Diagnosi di infezione da West Nile virus (WNV)

Transcript

1 Il ruolo del laboratorio nella diagnosi delle zoonosi e delle malattie trasmesse da vettori Roma, 1-2 Ottobre 2014 Diagnosi di infezione da West Nile virus (WNV) Giada Rossini Centro Riferimento Regionale Emergenze Microbiologiche (CRREM) U.O. Microbiologia Ospedale S.Orsola-Malpighi, Bologna Family: Flaviviridae Genus: Flavivirus Genome: + ssrna West Nile virus (WNV)

2 altre vie di trasmissione Trasfusioni di sangue Le prime identificate in USA nel 2002 Trapianti d organo solido Trasmissione intrauterina Allattamento (?) WNV Human Infection Iceberg WNND Meningite WNF Febbre > 38.5 C Meningoencefalite Encefalite Poliradicoloneurite Mal di testa Artralgia, mialgia Rash Astenia Fattori rischio Età> anni Patologie croniche Immunodepressione Ipertensione

3 WNV nell area Mediterranea 2013 WNV in Italia: Piano di Sorveglianza Integrato Dal 2010 esiste un piano nazionale per la sorveglianza dei casi umani autoctoni di infezione da WNV che integra sorveglianza veterinaria e entomologica Identificazione casi autoctoni di WNND dal 15 Giugno al 30 Novembre : Febbre (> = 38.5 C) E Manifestazioni neurologiche: encefalite, meningite a liquor limpido, poliradicolo-neurite (simil Guillain Barrésyndrome ), paralisi flaccida acuta

4 Regione Emilia Romagna Epidemiologia WNV in Italia Primi casi umani di infezione da WNV nel 2008 Dal 2008 al 2013: 115 casi autoctoni di malattia neuroinvasiva da WNV (WNND) Nel 2012 e 2013 il maggior numero dei casi notificati Casi autoctoni WNND Veneto Lombardia Friuli-VG Sardegna Basilicata Puglia Total WNV lineages In Italia diversi ceppi di WNV Lineage 1 ( ) Lineage 2 ( ) Lineage 2 Lineage 1 NS5

5 Diagnosi dell infezione da WNV Sintomi IgM Viremia IgG Infezione giorni dopo infezione Combinazione test molecolari e sierologici WNV -Diagnosi Molecolare Fase acuta dell infezione Viremia Sintomi IgM IgG Test biomolecolari (RT-PCR / RT-PCR real-time) Campioni biologici Plasma/siero LCR Urine Sensibilità e Specificità Viremia: breve durata e bassa entità Urine: livelli di WNV RNA piùalti nelle urine rispetto a plasma e/o LCR (1) Update primers/probes circolazione differenti strains (1) Barzon L. et al. Excretion of West Nile virus in urine during Acute Infection. JID 2103:2008

6 Update primers/probes circolazione differenti strains Lineage 2 Lineage 1 EQA PCR WNV nel 2011 (ENIVD) ha messo in evidenza la scarsa capacità di rilevare ceppi Lineage 2 Continua attenzione all epidemiologia molecolare di WNV Partecipazione periodica in EQA WNV -Diagnosi Sierologica RNA Sintomi IgM IgG Ricerca IgM e IgG nel siero e liquor Approccio diagnostico maggiormente utilizzato Diversi test disponibili (ELISA / IFA) Interpretazione complicata: Presenza di Ab cross-reattivi per altri flavivirus (infezioni pregresse, vaccinazioni) test conferma specificità

7 WNV -Diagnosi Sierologica IgM èmarker di infezione acuta da WNV Sintomi IgM RNA IgG Ricerca IgM sel siero e nel liquor (ELISA / IFA) Presenza di IgM nel liquor ha alto valore diagnostico In alcuni pazienti le IgM nel siero possono persistere > 1 anno Occasionalmente positivitàalle IgM può riflettere un infezione pregressa non correlata alle manifestazioni cliniche WNV -Diagnosi Sierologica IgG nella diagnosi di infezione da WNV Sintomi IgM RNA IgG Ricerca IgG nel siero e nel liquor (ELISA /IFA) IgG generalmente compaiono pochi giorni dopo le IgM Persistono per anni Ampia cross-reattività con altri flavivirus necessità di test di conferma

8 WNV -Diagnosi Sierologica IgM e IgG IFA ELISA Positivo Conferma Microneutralization assay (MNTA) Plaque Reduction Neutralization Test (PRNT) Saggi piuttosto laboriosi lab BSL 3 richiedono 3 5 giorni Problematiche nella diagnosi di infezione da WNV Indagini sierologiche Persistenza delle IgM dopo la fase acuta dell infezione Cross-reattività Ab WNV con altri flavivirus BSL3 è richiesto per i test di neutralizzazione Nelle fasi iniziali dell infezione Abs potrebbero non essere neutralizzanti Indagini molecolari Basse viremie e di breve durata Variabilità genetica ceppi virali circolanti Degradazione dell RNA virale

9 Scheda di segnalazione di caso di W est Nile V irus Allegato 3 per un accurata scelta e interpretazione dei test di laboratorio informazioni relative al paziente e ai campioni da analizzare Data insorgenza sintomi Data raccolta dei campioni Paese/Regione di residenza Viaggi Vaccinazioni Diagnosi clinica (meningite, encefalite, etc) Stato immunologico del paziente (immunosoppressione) 1. Regione 2. Azienda Sanitaria/Ospedale 3. Servizio / Reparto 4. Dati relativi al paziente: Cognome: Nome: Sesso: M F Codice Fiscale Luogo di nascita: Data di nascita (gg/mm/aaaa) Domicilio abituale: Via/piazza e numero civico Comune Provincia 5. Permanenza all'estero nelle tre settimane precedenti l'inizio della sintomatologia: a. b. Nazione data inizio data fine 6. Anamnesi positiva per trasfusione di sangue o emocomponenti nei 28 giorni precedenti la diagnosi/segnalazione? S N Non noto 6bis. Anamnesi positiva per donazione di sangue o emocomponenti nei 28 giorni precedenti la diagnosi/segnalazione? S N Non noto 7. V accinazione nei confr onti di altri flavir us: Tick borne encephalitis S N Non noto; Febbre Gialla S N Non noto; Encefalite Giapponese S N Non noto 8. I nfor mazioni cliniche: Febbre > 38.5 C S N Non noto; Se sì, data inizio febbre (gg/mm/aaaa) Manifestazione clinica: Encefalite Meningite Poliradiculoneurite (Sindrome di Guillain Barrè atipica) Paralisi flaccida acuta Altro (specificare) 9. Campione inviato al L aboratorio di riferimento 10. Campione inviato al L aborator io di rifer imento Regionale: S N Non noto Nazionale: S N Non noto 11.Esami di Labor atorio effettuati: Liquor data prelievo: (gg/mm/aaaa) Metodica [è possibile indicare più di una risposta]: IgM; pos neg IgG; pos neg Isolamento virale; pos neg PCR pos neg Sangue, data prelievo: (gg/mm/aaaa); Metodica [è possibile indicare più di una risposta]: IgM pos neg Isolamento virale pos neg IgG pos neg Test di neutralizzazione pos neg PCR pos neg Siero, data prelievo: (gg/mm/aaaa) Metodica [è possibile indicare più di una risposta]: IgM pos neg Isolamento virale pos neg IgG pos neg Test di neutralizzazione pos neg PCR pos neg Urine, data prelievo: (gg/mm/aaaa) Metodica [è possibile indicare più di una risposta]: PCR pos neg Note: 12. Esito del caso al momento della segnalazione: 13. Esito del caso al follow-up [30 gior ni]: Guarito Quadro clinico in via di miglioramento Guarito Quadro clinico in via di miglioramento Quadro clinico grave Deceduto Non noto Quadro clinico grave Deceduto Non noto Data segnalazione Medico compilatore telefono telefax Da inserire entro 12 ore dalla segnalazione sul sito web: Oppure inviare via fax al: Ministero della Salute, Ufficio V, Malattie Infettive e Profilassi Internazionale, Direzione Generale della Prevenzione Sanitaria (fax: 06/ , e via mail a malinf@sanita.it); ISS CNESPS Reparto Epidemiologia Malattie Infettive dell Istituto Superiore di Sanità (fax o via mail outbreak@iss.it). Dipartimento Malattie Infettive Parassitarie ed Immunomediate Istituto Superiore di Sanità (Fax ; arbo.mipi@iss.it),. WNND in Italia Curva epidemica WNND Emilia Romagna

10 Rappor to N. 4 del 25 Settembr e 2014 (Settimana: settembr e 20 14) Sorveglianza dei casi umani di malattia neuro-invasiva da West Nile virus (WNND) Misure sospensione temporanea per West Nile Virus (WNV): sospensione temporanea per 28 giorni dei donatori di sangue e di emocomponenti che abbiano soggiornato anche solo per una notte nei luoghi indicati nel periodo dal 01 luglio al 30 novembre Aggiornata in data 26 settembre 2014 Note A far data dal 1 luglio, in assenza di criteri trigger, il test WNV-NAT viene introdotto sulle donazioni di sangue raccolte in tutte le Province della Regione Sardegna. alcuni link utili WNND rapporto settimanale WNV sorveglianza veterinaria e entomologica Bollettino epidemiologico WND 25 settembre, n. 8 W est Nile News Aggiornamento epidemiologico settimanale West Nile Disease in Italia nel Misure prevenzione trasmissione trasfusionale ITALIA Situazione epidemiologica WNV in Europa