S P E C I F I C H E D E L P R O D O T T O

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1 Immucor Transplant Diagnostics, Inc. 550 West Avenue, Stamford, CT 0690 USA Tel: +1 (0) o (888) numero verde USA e Canada, Fax: +1 (0) Documentazione del prodotto e traduzioni disponibili presso: S P E C I F I C H E D E L P R O D O T T O LIFECODES classe I ID: un saggio di screening Luminex per la determinazione qualitativa degli anticorpi reattivi al quadro IgG diretti verso le molecole HLA classe I. LIFECODES classe II IDv: un saggio di screening Luminex per la determinazione qualitativa degli anticorpi reattivi al quadro IgG diretti verso le molecole HLA classe II. Per uso diagnostico in vitro. Definizione dei simboli... Impiego previsto... Riepilogo e descrizione... Principi della procedura... Reagenti... A. Identificazione... B. Avvertenze e pericoli... C. Istruzioni per la conservazione... D. Purificazione o trattamento per l utilizzo... E. Indicazioni di instabilità... Caratteristiche tecniche dello strumento... Prelievo e preparazione dei campioni... 1 INDICE Procedura... A. Materiali forniti... B. Materiali necessari ma non forniti... Indicazioni per l'uso... Risultati... Controllo di qualità... Limiti della procedura... Risoluzione dei problemi... Caratteristiche specifiche delle prestazioni... Bibliografia DEFINIZIONE DEI SIMBOLI (etichette dei prodotti e documenti aggiuntivi) Codice del lotto Diluire prima dell uso Nome del paziente DIL NAME Numero di catalogo Fotosensibile (Tenere al riparo dalla luce) Numero d identificazione Utilizzare entro Sufficiente per N test Gamma di temperatura (conservazione) Consultare le istruzioni per l'uso ID# Data DATE Tecnico TECH Microsfera BEAD Etnicità ETHN Donatore DONOR Data di prelievo BDT Fattore di regolazione di fondo BAF Mediana dell'intensità di fluorescenza MFI Anticorpi reattivi al quadro PRA Interpretazione INTRP Microsfera di controllo negativa CON Microsfera di controllo positivo (Immunoglobulina G) IgG Antigene AG Campione SAMPLE Classe I CLI Classe II CLII Riga ROW Colonna COL Numero di microsfere con antigene Gamme previste EXPECTED RANGES Produttore Mandatario nella Comunità Europea Avvertimento Pagina 1 di 6 LC807IVDIT.15 (07/16)

2 IMPIEGO PREVISTO LIFECODES classe I ID e classe II IDv sono analisi immunologiche a base di microsfere per la determinazione qualitativa degli anticorpi reattivi al quadro HLA IgG (PRA). RIEPILOGO E DESCRIZIONE Gli antigeni leucocitari umani (HLA) sono un sistema di glicoproteine con un ruolo funzionale nella presentazione dei peptidi al sistema immunitario. 1, Tuttavia, in quanto sistema altamente polimorfo, le molecole HLA possono diventare bersaglio di risposte immunitarie durante la gravidanza, durante la trasfusione di emocomponenti o in caso di rigetto di organi trapiantati. In genere l alloimmunizzazione determina la produzione di anticorpi HLA all incirca nel % degli individui esposti. La presenza o l assenza di tali anticorpi specifici degli HLA contribuisce alla determinazione della sopravvivenza degli allotrapianti. 4 Le microsfere LIFECODES classe I ID sono concepite per individuare gli anticorpi IgG nelle glicoproteine HLA classe e I. Il saggio LIFECODES classe I ID è composto da diverse microsfere Luminex coniugate con glicoproteine HLA classe e I, tratte da individui diversi e purificate per affinità. Le microsfere LIFECODES classe II ID sono concepite per individuare gli anticorpi IgG nelle glicoproteine HLA classe e II. Il saggio LIFECODES classe II IDv è composto da diverse microsfere Luminex coniugate con glicoproteine HLA classe e II, tratte da individui diversi e purificate per affinità. PRINCIPI DELLA PROCEDURA Un aliquota di microsfere viene fatta incubare con un piccolo volume di campione di siero. Quindi, le microsfere sensibilizzate vengono lavate per eliminare gli anticorpi non legati. Vengono aggiunti anticorpi anti IgG umani coniugati alla ficoeritrina. Dopo un ulteriore incubazione, il campione viene diluito e analizzato sullo strumento Luminex. L intensità del segnale proveniente da ciascuna microsfera viene confrontata con l intensità del segnale di una microsfera di controllo negativa inclusa nella preparazione di microsfere al fine di determinare se la microsfera è positiva o negativa all alloanticorpo legato. REAGENTI A. Identificazione 6800: LM1 LIFECODES classe I ID è formato da cinque (5) componenti in quantità sufficiente per 4 test. 1. Microsfere HLA I LM1B (10 µl): una miscela di microsfere, ciascuna coniugata con glicoproteine HLA Classe I di un individuo diverso più quattro (4) microsfere di controllo. La soluzione per la conservazione è una soluzione tampone idrogeno-fosfato-diidrogenofosfato contenente NaCl, Tween-0, ProClin 00 e sieroalbumina bovina.. FOTOSENSIBILE. Non esporre alla luce per più di tre ore. Conservare al buio, tra i e gli 8 C.. Coniugato concentrato LMCJ (170 µl): IgG anti-umano caprino coniugato a ficoeritrina in una soluzione tampone per la conservazione idrogeno-fosfato-diidrogenofosfato contenente NaCL, Tween-0, azotidrato di sodio e sieroalbumina bovina. DIL DEVE ESSERE DILUITO 1:10 in soluzione di lavaggio prima dell utilizzo. FOTOSENSIBILE. Non esporre alla luce diretta per periodi prolungati. Conservare al buio, tra i e gli 8 C.. Soluzione di lavaggio LMWB (0 ml): una soluzione tampone idrogeno-fosfato-diidrogenofosfato contenente NaCl, Tween-0, azotidrato di sodio e sieroalbumina bovina. Conservare a una temperatura tra i e gli 8 C e portare a temperatura ambiente (0-4 C) prima dell utilizzo. 4. Siero di controllo positivo LMPC (80 µl): questo siero o miscela di sieri è ottenuta da individui noti per essere alloimmunizzati agli antigeni di HLA (>85% PRA). Conservare a a 8 C. 5. Siero di controllo negativo LMNC (80 µl): questo siero o miscela di sieri è ottenuta da individui noti per non possedere anticorpi agli antigeni di HLA (<10% PRA). Conservare a a 8 C. 68: LMQ LIFECODES classe II IDv è formato da cinque (5) componenti in quantità sufficiente per 4 test. 1. Microsfere HLA II LMB (10 µl): Una miscela di microsfere, ciascuna coniugata con glicoproteine HLA classe II, tratte da individui diversi, più quattro (4) microsfere di controllo. La soluzione per la conservazione è una soluzione tampone idrogeno-fosfato-diidrogenofosfato contenente NaCl, Tween-0, azotidrato di sodio e sieroalbumina bovina. FOTOSENSIBILE. L esposizione routinaria alla luce deve durare non più di tre ore. Conservare al buio, tra i e gli 8 C.. Coniugato concentrato LMCJ (170 µl): IgG anti-umano caprino coniugato a ficoeritrina in una soluzione per la conservazione idrogenofosfato-diidrogenofosfato contenente NaCL, Tween-0, azotidrato di sodio e sieroalbumina bovina. DIL DEVE ESSERE DILUITO 1 a 10 in soluzione di lavaggio prima dell utilizzo. FOTOSENSIBILE. Non esporre alla luce diretta per periodi prolungati. Conservare al buio, tra i e gli 8 C.. Soluzione di lavaggio LMWB (0 ml): una soluzione tampone idrogeno-fosfato-diidrogenofosfato contenente NaCl, Tween-0, azotidrato di sodio e sieroalbumina bovina. Conservare a una temperatura tra i e gli 8 C e portare a temperatura ambiente (0-4 C) prima dell utilizzo. 4. Siero di controllo positivo LMPC (80 µl): questo siero o miscela di sieri è ottenuta da individui noti per essere alloimmunizzati agli antigeni di HLA (>85% PRA). Conservare a a 8 C. 5. Siero di controllo negativo LMNC (80 µl): questo siero o miscela di sieri è ottenuta da individui noti per non possedere anticorpi agli antigeni di HLA (<10% PRA). Conservare a a 8 C. B. Avvertenze e precauzioni 1. Per uso diagnostico in vitro. Il materiale di origine umana impiegato nella produzione di questo kit è stato testato con metodi approvati dall'fda e riscontrato negativo agli anticorpi HIV, HCV e HbsAg. Tuttavia, nessun metodo analitico può garantire completamente l assenza di agenti infettivi. Pertanto, quando si lavora con questi materiali, adottare misure universali di sicurezza.. La sostituzione con componenti diversi da quelli forniti nel sistema può indurre risultati errati. 4. I reagenti contengono, come conservante, lo 0,1% di azotidrato di sodio che può reagire con le tubazioni in piombo e in rame, formando azotidrati metallici esplosivi. Utilizzare grandi quantitativi di acqua per smaltire i materiali in lavandino. 5. La contaminazione batterica dei campioni o la presenza di immunocomplessi o di altri aggregati immunoglobulinici può provocare un aumento del legame non specifico e risultati errati. 6. Questo prodotto rivela gli anticorpi IgG che possono o meno essere tossici per i linfociti. 7. Non è previsto che questo prodotto rilevi anticorpi della classe IgA o IgM dell immunoglobulina. Pagina di 6 LC807IVDIT.15 (07/16)

3 8. I risultati presentanti svariate microsfere DQ positive che non condividono i tipi DQ beta possono indicare la presenza di anticorpo DQ alfa-specifico. Esaminare ulteriormente tali dati. 9. Se producono risultati positivi su microsfere coniugate a donatore DQ omozigotico non supportati da pari risultanze sul donatore DQ omozigotico corrispondente, gli anticorpi DQ-specifici possono indicare un anticorpo debolmente reattivo. Esaminare ulteriormente tali dati. 10. La determinazione della percentuale di PRA non è l unico fondamento della decisione clinica sulla terapia di un paziente. Di solito, prima del trapianto, viene eseguita una prova finale di compatibilità (crossmatch). 11. Questi prodotti sono concepiti per essere utilizzati con lo strumento Luminex in ottemperanza ai suggerimenti del produttore. 1. Dopo l uso, smaltire tutti i materiali in conformità alla normativa vigente. 1. Per ulteriori informazioni consultare le schede di sicurezza dei materiali. C. Istruzioni per la conservazione 1. Per indicazioni per la conservazione, leggere le etichette dei prodotti.. Le microsfere e il coniugato sono FOTOSENSIBILI. L esposizione di routine alla luce non deve protrarsi per più di tre ore. D. Purificazione o trattamento richiesto per l utilizzo 1. Vedere Prelievo e preparazione dei campioni.. Il coniugato concentrato deve essere diluito 1:10 in una soluzione di lavaggio prima dell impiego. E. Indicazioni di instabilità 1. Non utilizzare componenti o controlli torbidi o scaduti.. Dopo l uso, eliminare tutti i controlli positivi e negativi e il coniugato diluiti, ma non utilizzati. CARATTERISTICHE TECNICHE DELLO STRUMENTO Strumento Luminex e piattaforma XY (Lifecodes numero di catalogo 88800, 8880) PRELIEVO E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI Il sangue va raccolto senza anticoagulanti, utilizzando una tecnica asettica di prelievo, e deve essere analizzato mentre è ancora fresco per ridurre al minimo la possibilità di ottenere reazioni falso-positive o falso-negative imputabili a una conservazione errata o alla contaminazione dei campioni. Il siero deve essere conservato a -8 C per non più di 48 ore. Se il siero va conservato per più di 48 ore, congelarlo ad una temperatura pari o inferiore a 0 C o -80 C per un massimo di anni. Ciascun laboratorio dovrebbe stabilire e convalidare metodi di conservazione del siero per periodi superiori ai anni. Se il siero viene conservato o trasportato, è necessario separarlo dai globuli rossi. Evitare di congelare e scongelare ripetutamente i campioni di siero. Non utilizzare sieri microbiologicamente contaminati, emolizzati, lipemici o termicamente inattivati in quanto campioni di questo tipo possono produrre risultati contraddittori. Prima di essere analizzati, tutti i campioni devono essere posti in agitazione orizzontale e centrifugati brevemente (0 secondi a xg) per corpuscolare il materiale eventualmente presente. PROCEDURA A. Materiali forniti (per ulteriori informazioni, vedere la sezione REAGENTI) Microsfere HLA Coniugato concentrato Soluzione di lavaggio Siero di controllo positivo Siero di controllo negativo Foglio di registrazione Foglio formato piastra B. Materiali, reagenti e apparecchi necessari, ma non forniti (come da elenco o equivalenti) Pipette regolabili da 5 µl 50 µl con estremità idonee Pipette multicanale da 50 µl con estremità idonee e serbatoio per tampone Provette per microcentrifuga da 1,5 ml per diluizioni del coniugato Provette per campioni di pazienti e controlli Timer Pennarello Coperchi di plastica adesivi Fluido Luminex Sheath (1x o 0x Lifecodes n o di cat o 6805) Microsfere di calibrazione Luminex (CAL 1, CAL, CON 1, CON ; Lifecodes n o di cat , 68007, 68008, 68009) Acqua distillata Rotatore o agitatore vortex con adattatore per piastre Piastre di filtraggio multiplo Millipore (n o di cat. MSBVN110, Lifecodes n o di cat. 8886) Collettore di aspirazione con filtro multiplo (Millipore n o di cat. MAVM 0960R,Qiagen n o di cat , Lifecodes n o di cat ) INDICAZIONI PER L'USO MISURE DI SICUREZZA: EVITARE la contaminazione della soluzione di lavaggio e del reagente IgG anti-umano. La contaminazione involontaria di questi reagenti con il siero umano provoca la neutralizzazione dell IgG anti-umano e, di conseguenza, il fallimento dell analisi. Controllare con cura la forza di aspirazione. A causa di un elevata pressione di aspirazione può accadere che le microsfere aderiscano alla membrana, determinando un errore di conteggio. Durante il pipettamento nella piastra di filtraggio, fare attenzione che le microsfere non aderiscano alle pareti dei pozzetti della micropiastra Le microsfere devono essere pipettate nella soluzione già presente nel pozzetto, evitando con cura di toccare la membrana con il puntale. Il contatto con il puntale può lacerare la membrana, determinando il fallimento dell analisi. Pagina di 6 LC807IVDIT.15 (07/16)

4 durante le fasi di incubazione, evitare con cura che le microsfere si riversino ed aderiscano alle pareti dei pozzetti. Quando si esegue l analisi per la prima volta, eseguire alcuni controlli positivi e/o negativi al fine di determinare la velocità ottimale della piattaforma rotativa o del dell agitatore vortex. Per alcuni strumenti, si è rivelata efficace una velocità di circa 00 giri al minuto. Al termine della fase di lavaggio, la presenza di livelli significativi di anticorpi non legati, dovuta al siero in eccesso o a un lavaggio inaccurato, può ridurre la capacità del test di rilevare gli IgG legati a microsfere sensibilizzate e produrre risultati errati. A ogni analisi si devono aggiungere campioni di sieri di controllo positivi e negativi per accertare eventuali errori tecnici o inefficienze dei reagenti. 1. Lasciando gli altri componenti al buio e a una temperatura tra i e gli 8 C finché non sono richiesti, portare la soluzione di lavaggio a temperatura ambiente (da 0 a 4 C) prima dell utilizzo. Durante questo periodo, utilizzare il foglio di formato piastra per assegnare una posizione sulla piastra a ciascuno dei sieri e dei controlli da analizzare. I sieri di controllo forniti nel kit servono a rilevare un allosieropositivo largamente reattivo ed il siero negativo.. Coprire i pozzetti non assegnati della piastra di filtraggio con coperchi di plastica adesivi. Successivamente, bagnare i pozzetti da utilizzare con µl di acqua distillata. Trascorsi -5 minuti, asportare l acqua aspirando con delicatezza la piastra con un collettore di aspirazione (vedere le istruzioni per l'uso del produttore).. Approntare rapidamente le microsfere HLA, centrifugando per 0 secondi la fiala a x g, per rimuovere eventuali microsfere o liquido dal coperchio o dalle pareti della fiala. Agitare al vortex (~ 1 minuto) per sospendere di nuovo le microsfere in modo uniforme. 4. Aggiungere 40 µl di soluzione di lavaggio in ciascun pozzetto della piastra di filtraggio, quindi 1,5 µl di siero del paziente o di controllo e poi mescolare. 5. Aggiungere 5 µl di microsfere HLA in ciascun pozzetto assegnato. Agitare al vortex le fiale con le microsfere HLA ogni minuti per mantenere le microsfere in sospensione durante la distribuzione. ATTENZIONE! È importante mantenere le microsfere in sospensione al fine di garantire che un aliquota sufficiente di esse sia versata nei pozzetti e di assicurare tempi di conteggio minimi. Se le microsfere non vengono agitate con l agitatore vortex a intervalli regolari, esse andranno a depositarsi sul fondo della provetta. Di conseguenza, la concentrazione delle microsfere dispensate nei pozzetti diventerà disuniforme, con possibili ripercussioni negative sui tempi di esecuzione e sull analisi dei risultati. 6. Coprire la piastra con un coperchio adesivo in plastica e proteggerla dalla luce con un foglio o una scatola. Incubare per 0 minuti a temperatura ambiente (da 0a 4 C) e al buio su una piattaforma rotante (00 giri al minuto). Riporre le aliquote non utilizzate di siero di controllo e di microsfere in un luogo buio a -8 C e conservarle fino a nuovo uso. 7. Diluire il coniugato con la soluzione di lavaggio e conservare al buio (5 µl di coniugato per 45 µl di soluzione di lavaggio per campione). Per compensare le perdite dovute alle operazioni con le pipette, si consiglia di preparare un (1) volume extra di coniugato diluito. Coprire con un foglio e/o conservare al buio e a temperatura ambiente fino a nuovo uso. Riporre la porzione non utilizzata di coniugato concentrato in un luogo buio a -8 C e conservarla fino a nuovo uso. 8. Dopo 0 minuti di incubazione, rimuovere il coperchio di plastica e aggiungere 100 µl di soluzione di lavaggio in ogni pozzetto. Miscelare sollecitando il lato della piastra con leggeri colpi e aspirare con delicatezza. ATTENZIONE: L impiego di una forza del vuoto eccessiva farà aderire le microsfere alla membrana deteriorando eventualmente il campione. Per aspirare i campioni, applicare la pressione del vuoto minima necessaria. 9. Addizionare 50 µl di soluzione di lavaggio in ogni pozzetto e ripetere l operazione altre due volte, per un totale di tre lavaggi. ATTENZIONE: Un lavaggio incompleto può ridurre la capacità del coniugato di rivelare IgG legati a microsfere sensibilizzate e causare risultati negativi errati. 10. Addizionare 50 µl di coniugato diluito in ogni pozzetto. Coprire la piastra con un foglio o una scatola per proteggerla dalla luce. Collocarla su una piattaforma rotante (00 giri al minuto) o agitare delicatamente con l agitatore magnetico ogni 5-10 minuti. Incubare per 0 minuti a temperatura ambiente (da 0 a 4 C). 11. Con un puntale pulito, addizionare µl di soluzione di lavaggio in ogni pozzetto e mescolare per riportare in sospensione le microsfere. 1. Acquisire i dati con lo strumento Luminex rispettando le indicazioni del fabbricante. Un ritardo di oltre tre ore può aumentare la possibilità di ottenere reazioni falso-positive o falso-negative. Riporre la porzione non utilizzata di soluzione di lavaggio in un luogo buio a -8 C e conservarla fino a nuovo uso. RISULTATI Per determinare se una microsfera sia positiva, dividere dapprima l MFI medio della singola microsfera per l MFI di ciascuna microsfera di controllo negativa (CON1, CON, CON). Da questi quozienti, detrarre il fattore di regolazione di fondo (BAF, Background Adjustment Factor) relativo alla giusta combinazione microsfera/con. Il BAF è un rapporto MFI predeterminato per ciascuna combinazione microsfera/con al fine di compensare il disturbo di fondo dovuto alla variazione di microsfere ed è riscontrabile nel foglio di registrazione specifico del lotto fornito con il kit. Esempio: MFI della singola microsfera (BAF) = rapporto regolato 1 Sfera di controllo negativa 1 (CON1) MFI MFI della singola microsfera (BAF) = rapporto regolato Sfera di controllo negativa (CON) MFI Pagina 4 di 6 LC807IVDIT.15 (07/16)

5 MFI della singola microsfera (BAF) = rapporto regolato Sfera di controllo negativa (CON) MFI I kit di classe I ID e II IDv impiegano anche un quarto calcolo del controllo negativo, CalcCON, basato sulle prestazioni delle microsfere non reattive contenenti antigene. CalcCON è determinato nel modo seguente: CalcCON = microsfera MFI con antigene di rango inferiore + 0. Pertanto, il quarto calcolo è: Classe I ID MFI della singola microsfera (BAF) = rapporto regolato 4 CalcCON Un valore positivo per due o più dei quattro calcoli indica una reazione positiva della microsfera. Un valore negativo per tre o più dei quattro calcoli indica una reazione negativa della microsfera. La percentuale di anticorpi reattivi al quadro per i kit ID è calcolata nel seguente modo: % PRA = Numero delle reazioni positive delle microsfere X 100 Numero di microsfere nel saggio (non comprendente le microsfere di controllo) Classe II IDv %PRA = (Numero di microsfere arricchite con DR a reazione positiva) + (Numero di microsfere arricchite con DR a reazione negativa, contenenti un antigene DQ positivo) x 100 Numero totale di microsfere arricchite con DR CONTROLLO DI QUALITÀ Il controllo di qualità dei kit di classe I ID, classe II IDv è integrato nel sistema di prova includendo i sieri di controllo positivi e negativi. Tali controlli devono essere inclusi in ogni test eseguito per escludere errori tecnici o deterioramenti dei reagenti. Per i kit ID, i sieri di controllo positivi reagiscono a molte o tutte le microsfere coniugate HLA (>85%). La microsfera coniugata HLA di picco produce un intensità di fluorescenza media minima di I sieri di controllo negativi risulteranno negativi (<10%). La serie di microsfere comprende quattro microsfere di controllo per monitorare le prestazioni di ciascun campione. La microsfera di controllo positiva è rivestita con IgG umani e deve generare valori di MFI > con i sieri di controllo. Se si ottengono valori inferiori a MFI con i sieri di controllo, il lavaggio è risultato insufficiente o il coniugato è compromesso. I campioni dei pazienti evidenziano un ampia gamma di reattività alla microsfera di controllo positivo, ma dovrebbero produrre un segnale >500 MFI. Allo stesso modo, le microsfere di controllo negativo devono produrre bassi valori di MFI. Fare riferimento al foglio di registrazione specifico del lotto in merito alle gamme previste per le microsfere di controllo negativo. I dati fuori gamma vanno esaminati con attenzione. In assenza di siero, il controllo positivo produce un forte segnale mentre il resto delle microsfere genera valori medi pari o inferiori a circa 50 MFI. Se una misurazione produce valori così bassi, è possibile che il campione sia stato omesso inavvertitamente. In tal caso è necessario ripetere l'analisi. Il saggio deve essere condotto come consigliato nell'inserto della confezione ed eseguito rispettando tutte le altre procedure di controllo qualità conformi alle normativa vigente ed ai relativi requisiti di omologazione. LIMITI DELLA PROCEDURA Risultati errati possono essere causati da contaminazione batterica del materiale di analisi, periodi di incubazione inadeguati, errori di lavaggio o di decantazione delle microsfere, esposizione del coniugato alla luce diretta, oppure omissione di reagenti o fasi dell analisi. La presenza di immunocomplessi o di altri aggregati immunoglobulinici nel campione del paziente può causare un aumento del legame aspecifico e produrre risultati errati. Per i kit ID, gli anticorpi individuati sono quelli reattivi nell ambito della popolazione di antigeni disponibili elencata nel foglio di registrazione. Con i saggi LIFECODES ID non è possibile individuare alcuni IgA, IgM a bassa avidità e basso titolo e gli anticorpi di alleli rari. Le microsfere di fenotipo di classe II che indicano la presenza di antigeni DR e/o di DQ sono arricchite in funzione dei DR e possono evidenziare un'accresciuta sensibilità agli anticorpi DR. Al contrario, le microsfere specifiche di classe II DQ sono arricchite in funzione dei DQ e possono evidenziare un'accresciuta sensibilità agli anticorpi DQ. Gli esperimenti condotti a tutt'oggi non sono riusciti a rilevare la presenza di DR sulle microsfere arricchite con DQ, migliorando la specificità degli anticorpi DQ. La densità di antigene DR e DQ delle due formulazioni di microsfere (arricchite con DR e con DQ) può spiegare i pattern di reattività delle microsfere durante l'analisi del siero. L'addizione di microsfere di classe II DQ al saggio di classe II IDv contribuisce a determinare la presenza di anticorpi DQ nei sieri ad alta percentuale di PRA. A causa della natura complessa del test HLA, l interpretazione dei dati deve essere affidata a personale qualificato. La determinazione della specificità degli anticorpi mediante i kit LIFECODES ID deve considerare i risultati di tutte le microsfere, incluso quelle esibenti valori pari o simili al cutoff. La conoscenza dell'anamnesi del paziente e la comprensione dei gruppi a reazione incrociata possono risultare utili ai fini dell assegnazione della specificità a un dato siero. Pagina 5 di 6 LC807IVDIT.15 (07/16)

6 RISOLUZIONE DEI PROBLEMI PROBLEMA POSSIBILE CAUSA SOLUZIONE Numero basso di microsfere Superamento della soglia di controllo Errore soglia di controllo positivo La miscela di microsfere non è completamente in sospensione Errori dello strumento - non calibrato Errori dello strumento - flusso del campione bloccato Microsfere fotoscolorite Eccessiva pressione di aspirazione /microsfere che aderiscono alla membrana Lavaggio insufficiente Qualità scadente del campione Coniugato fotoscolorito Lavaggio insufficiente Agitare a impulsi con il vortex per completare la sospensione Consultare il manuale dello strumento Consultare il manuale dello strumento Utilizzare un nuovo kit Ridurre la forza di aspirazione Ripetere e controllare le operazioni di lavaggio Ripetere il prelievo Utilizzare un nuovo kit Ripetere e controllare le operazioni di lavaggio CARATTERISTICHE SPECIFICHE DELLE PRESTAZIONI Quando i kit LIFECODES ID sono impiegati conformemente alla procedura descritta, i risultati rivelano la presenza o l assenza di anticorpi HLA IgG. Utilizzando un cutoff di PRA del 10%, il kit di classe I ID ha evidenziato una co-positività del 97,1% (90,-99,%), una co-negatività dell 86,4% (75,5-9,0%) e una concordanza del 9,% (86,-95,7%) sui 19 campioni valutati rispetto ai risultati ottenuti utilizzando metodi citometrici di flusso (limiti di fiducia del 95%). Il kit di classe II ID v ha esibito una co-positività del 99,7% (98,-99,9%), il 7,% di conegatività (66,6-77,1%) ed una concordanza dell 87,% (84,-89,6%) sui 600 campioni valutati rispetto ai risultati ottenuti con LIFECODES classe II ID; i valori di co-negatività e di concordanza rispecchiano l aumento di individuazione di anticorpi DQ-reattivi con la classe II ID v, Il kit della classe II ID v ha esibito una concordanza del 100% nei risultati riferibili per sette campioni testati da sei operatori in tre siti di test e una concordanza del 100% nei risultati riferibili per sette campioni testati da un singolo operatore con tre lotti diversi. Nel corso delle analisi di laboratorio, i seguenti reagenti sono stati valutati e non hanno evidenziato alcuna interferenza con LIFECODES LifeScreen Deluxe: Remicade (Centocor), Rituxan (Genentech), Zenapax (Roche), Campath (Genzyme) e Gammaguard (Baxter). Al contrario, la Thymoglobulin (Genzyme) è risultata causare falsi positivi. I campioni contenenti Thymoglobulin possono produrre risultati errati. BIBLIOGRAFIA 1. Klein, J, Sato, A. The HLA System. N. Engl. J. Med. 000; 4:70 e 4:78.. Parham, P. The Immune System. Garland Publishing, N.Y. e Londra. 000; 55.. Rodey, GE. HLA Beyond Tears ( a edizione). DeNovo, Inc. Durango, Colorado, USA. 000; McKenna, RM; Takemoto, SK; Terasaki, PI. Anti-HLA Antibodies after Solid Organ Transplantation. Transplantation 000; 69:19. PRODUTTORE E RAPPRESENTANTE AUTORIZZATO Produttore: Immucor Transplant Diagnostics, Inc., 550 West Avenue, Stamford, Connecticut 0690; USA Tel: +1 (0) o +1 (888) numero verde USA e Canada, Fax: +1 (0) Rappresentante autorizzato: Immucor Medizinische Diagnostik GmbH, Adam-Opel-Strasse 6A Rodermark 6, Germany Phone: (+49) , Fax: (+49) Assistenza tecnica per l Europa: Tel.: +/ Pubblicato: rev. 15, Pagina 6 di 6 LC807IVDIT.15 (07/16)