L esame emocromocitometrico giuseppe galli MMG in Licciana Nardi-Lunigiana-MS
L esame emocromocitometrico (emocromo) è uno degli esami più richiesti in senso assoluto E l equivalente di una biopsia d organo, la biopsia del sangue periferico Le alterazioni riflettono le alterazioni che si verificano a livello della sede di produzione delle cellule del sangue (il midollo e gli organi linfatici periferici) e di numerose malattie non ematologiche E sicuramente uno degli esami più utili ma peggio interpretati
Definizione Studio quantitativo di: Eritrociti Leucociti Piastrine Emoglobina Ematocrito Costanti eritrocitarie Studio qualitativo Morfologia degli elementi figurati del sangue Formula leucocitaria
Metodi di conteggio Manuali (aboliti, discreta possibilità di errore, laboriosi) Contaglobuli automatici (Coulters) Ottici a diffrazione Elettronici Da un coulter all altro i margini di errore sono: ± 6% per eritrociti e leucociti ± 15% per le piastrine
Misurazione degli altri indici Emoglobina (g/dl) Misurazione della cianmetaemoglobina con spettrofotometro dopo emolisi e processazione con reattivo a base di acido cianidrico Ematocrito (%) Centrifugazione ad alta velocita di sangue intero contenuto in un capillare
Le costanti eritrocitarie Volume globulare medio (MCV) (fl) Misurazione automatica dell integrale dei singoli volumi degli eritrociti MCV=Ematocrito/Eritrociti Contenuto emoglobinico corpuscolare medio (MCH) (pg) MCH= Emoglobina/Eritrociti Concentrazione emoglobinica corpuscolare media (MCHC) (%) o (gr/dlgr) MCHC=Emoglobina/Ematocrito NB: la concentrazione emoglobinica del globulo rosso non può mai essere superiore al 36%
I valori normali Eritrociti/mmc Leucociti/mmc Ematocrito % Emoglobina g/dl MCV fl UOMO 5,5 ± 1 47 ± 0,07 15,5 ± 2,5 DONNA 4,8 ± 1 7,5 ± 3,5 42 ± 0,05 14 ± 2,5 86 ± 10 MCH pg MCHC % RW Piastrine/mmc MPV fl 29,5 ± 2,5 34 ± 2 13,3 ± 2,4 325 ± 175 8,2 ± 1,9
La morfologia eritrocitaria Macrociti: emazie di volume maggiore di 96 fl Megalociti: emazie di volume maggiore di 120 fl Microciti: emazie di volume minore di 80 fl Schistociti: emacie frammentate a semidisco Sferociti: emazie con VGM normale o ridotto e MCH elevato Stomatociti: emazie con area chiara ellittica centrale Ellissociti: emazie a forma allungata Echinociti:emazie con fini protuberanze regolarmente distribuite Acantociti: emazie con protuberanze grossolane e mal distribuite Dacriociti: emazie a forma di goccia Leptociti: emazie sottili, di aspetto fogliaceo Cellule a bersaglio: leptociti con anomala distribuzione emoglobinica Drepanociti: emazie falciformi Anulociti: emazie con ampia area chiara centrale
La formula leucocitaria Conteggio automatizzato Conteggio al microscopio ottico su striscio colorato con Wright o May Grunwald giemsa NB: nei casi di leucopenia entrambi i conteggi possono essere fallaci e conviene contare e valutare morfologicamente le cellule dopo arricchimento Neutrofili Linfociti Monociti Eosinofili Basofili >50% 25-50% <10% <5% <1% 2000-7500 1500-4000 2000-8000 40-400 20-400
I nuovi coulters, questi sconosciuti I nuovi contatori automatici permettono di avere dati utili non solo di tipo quantitativo ma anche qualitativo. La scarsa conoscenza di questi dati ed in generale la scarsa attitudine di molti medici alla interpretazione dell esame emocromocitometrico ha permesso ai responsabili di molti laboratori di evitare l invio ai medici degli elaborati grafici (risparmio cartaceo) fornendo solo i dati emocromocitometrici quantitativi
Il pricipio dei coulter JR e JS + - elettrodi di platino capillare Il passaggio di una cellula nel capillare causa una variazione di impedenza proporzionale al volume della cellula. Questo permette di contare le singole cellule (numero di variazioni di impedenza per ogni ml di sangue spostato dentro il capillare) e di valutarne il volume (intensità di variazione dell impedenza)
Con i Coulters non solo numeri Con i coulters è percio possibile non solo avere dati numerici ma anche le curve di distribuzione delle cellule del sangue, un tempo ottenibili solo attraverso laboriosi conteggi al microscopio ottico
La curva di distribuzione eritrocitaria 50 100 200 femtolitri
La curva di distribuzione leucocitaria linfociti monociti eosinofili basofili neutrofili 50 100 200 Femtolitri
Gli allarmi
Gli errori di conteggio Limiti dei sistemi di conteggio: Eritrociti > 9x10 6 /mmc Leucociti > 99x10 3 /mmc Piastrine > 999x10 3 /mmc Emoglobina >30g/dl MCV >200 fl Il superamento di questi limiti provoca sovrastime o sottostime anche dei conteggi delle altre serie cellulari
La pseudopiastrinopenia Può essere sospettata in presenza di piastrinopenia associata ad aumento del MPV in pazienti clinicamente asintomatici Evitare il prelievo in provetta con EDTA Prelievo in provetta eparinata o citratata
La reticolocitosi: c è o non c è? Si parla di reticolocitosi quando il numero di reticolociti è superiore 120.000/mmc. Considerare il valore percentuale può indurre in errore, ma anche il livello assoluto di reticolociti deve comunque essere correlato al livello dell anemia
Alcune stranezze I pazienti con anemia emolitica possono presentare una riduzione cospicua del numero dei globuli rossi con emoglobina poco ridotta. In pazienti con agglutinine può essere presente una pseudoanemia megaloblastica da agglutinazione eritrocitaria I pazienti con microsferocitosi diversamente dai pazienti con microcitosi presentano emazie con un contenuto emoglobinico elevato
I nuovi coulter con : l emocromo in tre dimensioni I nuovi coulter (Coulter VCS) sono apparecchi che associano all analisi eritrocitaria e piastrinica propria dei coulters tradizionali una analisi strutturale della serie leucocitaria che permette di fornire una vera e propria formula leucocitaria elettronica arricchita informazioni supplementari sui singoli elementi cellulari.
Misurazione del volume cellulare ( V ) Variazione di impedenza come con il Coulter classico Analisi strutturale interna ( C ) Analisi della conduttività cellulare interna nucleo citoplasmatica Analisi strutturale di superficie ( S ) Reflettività della superficie cellulare colpita da un fascio di luce laser
Lo scatterplot Volume M N E L DF2 DF1
Volume M N E L DF1
1...2 3 4 5 6
Una anemia si diagnostica in base ai livelli di Hb Una anemia non si vede alla formula Eosinofilia= Eosinofili> 400/mmc Leucopenia: GB <4000 /mmc Linfocitosi= Linfociti> 4000 VGM>120=Megalocitosi 1...2 3 4 5 6 Reticolocitosi= reticolociti>120.000/mmc