sull impiego della membrana amniotica M. Corneli

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1 sull impiego della membrana amniotica M. Corneli degli Occhi della Regione Marche Imola, 1 Aprile 2017

2 Nascere con la camicia

3 Introduzione Nel 1800 un bambino "nato con la camicia" (1/80.000), avvolto nel Li Shi-Zen sacco amniotico, era ritenuto essere fortunato, speciale o protetto. Nel corso del tempo le membrane fetali hanno perso il loro potere Davis leggendario e sono state considerate solamente un rifiuto biologico. De Rotth Dal 1900, tuttavia

4 Introduzione I recenti progressi nelle tecniche di conservazione dei tessuti, accompagnati Azione agli evidenti effetti terapeutici, Azione hanno favorito l impiego riepitelizzante della membrana amniotica. antinfiammatoria I dati dimostrano come questo tessuto sia in grado di promuovere la guarigione rapida e completa Azione delle lesioni, oltre che di prevenire le aderenze post-operatorie. Antiangiogenetica Proangiogenetica Azione antifibrotica Azione antimicrobica

5 Trial clinici U.S. National Institutesof Health

6 Trial clinici U.S. National Institutes of Health Queste cellule riducono in maniera significativa la proliferazione delle linee cellulari tumorali ematopoietiche e non-ematopoietiche. La riduzione della proliferazione avviene per contatto diretto attraverso fattori solubili, che arrestano il ciclo cellulare in G0/G1.

7 Conservazione ed impiego Tessuto"fresco": mantenuto in soluzione CPTES (corneal-potassium-tes) + condroitina solfato; conservato a 4 C; utilizzato come tale. Tessutocongelato: mantenuto in soluzione contenente glicerolo (agente crioprotettivo); conservato a -80 C; utilizzato dopo scongelamento. Tessutocriocongelato: mantenuto in soluzione contenente DMSO (agente crioprotettivo); conservato a -160 C; utilizzato dopo scongelamento.

8 Conservazione ed impiego Tessutodisidratato: disidratato sotto un flusso d aria sterile o con gel di silice a temperatura ambiente; conservato a temperatura ambiente; utilizzato come tale o reidratato. Tessutoliofilizzatoedirradiato: Liofilizzatoa-60 Csottovuotoedirradiatoconraggi γa25kgray; conservatoatemperaturaambiente; utilizzatocometaleoreidratato.

9 Patch vs Graft Patch(bendaggio): l epitelio è rivolto verso il fondo della lesione; lo stroma da un lato intrappola le cellule flogistiche dell ospite, grazie al fenomeno dell assorbimento, e dall altro rilascia i fattori specifici responsabili delle sue peculiari proprietà. Graft(ricostruzione): lo stroma è rivolto verso il fondo della lesione; l epitelio, grazie al fenomeno dell integrazione, viene ricoperto dalle cellule corneali e/o congiuntivali dell ospite.

10 Preparati Tessutoomogeneizzato: sonicato a temperatura controllata e centrifugato; conservato a -80 C; utilizzato dopo scongelamento tramite iniezione o per uso topico. Tessutopolverizzato( 100μm): congelato, liofilizzato, polverizzato e γ-irradiato ; conservato a temperatura ambiente; utilizzato dopo risospensione per uso topico. Tessutomicronizzato( 1-10μm): congelato, liofilizzato, micronizzato e γ-irradiato; conservato a temperatura ambiente; utilizzato come tale o dopo risospensione tramite iniezione o per uso topico.

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12 Do you remember?

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14 Situazione

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16 Specialità chirurgiche (2016) Chirurgia ferite difficili 4,8% Chirurgia plastica 1,7% Dermatologia + Odontostomatologia 0,0% Neurochirurgia 1,0% Oftalmologia 92,4% Ortopedia 0,1%

17 Unità distribuite

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19 Situazione

20 Metodo di decontaminazione Gram + Gram Clindamicina Cefotaxime Gentamicina S. Cefotaxime Penicillina G Penicillina G Penicillina G Tobramicina Gentamicina S. Meropenem Gentamicina S. Streptomicina S. Streptomicina S. Vancomicina Vancomicina Vancomicina Vancomicina LA MEMBRANA AMNIOTICA HA LA CAPACITÀ DI ASSORBIRE I Neomicina S. Amikacina S. Clindamicina Cefotaxime Gentamicina S. Cefotaxime Streptomicina S. PRINCIPI Streptomicina ATTIVI S. Neomicina IMPIEGATI S. Tobramicina NELLE SOLUZIONI Gentamicina DECONTAMINANTI S. Meropenem Gentamicina S. E DI RILASCIARLI GRADUALMENTE NEL SITO DI APPLICAZIONE. Miceti Amfotericina B Amfotericina B Amfotericina B Amfotericina B Amfotericina B - Amfotericina B REAZIONE ALLERGICA NEI PAZIENTI SENSIBILI. T C Tempo VALIDARE UN METODO DI LAVAGGIO. Temperatura ambiente Overnight Temperatura ambiente Overnight Temperatura ambiente 2 ore e 30 minuti Temperatura ambiente 24 ore +4 C Overnight INDICARE SULLA SCHEDA LA PRESENZA (EFFETTIVA O POSSIBILE) DI ANTIBIOTICI ED ANTIFUNGINI. +4 C 24 ore N.N.

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22 Metodo di conservazione (tessuto tal quale) Agente protettivo Glicerolo DMSO Glicerolo DMSO DMSO DMSO - Glicerolo LA MEMBRANA AMNIOTICA HA LA CAPACITÀ DI ASSORBIREDMSO IL 80 C DMSO E DI RILASCIARLO GRADUALMENTE NEL SITO DI Temperatura 80 C 80 C 160 C 160 C 80 C 80 C 80 C APPLICAZIONE. EFFETTI TOSSICI EVOCATI NEI PAZIENTI. Scadenza 1 anno 2 anni 5 anni 5 anni 1 anno 2 anni 2 anni VALIDARE UN METODO DI LAVAGGIO. 130 C 1 anno 5anni DMSO 160 C 5 anni INDICARE SULLA SCHEDA LA POSSIBILE PRESENZA DI DMSO

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24 Test di vitalità Metodo MTT Calcolo Quartili Vitalità residua %

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26 Test microbiologici (tessuto tal quale) 1 DEC 2 DEC 3 NO-DEC 4 NO-DEC 5 DEC 6 NO-DEC 7 DEC 8 DEC 9 DEC Soluzione post-dec. Tampone placenta pre-dec. Liquido placenta Liquidi lavaggio 4 Liquido placenta pre-dec. Liquido placenta Tampone placenta pre-dec. Biopsia placenta pre-dec. Liquido lavaggio pre-dec. Tessuto post-dec. Soluzione post-dec. Liquido lavaggio Tessuto pre-taglio Liquido Lavaggio pre-dec. Liquidi lavaggio 5 Soluzione post-dec. Liquido lavaggio pre-dec. Tessuto post-dec. Pre Post Soluzione cong. Soluzione cong. Terreno trasp. Tampone placenta post-dec. Soluzione cong. - Biopsia placenta Tessuto Terreno trasp. Liquido taglio 2 Soluzione cong. Patch PVDF Soluzione cong. Tessuto post-dec. Soluzione cong. Terreno trasp. Soluzione cong. Tampone placenta post-dec. Tessuto a campione post-dec. - Liquido lavaggio post-dec. Test eseguiti tramite brodo BHI, HB&L e Bactec/BacT-ALERT Tessuto Soluzione Tessuto Soluzione Tessuto Tessuto post-dec. cong. post-taglio cong. post-dec. post-dec. su batteri aerobi/anaerobi e miceti Liquido lavaggio 2 Liquido stand-by post-dec. - Totale 5 test 5 test 6 test 11 test 6 test 7 test 4 test + testa campione 6 test 3 test

27 a proposito di microbiologia il meconio

28 Conclusioni

29 Grazie