo mescolare 400 µl di Soluzione di Diluizione µl di estratto chiarificato. Conservare questo estratto diluito. 2.b Ripetere il test: mescolare 100 µl di DB µl di estratto diluito (preparato al punto 2.a) in un nuovo tubo trasparente; inserire il tubo nell incubatore impostato a 22 C per 2 minuti, inserire nel tubo una nuova strip e aspettare 4 minuti; procedere con la lettura mediante QuickScan. 2.c Nella finestra dei risultati nella colonna Select Dilution selezionare dal menu a tendina il fattore 1:A; il software calcolerà automaticamente il livello di contaminazione tenendo conto della diluizione effettuata e i risultati sono validi nel range ppb. Per campioni che con il protocollo DILUIZIONE A sono risultati con livelli di contaminazione maggiori di 100 ppb di aflatossine. 3. DILUIZIONE B: ppb 3.a In un nuovo microtubo mescolare 200 µl di Soluzione di Diluizione µl di estratto diluito preparato nello step 2.a. 3.b Ripetere il test: mescolare 100 µl di DB µl di estratto diluito (preparato al punto 3.a) in un nuovo tubo trasparente; inserire il tubo nell incubatore impostato a 22 C per 2 minuti, inserire nel tubo una nuova strip e aspettare 4 minuti; procedere con la lettura mediante QuickScan. 3.c Nella finestra dei risultati nella colonna Select Dilution selezionare dal menu a tendina il fattore 1:B; il software calcolerà automaticamente il livello di contaminazione tenendo conto della diluizione effettuata e i risultati sono validi nel range ppb. GX12208 QuickTox kit for DON Flex: Per campioni con livelli di contaminazione maggiori di 8 ppm (> 8 ppm nel Range Base) di deossinivalenolo. I campioni risultati > 8 ppm con il protocollo del Range Base possono essere diluiti e ritestati. 1. In un nuovo microtubo mescolare 700 µl di acqua µl di estratto per avere una diluizione 1:8 dell estratto. 2. Ripetere il test: 100 µl di DB5 + di 100 µl estratto diluito in un nuovo tubo trasparente; inserire il tubo nell incubatore impostato a 22 C per 2 minuti, inserire nel tubo una nuova strip e aspettare 4 minuti; procedere con la lettura mediante QuickScan. 3. Nella finestra dei risultati nella colonna Select Dilution selezionare dal menu a tendina il fattore 1:A; il software calcolerà automaticamente il livello di contaminazione tenendo conto della diluizione effettuata e i risultati sono validi nel range di 2-30 ppm. [8] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan Common Extraction - Rev. 1-23/10/2017

9 GX12210 QuickTox kit for Fumonisin Flex: Per campioni con livelli di contaminazione minori di 1.5 ppm (< 1.5 ppm nel Range Base) di fumonisina è possibile eseguire il protocollo ad alta sensibilità (Range di ppm). 1. In un nuovo microtubo mescolare 375 µl di DB µl di estratto. 2. Ripetere il test: trasferire 200 µl della soluzione diluita in un tubo trasparente; inserire il tubo nell incubatore impostato a 22 C per 2 minuti, inserire nel tubo una nuova strip e aspettare 4 minuti; procedere con la lettura mediante QuickScan. 3. Nella finestra dei risultati nella colonna Select Dilution selezionare dal menu a tendina il fattore 1:1; il software calcolerà automaticamente il livello di contaminazione tenendo conto della diluizione effettuata e i risultati sono validi nel range di ppm. 10-Dichiarazione di non responsabilità Generon S.p.A. non si assume responsabilità di alcun tipo, esplicite o implicite, eccetto garantire che i materiali di cui i propri prodotti si compongono sono di qualità standard. Generon S.p.A. non è tenuta a rispondere per qualunque danno, inclusi danni speciali o consequenziali o spese che derivano direttamente o indirettamente dall uso di questo prodotto. [9] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan Common Extraction - Rev. 1-23/10/2017

10 11 Guida rapida Matrice validata Aggiungere al barattolo, nell ordine Bagnare completamente il campione e agitare Chiarificare Kit e Matrix Group Protocollo Range Base (a seguire, se necessario, diluizioni) Pre-mix e trasferimento in termoblocco Inserire i tubi di reazione nell incubatore (22 C) Inserire la strip e far correre per Lettura QuickScan: selezionare la Dilution nella pagina dei Risultati Range Base 0-30 ppb Trasferimento: 100 µl DB µl estratto nel tubo di reazione 1:1 (di default) Mais 25g campione 1 bustina EB17 75 ml acqua* Agitare 10 a mano 1 con agitatore (velocità massima) oppure 2 vigorosamente a mano Centrifugare ( rpm) oppure filtrare GX12376 QuickTox kit for Aflatoxin Flex (MG1) GX12208 QuickTox kit for DON Flex (MG21) GX12210 QuickTox kit for Fumonisin Flex (MG4) Diluizione A ppb Diluizione B ppb Range Base 0,2-8 ppm Diluizione A 2-30 ppm Range Base 1,5-7 ppm Alta sensibilità 0,2-1,5 ppm Pre-mix A: 400 µl Soluzione di Diluizione** +100 µl estratto Trasferimento: 100 µl DB µl pre-mix A nel tubo di reazione Pre-mix B: 200 µl Soluzione di Diluizione** +100 µl di Pre-mix A Trasferimento: 100 µl DB µl pre-mix B nel tubo di reazione Trasferimento: 100 µl DB µl estratto nel tubo di reazione Pre-mix: 700 µl di acqua +100 µl estratto Trasferimento: 100 µl DB µl pre-mix nel tubo di reazione Pre-mix: 3 ml DB µl estratto nel tubo di reazione blu Trasferimento: 200 µl di Pre-mix in un tubo di reazione trasparente Pre-mix: 375 µl di DB5 +50 µl estratto in un tubo di reazione blu Trasferimento: 200 µl di Pre-mix in un tubo di reazione trasparente Acclimatare il tubo per 2 4 min 1:A 1:B 1:1 (di default) 1:A 1:A 1:1 (di default) Note: * Utilizzare acqua distillata, deionizzata o in bottiglia (non gasata) ** Soluzione di Diluzione= Miscelare 1x bustina di EB17 con 150 ml di acqua [10] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan Common Extraction - Rev. 0-12/10/2017

19 GX12210 QuickTox kit for Fumonisin Flex: Per campioni con livelli di contaminazione minori di 1.5 ppm (< 1.5 ppm nel Range Base) di fumonisina è possibile eseguire il protocollo ad alta sensibilità (Range di ppm). 1. In un nuovo microtubo mescolare 375 µl di DB µl di estratto. 2. Ripetere il test: trasferire 200 µl della soluzione diluita in un tubo trasparente; inserire il tubo nell incubatore impostato a 22 C per 2 minuti, inserire nel tubo una nuova strip e aspettare 4 minuti; procedere con la lettura mediante QuickScan. 3. Nella finestra dei risultati nella colonna Select Dilution selezionare dal menu a tendina il fattore 1:1; il software calcolerà automaticamente il livello di contaminazione tenendo conto della diluizione effettuata e i risultati sono validi nel range di ppm. 10-Dichiarazione di non responsabilità Generon S.p.A. non si assume responsabilità di alcun tipo, esplicite o implicite, eccetto garantire che i materiali di cui i propri prodotti si compongono sono di qualità standard. Generon S.p.A. non è tenuta a rispondere per qualunque danno, inclusi danni speciali o consequenziali o spese che derivano direttamente o indirettamente dall uso di questo prodotto. [9] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan Common Extraction - Rev. 1-23/10/2017

20 11 Guida rapida Matrice validata Aggiungere al barattolo, nell ordine Bagnare completamente il campione e agitare Chiarificare Kit e Matrix Group Protocollo Range Base (a seguire, se necessario, diluizioni) Pre-mix e trasferimento in termoblocco Inserire i tubi di reazione nell incubatore (22 C) Inserire la strip e far correre per Lettura QuickScan: selezionare la Dilution nella pagina dei Risultati Range Base 0-30 ppb Trasferimento: 100 µl DB µl estratto nel tubo di reazione 1:1 (di default) Mais 25g campione 1 bustina EB17 75 ml acqua* Agitare 10 a mano 1 con agitatore (velocità massima) oppure 2 vigorosamente a mano Centrifugare ( rpm) oppure filtrare GX12376 QuickTox kit for Aflatoxin Flex (MG1) GX12208 QuickTox kit for DON Flex (MG21) GX12210 QuickTox kit for Fumonisin Flex (MG4) Diluizione A ppb Diluizione B ppb Range Base 0,2-8 ppm Diluizione A 2-30 ppm Range Base 1,5-7 ppm Alta sensibilità 0,2-1,5 ppm Pre-mix A: 400 µl Soluzione di Diluizione** +100 µl estratto Trasferimento: 100 µl DB µl pre-mix A nel tubo di reazione Pre-mix B: 200 µl Soluzione di Diluizione** +100 µl di Pre-mix A Trasferimento: 100 µl DB µl pre-mix B nel tubo di reazione Trasferimento: 100 µl DB µl estratto nel tubo di reazione Pre-mix: 700 µl di acqua +100 µl estratto Trasferimento: 100 µl DB µl pre-mix nel tubo di reazione Pre-mix: 3 ml DB µl estratto nel tubo di reazione blu Trasferimento: 200 µl di Pre-mix in un tubo di reazione trasparente Pre-mix: 375 µl di DB5 +50 µl estratto in un tubo di reazione blu Trasferimento: 200 µl di Pre-mix in un tubo di reazione trasparente Acclimatare il tubo per 2 4 min 1:A 1:B 1:1 (di default) 1:A 1:A 1:1 (di default) Note: * Utilizzare acqua distillata, deionizzata o in bottiglia (non gasata) ** Soluzione di Diluzione= Miscelare 1x bustina di EB17 con 150 ml di acqua [10] Manuale d uso - QuickTox TM Kit for QuickScan Common Extraction - Rev. 0-12/10/2017

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