Corso di Tecniche diagnostiche in ematologia
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- Ambrogio Rosi
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1 Corso di Tenihe diagnostihe in ematologia Struttura tt e funzione del sistema emopoietio Inquadramento fisiopatologio Tenihe di studio, linihe e sperimentali Trapianto di ellule staminali Prinipali patologie ematologihe Inquadramento fisiopatologio Approio diagnostio laboratoristio Approi terapeutii innovatii Inquadramento anemie Neoplasie Mieloproliferative ronihe Leuemia mieloide ronia Leuemie mieloidi aute Malattie linfoproliferative ronihe Patologie delle piastrine Patologie ongenite dei fattori della oagulazione Prof AM Vannuhi-AA
2 Argomenti da fare sui testi Anemie emolitihe Alterazioni della emoglobina e della membrana eritroitaria i Sindromi mielodisplastihe Leuemie linfoblastihe aute seondo lo shema: Inquadramento fisiopatologioi i Approio diagnostio laboratoristio Prof AM Vannuhi-AA
3 Libri di testo Non esiste alun testo speifio onsigliato, i seguenti permettono di estrapolare agevolmente le neessarie informazioni di fisiopatologia e diagnostia: Castoldi G, Core Curriulum Ematologia, MGrawHill, 2009 Castoldi - Liso, Malattie del sangue, MGrawHill, 2008 Corradini P, Manuale di Ematologia, Minerva, 2009 Tura S, Lezioni di Ematologia, Esulapio Ed, 2008 Prof AM Vannuhi-AA
4 Il materiale didattio verrà inserito nel sito Sezione DIDATTICA Prof AM Vannuhi-AA
5 EMOPOIESI L insieme dei proessi he regolano il mantenimento del numero fisiologio di ellule irolanti del sangue in ondizioni di omeostasi e intervengono ome ompenso in situazioni in ui la perdita/distruzione, o le rihieste da parte dell organismo, sono aumentate -- 2x10 11 eritroiti/giorno granuloiti neutrofili/giorno Prof AM Vannuhi-AA
6 CELLULE STAMINALI PROGENITORI PRECURSORI ELEMENTI MATURI NUMERO DI CELLULE ATTIVITA MITOTICA PLASTICITA FUNZIONALE SPECIALIZZAZIONE FUNZIONALE Prof AM Vannuhi-AA
7 NK Pro-T Pre-T CLP Pro-B DC Pre-B B/Mφ LT-HSC ST-HSC MPP CFU-M CFU-G GMP CMP DC BFU-E CFU-E MEP Prof AM Vannuhi-AA CFU-Meg 7
8 differenziazione differenziazione/ automantenimento HSC apoptosi quiesenza espansione Prof AM Vannuhi-AA
9 EMOPOIESI Sede: midollo osseo (adulto) Componenti: Cellule emopoietihe Cellule l dello stroma Citohine Fattori nutrizionali Prof AM Vannuhi-AA
10 The osteoblasti nihe Zhag J, 2003 Prof AM Vannuhi-AA
11 The vasular nihe Aveilla ST, 2004 Prof AM Vannuhi-AA
12 Stem ell irulation Stem ell nihe Cirulation Extrinsi Intrinsi Prof AM Vannuhi-AA
13 Extrinsi regulation Proliferation Chemokine Cyloph G-CSF irulation Osteoblasti nihe Prof AM Vannuhi-AA CXCL12 13
14 Cellule CD % 0.5-1% nel midollo 0.05% nel sangue periferio % nel sangue ordonale 0.5-3% nel sangue periferio mobilizzato >> in ondizioni patologihe (PMF) LTR dopo terapia mieloablativa Prof AM Vannuhi-AA
15 Tenihe per lo studio funzionale delle ellule midollari Progenitori multipotenti Conta CD34+ irolanti Per monitoraggio staminoaferesi Diagnostia Mielofibrosi Primaria Per studi sperimentali Progenitori ommissionati Test lonogenii in terreno semisolido Preursori Prof AM Vannuhi-AA
16 CD34 CD 34 - PE CD 45-FITC 34 - PE CD 3 Prof AM Vannuhi-AA CD 45-FITC 16
17 SISTEMI DI ASSAY DELLE CELLULE STAMINALI E DEI PROGENITORI: CELLULE STAMINALI: in vivo: animali subletalmente irradiati, NOD/SCID, pazienti sottoposti a trapianto allogenio in vitro:?? Colture long-term PROGENITORI COMMISSIONATI: in vitro: CFU Prof AM Vannuhi-AA
18 IN VIVO IN VITRO CFU-GM CFU-G CFU-M BFU-E CFU-E CFU-GEMM CFU-Mk gg 14 gg 7gg Prof AM Vannuhi-AA
19 Sangue periferio Aspirato midollare TEST CLONOGENICI Preparazione ellule mononuleate (MNC) mediante gradiente di densità (δ=1.077) Purifiazione di ellule CD34 + o altri subset ellulari l Conta MNC (0.5-5 x10 5 BM x10 6 PB 1-10 x10 3 CD34 + /subset) Al tempo adeguato, enumerazione delle olonie (CFU-) Piastratura on itohine adeguate Prof AM Vannuhi-AA
20 BFU-E al 14 giorno di oltura Prof AM in metilellulosa Vannuhi-AA
21 CFU-E al 7 giorno di oltura Prof in AM metilellulosa Vannuhi-AA
22 Prof AM Vannuhi-AA CFU-GM al 14 giorno di oltura in metilellulosa 22
23 CFU-MK al 14 giorno di oltura Prof AM in Vannuhi-AA metilellulosa
24 REGOLAZIONE DELL EMOPOIESI EMOPOIESI : Controllo estrinseo Controllo intrinseo Prof AM Vannuhi-AA
25 Citohine nella emopoiesi (visione parziale!) IL-6 IL-11 SCF... IL-7 IL-2 IL-7, -4 GM-CSF G-CSF IL-3 SCF TPO EPO Prof AM Vannuhi-AA
26 Ig superfamily Cytokine reeptor superfamily (Class I) IFN reeptor family (Class II) TNF reeptor family Rhodopsin superfamily w s x s w w s x s w w s w s x s w w s x s w M-CSF-R PDGF-R SCF-R IL-1-R TGF-R IL-6-R LIF-R IL-2-Rβ Epo-R IL-4-R IL-7-R IL-3-R G-CSF-R IL-5-R GM-CSF-R IL-9-R IL-13-R IL-15-R IFNα R IL-10-R INFγ R TNF-R IL-8-R Prof AM Vannuhi-AA
27 Prof AM Vannuhi-AA
28 VALUTAZIONE DEL SISTEMA EMOPOIETICO La valutazione morfologia del sistema emopoietio rihiede i seguenti ampioni: BIOPSIA OSTEOMIDOLLARE CITOASPIRATO MIDOLLARE SANGUE PERIFERICO Prof AM Vannuhi-AA
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31 BIOPSIA OSTEOMIDOLLARE ASPIRATO MIDOLLARE Cellularità emopoietia Espressione delle diverse filiere emopoietihe Organismi intraellulari-granulomi Tesaurismosi Infiltrati linfoitari Infiltrati ellule non-emopoietihe Stroma ed osso Citomorfologia Reazioni itohimihe Reazione Perls Organismi intraellulari Tesauroiti Infiltrati linfoitari Infiltrati ellule non-emopoietihe Prof AM Vannuhi-AA
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35 TRAPIANTO DI CELLULE STAMINALI EMOPOIETICHE Autologo Singenio Allogenio Da donatore familiare Da donatore non familiare volontario (MUD) Aploidentio Mieloablativo Non-mieloablativo;; regimi ad intensità ridotta; mini-allo Prof AM Vannuhi-AA
36 SORGENTI DI CELLULE STAMINALI EMOPOIETICHE Cellule l midollari i Cellule da sangue periferio [AUTO] Relutamento on ilofosfamide + G-CSF Sullo sbloo di un ilo hemioterapio onvenzionale/alte dosi sequenziali +G-CSF Cellule da sangue periferio [ALLO] Relutamento on solo fattore di resita (G-CSF) Cellule da sangue di ordone ombeliale [ellule l espanse ex-vivo] Prof AM Vannuhi-AA
37 CLASSE II CLASSE III CLASSE I COMPL TNF-α DP DQ DR HeatSP B C E A Prof AM Vannuhi-AA
38 * *= romosoma Prof AM Vannuhi-AA
39 CARATTERISTICHE MHC I MHC II Composizione omplesso MHCpeptide Tipo di APC Catena α polimorfia, Catene polimorfihe α β2-mg, peptide e β, peptide Tutte le ellule nuleate APC professionali Cellule T responsive CD8+ (CTL) CD4+ (helper) Origine dei peptidi Proteine del ytosol Proteine dagli endosomi/ lisosomi (di orgine extraellulare) Sede di generazione proteasomi Endosomi / lisosomi del peptide Meanismi di TAP Non neessari trasporto del peptide Prof AM Vannuhi-AA
40 -196 C Prof AM Vannuhi-AA
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43 Le fasi del trapianto autologo Regime di Infusione di Reupero della Reupero della ondizionamento. staminali funzione funzione emopoietia immunologia Aplasia -10/ >+365 Prof AM Vannuhi-AA
44 Le fasi del trapianto allogenio Regime di ondizionamento Infusione di. staminali Reupero della funzione emopoietia Reupero della funzione immunologia Aplasia -10/ >+365 graft-failure GVHD auta GVHD ronia < +100 > +100 Prof AM Vannuhi-AA
45 GVHD ACUTA Entro 100 gg dal TMO (..ma non sempre ) CRONICA Oltre il terzo mese Prof AM Vannuhi-AA
46 GVHD auta GRADO CUTE FEGATO INTESTINO + Rash maulopapulare, l Bilirubina, 2-3 Diarrea 500- <25% mg/dl 1000 ml/die oppure Nausea persistente ++ Rash maulopapulare, Bilirubina, 3-6 Diarrea, % mg/dl 1500 ml/die +++ Eritroderma generalizzato Bilirubina, 6-15 Diarrea, >1500 mg/dl ml/die ++++ Desquamazione e bolle Bilirubina, >15 mg/dl Dolore addominale e/o ileo paralitio Prof AM Vannuhi-AA
47 da J Ferrara et al. Prof AM Vannuhi-AA
48 GVHD GVL GRAFT HOST HVG --> rejetion Prof AM Vannuhi-AA
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50 Tenihe per lo studio del himerismo Cariotipo VNTR STR SNP Prof AM Vannuhi-AA
51 Indiazioni al trapianto di ellule staminali emopoietihe Emopatie neoplastihe Auto Allo/MUD onvenz mini-allo CB Aploiden Emopatie non -* neoplastihe Difetti ongeniti metabolismo -* /+ Neoplasie solide + -/ M. autoimmuni + -/+ -/+ - - * futuribile: terapia genia Prof AM Vannuhi-AA
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