GUIDA PER L UTENTE. Responsabile: Dott.ssa Arnalda Lanfranchi

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1 Codif: LabCellStam-PO-703-All Pagina 1 di 11 Dipartimento di Diagnostica di Laboratorio Responsabile: Prof. Arnaldo Caruso Sezione Specializzata di Ematologia e Coagulazione Responsabile: Dott.ssa Arnalda Lanfranchi

2 Codif: LabCellStam-PO-703-All Pagina 2 di 11 Il Laboratorio Cellule Staminali Le attività del Laboratorio Cellule Staminali, che hanno avuto inizio nel 1990 presso gli Spedali Civili di Brescia, hanno sede presso i locali individuati nell'ambito del Laboratorio di Medicina Molecolare "Angelo Nocivelli".

3 Codif: LabCellStam-PO-703-All Pagina 3 di 11 Il Laboratorio realizza procedure di manipolazione delle cellule staminali per la realizzazione clinica del trapianto di midollo osseo in bambini affetti da oncoemopatie (leucemie e tumori solidi) e immunodeficienze primitive, test di monitoraggio post trapianto ma anche diagnosi di malattia. Tutte le attività di routine del laboratorio sono certificate ISO 9001, accreditate secondo gli Standard Joint Commission International 2011 e accreditate secondo i FACT-JACIE International Standards for Cellular Therapy, 4^ edizione, per quanto riguarda il settore preparazione cellule staminali per trapianto. Il servizio viene effettuato sia su campioni provenienti da pazienti ricoverati presso i Reparti dell Azienda Spedali Civili, sia da pazienti non ricoverati che afferiscono al Servizio Prelievi Esterni ed anche su campioni provenienti da altri Enti Ospedalieri sia intraregione che extraregione. L'attività di laboratorio abbraccia tre distinti aspetti: 1. Manipolazione cellule staminali per uso clinico 2. Analisi molecolare di chimerismo 3. Diagnostica cellulare, molecolare ed enzimatica di malattia

4 La manipolazione delle cellule staminali per uso clinico Codif: LabCellStam-PO-703-All Pagina 4 di 11 Dal 1990 sono stati realizzati 130 trapianti autologhi e più di 460 trapianti di midollo osseo da donatore allogenico nei quali sono inclusi numerosi bambini affetti da immunodeficienze primitive. Il laboratorio realizza procedure di selezione di cellule staminali da donatore compatibile familiare, donatore compatibile da Registro Internazionale e da familiare parzialmente identico. Nel 1996 è stato realizzato il primo trapianto in utero al mondo e da allora sono stati realizzati 7 trapianti prenatali di cellule staminali in bambini affetti da immunodeficienza combinata grave e da osteogenesi imperfetta. Analisi molecolare di chimerismo Il successo della procedura trapiantologica accanto ai dati clinici necessita di conferme di laboratorio che si avvalgono di sofisticate tecnologie molecolari. Il chimerismo donatore-ricevente riconosce quante e quali cellule del donatore sono attecchite e quindi danno un importante informazione al clinico sull andamento del trapianto. Vengono eseguite analisi molecolari su DNA estratto dalle cellule dei pazienti a vari tempi dal trapianto e dopo averle separate immunologicamente per analizzare una specifica sottopopolazione cellulare. Diagnostica cellulare, molecolare ed enzimatica di malattia Il laboratorio esegue tests per la diagnosi di bambini affetti da malattia granulomatosa cronica (CGD) e di SCID da deficit di Adenosin Deaminasi (ADA) o da deficit di Purin Nucleoside Fosforilasi (PNP). La diagnosi di CGD avviene con due metodi, stimolando in vitro e colorando i granulociti neutrofili con colorazioni vitali specifiche che evidenziano la capacità o meno degli stessi a fagocitare e distruggere germi e microorganismi, o mediante citofluorimetria. Le diagnosi di SCID con deficit di ADA o PNP viene realizzata mediante spettrofotrometria con un dosaggio di tipo enzimatico e confermata da analisi molecolare mediante sequenziamento degli esoni potenzialmente interessati dalle mutazioni. Inoltre vengono analizzati i metaboliti tossici dell Adenosin Deaminasi (Dosaggio di nucleotidi di Adenosina e Desossiadenosina) che sono sempre presenti alla diagnosi. Questo test indica l andamento della malattia e viene effettuato anche dopo trapianto di midollo osseo per valutare la detossificazione del paziente e quindi il miglioramento progressivo dettato dal trapianto stesso; inoltre il test viene effettuato anche in corso di terapia enzimatica sostitutiva con Peg-ADA insieme al Dosaggio enzimatico di Adenosin Deaminasi (ADA) nel plasma e alla Ricerca Anticorpi anti-ada nel plasma. Vengono inoltre eseguiti tests di funzionalità cellulare come la capacità di proliferazione e maturazione delle cellule midollari in pazienti con malattie ematologiche ed aplasie midollari.

5 Codif: LabCellStam-PO-703-All Pagina 5 di 11 Una buona qualità della fase analitica di tutti i processi diagnostici dipende anche dall accuratezza della fase preanalitica e dalla collaborazione tra il Laboratorio e gli operatori sanitari. Il Medico Curante assume, nella fase preanalitica (informazione e preparazione del paziente istruzioni per la raccolta e la conservazione dei campioni biologici, trasporto), un ruolo assai importante poiché la corretta esecuzione di tale fase garantisce attendibilità ed affidabilità alla fase analitica vera e propria. Al fine quindi di ottimizzare e migliorare la qualità dei processi diagnostici abbiamo voluto predisporre queste pagine informative che comprendono: - elenco indagini richiedibili - modalità di raccolta e conservazione di alcuni campioni clinici - informazioni su nuove indagini e loro interpretazione La presente guida ha lo scopo di fornire agli utenti informazioni riguardanti: 1. Le indagini eseguite 2. Le modalità di richiesta e trasporto dei campioni 3. I tempi di refertazione

6 Codif: LabCellStam-PO-703-All Pagina 6 di 11 Ogni esame ha dei giorni specifici di accettazione come riportato in tabella 1. Gli esami contrassegnati da * devono essere accompagnati da un controllo sano di eguale quantità. L esame 152 e 52 per gli esterni, contrassegnato da **, deve essere accompagnato dal prelievo della mamma. Per quanto riguarda i tests che vengono eseguiti per la Manipolazione di Cellule Staminali ai fini del trapianto, l accettazione avviene tutti i giorni ed in qualsiasi orario. PRELIEVI PROVENIENTI DALL INTERNO DELLA STRUTTURA Per i Reparti collegati al Sistema Informatico dei laboratori i campioni devono essere identificati dall etichetta prodotta dal sistema informatico presente nel reparto ed inviati in laboratorio accompagnati dalla bolla di consegna recante lo stato trasferito. Per i Reparti non collegati al Sistema Informatico dei laboratori i campioni devono essere identificati dall etichetta fornita al reparto dall Accettazione Amministrativa al momento del ricovero e devono essere accompagnati dal relativo modulo di richiesta analisi fornito dal laboratorio. PRELIEVI PROVENIENTI DA ALTRE STRUTTURE OSPEDALIERE Per i campioni provenienti da altre Aziende Ospedaliere è necessario prendere accordi telefonici con il laboratorio precedentemente al giorno del prelievo al paziente, in modo tale da poter fornire le indicazioni necessarie per le modalità di trasporto e di richiesta. In ogni caso il prelievo deve essere accompagnato dalla richiesta della Direzione Sanitaria dell Azienda Ospedaliera dove il paziente effettua il prelievo e da un modulo di richiesta dell Azienda Ospedaliera Spedali Civili di Brescia TIMBRATO E FIRMATO dove deve essere chiaramente specificato il nome del medico richiedente, numero di fax e indirizzo dove successivamente verranno inviati i referti.

7 Codif: LabCellStam-PO-703-All Pagina 7 di 11 I campioni devono arrivare in laboratorio entro le Eventuali ritardi devono essere comunicati tempestivamente al laboratorio. Il personale del laboratorio è disponibile per informazioni e chiarimenti ai seguenti recapiti: SEGRETERIA: LABORATORIO: STUDIO: / 6285 Il Servizio è operativo dalle ore alle ore dal lunedì al venerdì.

8 Codif: LabCellStam-PO-703-All Pagina 8 di 11 Cod. Analisi Nome su referto Giorni di refertazione Giorni di accettazione Modalità di trasporto Tipo contenitore Diagnosi Molecolare di Deficit di ADA 15 Lun Giov T.A. P. Arancio Litio Eparina 4.5mL 150 Analisi di Chimerismo su Linfociti Totali (PBL) 5 Lun Giov T.A. P. Arancio Litio Eparina 4.5mL Analisi di Chimerismo su T Linfociti (CD3+) 5 Lun Giov T.A. P. Arancio Litio Eparina 4.5mL Analisi di Chimerismo su B Linfociti (CD19+) 5 Lun Giov T.A. P. Arancio Litio Eparina 4.5mL Analisi di Chimerismo su Monociti (CD14+) 5 Lun Giov T.A. P. Arancio Litio Eparina 4.5mL Analisi di Chimerismo su Natural Killer (CD56+) 5 Lun Giov T.A. P. Arancio Litio Eparina 4.5mL Analisi di Chimerismo su Polimorfonucleati (PMN) 5 Lun Giov T.A. P. Arancio Litio Eparina 4.5mL Analisi Quantitativa di Chimerismo su Linfociti Totali (PBL) 5 Lun Giov T.A. P. Arancio Litio Eparina 4.5mL Analisi Quantitativa di Chimerismo su T Linfociti (CD3+) 5 Lun Giov T.A. P. Arancio Litio Eparina 4.5mL Analisi Quantitativa di Chimerismo su B Linfociti (CD19+) 5 Lun Giov T.A. P. Arancio Litio Eparina 4.5mL Analisi Quantitativa di Chimerismo su Monociti (CD14+) 5 Lun Giov T.A. P. Arancio Litio Eparina 4.5mL Analisi Quantitativa di Chimerismo su Natural Killer (CD56+) 5 Lun Giov T.A. P. Arancio Litio Eparina 4.5mL Analisi Quantitativa, di Chimerismo su Polimorfonucleati (PMN) 5 Lun Giov T.A. P. Arancio Litio Eparina 4.5mL Deplezione Plasma 1 Tutti i giorni lavorativi C Sacca prelievo Deplezione Globuli Rossi 1 Tutti i giorni lavorativi C Sacca prelievo Selezione Positiva per CD34+ 1 Tutti i giorni lavorativi C Sacca prelievo Criopreservazione di Cellule Staminali Midollari 1 Tutti i giorni lavorativi C Sacca prelievo Criopreservazione di Cellule Staminali Periferiche 1 Tutti i giorni lavorativi C Sacca prelievo 150 Criopreservazione di Sospensione Linfocitaria 1 Tutti i giorni lavorativi C Sacca prelievo P. Arancio Litio Epar

9 Codif: LabCellStam-PO-703-All Pagina 9 di Scongelamento/Lavaggio DMSO Cellule Staminali Midollari Crio 1 Tutti i giorni lavorativi In Azoto Sacca prelievo 152 Analisi di Engraftment Materno** 5 Lun Giov T.A. P. Arancio Litio Eparina 4.5mL 31 NBT Test * 2 Mart Merc C P. Arancio Litio Eparina 4.5mL 3104 Dosaggio Enzimatico di Adenosin Deaminasi (ADA) * 2 Mart Merc T.A. P. Porpora EDTA 2.7mL 3105 Dosaggio Enzimatico di Purin Nucleoside Fosforilasi (PNP) * 2 Mart Merc T.A. P. Porpora EDTA 2.7mL 3122 Coltura Semisolida di cellule emopoietiche 16 Tutti i giorni lavorativi C Siringa eparinata 3188 Test Diidrorodamina, 123 DHR * 2 Mart Merc C P. Arancio Litio Eparina 4.5mL 3280 Numerazione CD34+ 1 Tutti i giorni lavorativi C P. Porpora EDTA 2.7mL 153 Dosaggio dei nucleotidi di Adenosina e desossiadenosina 2 Lun Mart Merc Giov In ghiaccio P. Porpora EDTA 2.7mL Dosaggio di Adenosin Deaminasi (ADA) nel plasma * 3 Mart Merc T.A. P. Porpora EDTA 2.7mL Diagnosi Molecolare stato di portatore Deficit di ADA 15 Lun Giov T.A. P. Porpora EDTA 2.7mL Ricerca Anticorpi Anti-ADA nel plasma 7 Mart Merc T.A. P. Porpora EDTA 2.7mL Diagnosi Molecolare di Deficit di PNP 15 Lun Giov T.A. P. Porpora EDTA 2.7mL Diagnosi Molecolare stato di portatore Deficit di PNP 15 Lun Giov T.A. P. Porpora EDTA 2.7mL

10 Codif: LabCellStam-PO-703-All Pagina 10 di 11 Cod. Analisi Descrizione Esame Giorni di refertazione Tariffa (euro) Giorni di accettazione Modalità di trasporto Tipo contenitore 11 NBT Test * Mart Merc C P. Arancio - Litio Epar. 5.0mL 1104 Dosaggio Enzimatico di Adenosin Deaminasi (ADA) Mart Merc C P. Porpora EDTA 2.7mL 1105 Dosaggio Enzimatico di Purin Nucleoside Fosforilasi (PNP) Mart Merc C P. Porpora EDTA 2.7mL 1188 Test Diidrorodamina, 123 DHR * Mart Merc C P. Arancio Litio Epar. 4.5mL 5001 Diagnosi Molecolare di Deficit di ADA Lun Giov T.A. P. Arancio - Litio Epar. 4.5mL 5011 Analisi di Chimerismo su Monociti (CD14+) Lun Giov T.A. P. Arancio Litio Epar. 4.5mL 5012 Analisi di Chimerismo su Natural Killer (CD56+) Lun Giov T.A. P. Arancio Litio Epar. 4.5mL 5013 Analisi di Chimerismo su Polimorfonucleati (PMN) Lun Giov T.A. P. Arancio Litio Epar. 4.5mL 5008 Analisi Quantitativa di Chimerismo su Linfociti Totali (PBL) Lun Giov T.A. P. Arancio Litio Epar. 4.5mL 5009 Analisi Quantitativa di Chimerismo su T Linfociti (CD3+) Lun Giov T.A. P. Arancio Litio Epar. 4.5mL 5010 Analisi Quantitativa di Chimerismo su B Linfociti (CD19+) Lun Giov T.A. P. Arancio Litio Epar. 4.5mL 52 Analisi di Engraftment materno ** Lun Giov T.A. P. Arancio Litio Epar. 4.5mL 53 Dosaggio dei nucleotidi di Adenosina e desossiadenosina Lun Mart Merc Giov In ghiaccio P. Porpora EDTA2.7mL 1122 Coltura Semisolida di precursori emopoietici (CFU) Tutti i giorni lavorativi C Siringa eparinata 3280 Numerazione CD Tutti i giorni lavorativi C P. Porpora EDTA 2.7mL 5030 Dosaggio di Adenosin Deaminasi (ADA) nel plasma * Mart Merc T.A. P. Porpora EDTA 2.7mL

11 Codif: LabCellStam-PO-703-All Pagina 11 di 11 Gli utenti e i professionisti possono scriverci al seguente indirizzo di posta elettronica: oppure possono contattare telefonicamente il nostro personale: RESPONSABILE: Dott.ssa Arnalda Lanfranchi BIOLOGO DIRIGENTE: Dott.ssa Federica Bolda /6977 TECNICI DI LABORATORIO: Sig.ra Renata Baffelli Sig.ra Michela Zucchi Sig.ra Samanta Villanova CONTRATTISTA: Dott.ssa Alessandra Beghin (Biologo Contrattista Ospedaliero) /5 SEGRETARIA: Sig.ra Melania Mondini