Δ-4-ANDROSTENEDIONE CT

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1 Δ-4-ANDROSTENEDIONE CT REF KS15CTN 100 ITALIANO DOSAGGIO RADIOIMMUNOLOGICO PER LA DETERMINAZIONE QUANTITATIVA DELL ANDROSTENEDIONE NEL SIERO UMANO KS15CTN Determinazioni PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO 1. APPLICAZIONI CLINICHE L androstenedione (4-Androstene-3, 17-dione) è uno steroide C 19 prodotto dalla ghiandola surrenale e dalle gonadi. L androstenedione è un precursore immediato del testosterone e dell estrone, successivamente convertibili in estradiolo. La misurazione dei livelli di androstenedione nel siero rappresenta un utile marker della biosintesi androgenica. E stato osservato un aumento dei livelli di androstenedione in associazione ad iperplasia surrenale congenita virilizzante. Innalzamenti dei livelli sierici di androstenedione sono risultati associati anche a sindrome dell ovaio policistico, ipertecosi stromale, deficienza di 3β-idrossisteroide idrogenasi e ad altre cause di irsutismo nella donna (3, 5, 6). Un innalzamento dei livelli di androstenedione nel siero può verificarsi anche in soggetti con tumori surrenalici e ovarici virilizzanti (3). 2. PRINCIPIO DEL METODO La procedura si basa sul principio del dosaggio radioimmunologico, in cui si verifica la competizione tra antigene radioattivo ed antigene non-radioattivo per un numero prestabilito di siti anticorpali leganti (9). La quantità di androstenedione marcato con I 125 legato agli anticorpi risulterà inversamente proporzionale alla concentrazione di androstenedione presente nel campione. La separazione tra antigene libero e legato avviene mediante decantazione o aspirazione del contenuto dei tubi rivestiti con anticorpi. 3. REAGENTI CONTENUTI NEL KIT - I reagenti sono sufficienti per 100 determinazioni. - Il kit deve essere conservato a 2-8 C. - La data di scadenza di ciascun reagente è indicata sulla rispettiva etichetta. CONJ I 125 Coniugato Radioattivo: 1 flacone (27 ml) di androstenedione marcato con I 125 in soluzione tampone a base proteica. Conservante: NaN 3 (<0.1%). Contenuto di radioattività: ± 115 kbq. Emivita I 125 = 59.9 giorni. Principali radiazioni emesse: CAL γ X E (MeV) % Calibratori: Calibratore Zero: 1 flacone contenente 0 ng/ml di androstenedione in siero umano. Liofilizzato. Ricostituire con 1,0 ml di acqua distillata. Conservante: NaN 3 (<0.1%). Calibratori da 1 a 5: 5 flaconi di androstenedione in siero umano. Liofilizzati. Ricostituire con 0,5 ml di acqua distillata. Conservante: NaN 3 (<0.1%). Dopo ricostituzione, i calibratori potranno essere conservati a 2-8 C per un mese. I valori esatti di concentrazione sono riportati sul Foglio Dati di Controllo Qualità. CTR Sieri di Controllo: 2 flaconi contenenti rispettivamente un livello basso e un livello alto di androstenedione in siero umano. Liofilizzati. Ricostituire con 0,5 ml di acqua distillata. Conservante: NaN 3 (<0.1%). Dopo ricostituzione, i sieri di controllo potranno essere conservati a 2-8 C per un mese. Per la concentrazione esatta far riferimento al valore riportato sul Foglio Dati di Controllo Qualità. CT Provette Sensibilizzate: 100 provette sensibilizzate con immunoglobuline di coniglio antiandrostenedione. Le provette non utilizzate devono essere conservate a 2-8 C, protette dall umidità. WASH Soluzione di Lavaggio tipo I (concentrata 50x): 1 flacone contenente 20 ml di Tampone Tris-HCl con detergente e conservante (NaN 3 : <0.1%). Portare a 1000 ml con acqua distillata. La soluzione di lavaggio diluita è stabile per 2 mesi a 2-8 C. 4. MATERIALE NECESSARIO MA NON FORNITO - Provette in plastica - Portaprovette - Micropipette automatiche a puntali intercambiabili con volume variabile - Vortex - Cilindro graduato - Pompa aspirante oppure apparecchiatura automatica per il lavaggio delle micropiastre - Contatore gamma a scintillazione - Acqua distillata - Bagnomaria M453 Rev. 1 06/2007 Pag. 1/10

2 MATERIALE RADIOATTIVO Radionuclide presente: I INFORMATIVA (D.Lgs. 230/95 D.Lgs. 241/00 art. 19) E NORME DI SICUREZZA E PREVENZIONE Per ottenere risultati corretti e riproducibili è necessario osservare le seguenti norme: Non mescolare reagenti di lotti differenti. Non usare i reagenti dopo la data di scadenza. Non esporre i reattivi e i campioni a calore intenso o a fonti di inquinamento. Usare vetreria perfettamente pulita ed esente da contaminazioni di ioni metallici o sostanze ossidanti. Usare acqua distillata o deionizzata, conservata in recipienti perfettamente puliti. Evitare accuratamente contaminazioni tra campioni; a tal fine è consigliabile usare pipette con puntali monouso per ogni campione e per ogni reattivo. Non modificare in alcun modo il Procedimento Operativo nell esecuzione del test. L eventuale non rispetto di: sequenza e quantità nell aggiunta dei reattivi tempi e temperatura di incubazione può dare luogo a risultati clinici errati. Ricostituire i reagenti liofili secondo le modalità descritte sulle etichette. L eventuale utilizzo di reattivi o volumi non idonei può dar luogo a dati clinici non attendibili. In caso di procedura manuale è importante l utilizzo di pipette calibrate e l acquisizione di un adeguata manualità tecnica. In particolare è essenziale una buona precisione nella preparazione e dispensazione dei reattivi. E necessario un adeguato piano di manutenzione (pulizia e calibrazione) degli strumenti di dispensazione. Accertarsi che tutta la strumentazione usata (vetreria, bagno termostatato, lavatore, contatore gamma, frigoriferi usati per la conservazione dei kit e dei campioni) sia perfettamente funzionante, adeguatamente calibrata e sia soggetta ad un regolare piano di manutenzione. Un uso non accurato di ognuno di questi strumenti può produrre errori metodologici che possono condizionare la riproducibilità e l affidabilità dei risultati ottenuti. Utilizzare un adeguato metodo per la corretta identificazione dei campioni. La loro errata identificazione potrebbe determinare la perdita di specificità del dispositivo e risultati analitici errati. Con lo scopo di ridurre i rischi di tipo fisico, biologico e chimico, è necessario osservare le seguenti norme di sicurezza: Utilizzare dispositivi di protezione individuale (es.: guanti monouso, camice, ecc.) durante la manipolazione di materiale radioattivo e/o potenzialmente infetto e durante il dosaggio. Non pipettare i reagenti con la bocca. Non fumare, mangiare, bere o applicare cosmetici durante l'esecuzione del dosaggio. La manipolazione di sostanze radioattive deve essere eseguita in aree specificamente predisposte. Le sostanze radioattive devono essere conservate nei loro contenitori originali in un area specificamente predisposta. E necessario compilare un registro che indichi dettagliatamente l ingresso, la conservazione e l eliminazione di tutto il materiale radioattivo ricevuto. E necessario eliminare immediatamente qualunque contaminazione radioattiva secondo le procedure stabilite. Il materiale di origine umana utilizzato nella preparazione dei sieri di controllo e dei calibratori contenuti nel kit è stato testato per la presenza di HBsAg, anti-hiv1, anti- HIV2 e anti-hcv ed è risultato ripetutamente negativo. Tuttavia nessun test attualmente disponibile garantisce l'assenza degli agenti virali responsabili della sindrome da immunodeficienza acquisita, dell'epatite B ed epatite C. Tutti i reagenti contenenti materiale biologico e tutti i campioni di siero umano devono essere considerati potenzialmente infettivi. Evitare la produzione di schizzi e la formazione di aerosol; qualora ciò si verificasse ripulire accuratamente con ipoclorito di sodio ad una concentrazione del 3%. Il mezzo adoperato per la pulizia deve essere trattato come residuo potenzialmente infetto ed eliminato secondo le modalità opportune. La sodio azide contenuta come conservante in alcuni reagenti può reagire con il piombo ed il rame delle tubature formando azidi di metallo altamente esplosive. Per evitare la formazione e l'accumulo di tali composti far scorrere abbondante acqua durante l eliminazione dei reagenti. Ai sensi del D.L. italiano n. 22 del , che fa riferimento alle direttive CEE (91/156/CEE, 91/689/CEE, 94/62/CEE), tutti i rifiuti provenienti da lavorazioni manuali e/o in automatico sono classificati rifiuti speciali pericolosi con codice di classificazione CER (rifiuti infetti o potenzialmente infetti); devono quindi essere eliminati affidandoli a ditte autorizzate al ritiro ed allo smaltimento. Tutti i rifiuti provenienti da lavorazioni con radioisotopi devono essere smaltiti affidandoli a ditte autorizzate al ritiro in accordo a quanto previsto nel D.Lgs. 241/2000. L'acquisto, la detenzione, l'impiego e lo smaltimento di materiale radioattivo (sia solido che liquido) sono soggetti alle disposizioni locali previste dalle autorità legislative. La quantità di radioattività alla data di riferimento è specificata nell etichetta esterna del kit. 6. RACCOLTA DEI CAMPIONI Si raccomanda di utilizzare siero. I campioni fortemente lipemici o emolizzati devono essere scartati. I campioni possono essere conservati a 2-8 C per 1 giorno; per periodi più lunghi si consiglia di aliquotare e congelare i campioni a -20 C. Ripetuti congelamenti e scongelamenti dei campioni possono provocare una diminuzione dei livelli di androstenedione. 7. PROCEDURA OPERATIVA - Attendere che i reagenti e i campioni raggiungano la temperatura ambiente. - Agitare delicatamente i campioni prima dell uso. - Per quanto riguarda i calibratori, si consiglia di effettuare il dosaggio in duplicato. 1- Preparare le provette non sensibilizzate per l Attività Totale e le provette sensibilizzate per i Calibratori, i Campioni ed i Sieri di Controllo. 2- Dispensare 25 µl di ogni Calibratore, Siero di Controllo e Campione nelle provette corrispondenti. Dispensare direttamente sul fondo delle provette. M453 Rev. 1 06/2007 Pag. 2/10

3 3- Dispensare 250 µl di Coniugato Radioattivo in tutte le provette. Miscelare delicatamente. 4- Incubare tutte le provette in bagnomaria a 37 C per 60 minuti. 5- Aspirare il contenuto di ogni provetta, ad eccezione di quelle destinate all Attività Totale. 6- Dispensare 2 ml di Soluzione di Lavaggio diluita in ogni provetta, ad eccezione di quelle dell Attività Totale, ed aspirare accuratamente oppure far decantare il contenuto di tutte le provette su carta bibula. 7- Misurare per 1 minuto, con un contatore gamma, la radioattività presente nelle provette. Si consiglia di controllare il background dello strumento prima di effettuare la lettura. Al fine di evitare variazioni nella sensibilità del sistema, il background dovrà essere ridotto al minimo o accuratamente regolato. SCHEMA DEL DOSAGGIO Provette Reagente Attività Totale CAL CTR Campioni CAL µl CTR µl ---- Campioni µl CONJ I µl 250 µl 250 µl 250 µl - Miscelare e incubare per 60 min in bagnomaria a 37 C - Aspirare, o decantare, e lavare: 1 x 2 ml, eccetto le provette per l Attività Totale. - Leggere la radioattività delle provette per 1 minuto. 8. CALCOLO DEI RISULTATI I risultati riportati in questo inserto sono stati calcolati utilizzando una curva log-lineare. Sistemi di calcolo differenti potrebbero fornire risultati leggermente diversi. Calcolare la percentuale di Capacità di Legame (B 0 /T%) e la percentuale di Legame (B/B 0 %) per Calibratori, Controlli e Campioni. Tracciare la curva di calibrazione su carta logit-log o semilog utilizzando il metodo spline fitting, con le concentrazioni dei calibratori riportati in ascissa e i rispettivi valori di B/B 0 % in ordinata. Calcolare, quindi, la B/B 0 % per ciascun campione e leggere, per interpolazione sulla curva di calibrazione, la concentrazione di androstenedione presente nel campione esaminato, espressa in ng/ml. ESEMPIO DI CALCOLO I valori riportati di seguito devono essere considerati unicamente a titolo di esempio e non devono essere utilizzati al posto dei dati sperimentali. Descrizione Media cpm B/B 0 Androstenedione ng/ml Attività Totale (T) CAL CAL CAL CAL CAL CAL CONTROLLO CONTROLLO CAMPIONE CAMPIONE CAMPIONE CONTROLLO DI QUALITA INTERNO - Se i risultati ottenuti dosando il Siero Controllo 1 ed il Siero Controllo 2 non rientrano nei limiti riportati sul Foglio di Controllo Qualità, non è opportuno utilizzare i risultati ottenuti per i campioni, a meno che non vi sia una spiegazione soddisfacente per la discordanza riscontrata. - Ogni laboratorio può preparare un proprio pool di sieri da utilizzare come controllo, da conservare congelato in aliquote. Non congelare e scongelare un aliquota più di due volte. - I criteri di accettazione per le differenze riscontrate tra i risultati in duplicato dei campioni devono basarsi sulla Buona Prassi di Laboratorio. 9. VALORI DI RIFERIMENTO Si raccomanda a ciascun laboratorio di determinare il proprio intervallo di riferimento. I valori indicati nella tabella che segue sono riportati soltanto a titolo indicativo. POPOLAZIONE N MEDIA (ng/ml) MEDIA + 3 DS (ng/ml) Maschi Femmine Tutti i soggetti (Range: ) CARATTERISTICHE METODOLOGICHE Tutte le caratteristiche di performance sono espresse in ng/ml. Conversione in nmol/l: ng/ml x 3.45 = nmol/l. A. SENSIBILITA La sensibilità teorica, o limite minimo di rilevazione, calcolata per interpolazione della media meno due deviazioni standard di 20 replicati del Calibratore 0 ng/ml di Androstenedione, è pari a 0.05 ng/ml. B. PRECISIONE Ripetibilità (Intra-saggio) M453 Rev. 1 06/2007 Pag. 3/10 Siero Media ± D. S. C.V. N % ± ± ±

4 Riproducibilità (Inter-saggio) Siero Media ± D. S. C.V. N % ± ± ± C. ACCURATEZZA L'accuratezza del metodo é stata valutata mediante il test di recupero ed il test di parallelismo: Test di Recupero Sono stati sottoposti al test due campioni di siero contenenti livelli diversi di androstenedione endogeno ai quali sono state aggiunte quantità note di androstenedione. Aggiunto Atteso Misurato Recupero Composto % Reattività crociata Androstenedione 100 Androsterone α-idrossiprogesterone Cortisone Isoandrosterone Deossicortisone Eziocolanolone α-Diidrotestosterone Deidroepiandrosterone (DHEA) Progesterone Corticosterone Cortisolo Estrone Pregnenolone Colesterolo - DHEA-Solfato β -Estradiolo Estriolo 17 α-idrossipregnenolone S S1 + CAL S1 + CAL S1 + CAL S1 + CAL S1 + CAL S1 + CAL S S2 + CAL S2 + CAL S2 + CAL S2 + CAL S2 + CAL S2 + CAL Test di Parallelismo Sono stati testati due campioni di siero diluiti con il calibratore 0 ng/ml di Androstenedione. Fattore di diluizione Atteso Misurato Recupero S1 indiluito / / / / S2 indiluito / / / / D. SPECIFICITA E stata valutata la reattività crociata dell antisiero dell androstenedione nei confronti di diversi composti. La percentuale di reattività crociata è stata espressa come rapporto tra la concentrazione di androstenedione e la concentrazione dell altro composto, con un legame del 50% del calibratore 0 ng/ml. M453 Rev. 1 06/2007 Pag. 4/10

5 ENGLISH RADIOIMMUNOASSAY FOR THE QUANTITATIVE DETERMINATION OF ANDROSTENEDIONE IN HUMAN SERUM KS15CTN Determinations FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE ONLY CTR concentration, refer to the value indicated on the Quality Control data sheet. Control Sera: 2 vials containing low and high concentrations of androstenedione in human serum. Lyophilized. Reconstitute with 0.5 ml of distilled water. Preservative: NaN 3 (<0.1%). After reconstitution, the control serum can be stored at 2-8 C for one month. For the exact concentration, refer to the value indicated on the Quality Control data sheet. 1. CLINICAL APPLICATIONS Androstenedione (4-Androstene-3, 17-dione), a C 19 steroid, is produced in the adrenal gland and gonads. Androstenedione is an immediate precursor to both testosterone and estrone, both of which may be subsequently converted to estradiol. Measurement of serum androstenedione provides a useful marker of androgen biosynthesis. Elevated androstenedione levels have been demonstrated in virilizing congenital adrenal hyperplasia. Androstenedione serum levels are also increased in polycystic ovary syndrome, ovarian stromal hypertecosis, 3βhydroxysteroid dehydrogenase deficiency, and other causes of hirsutism in women (3, 5, 6). Elevated androstenedione serum levels may also occur in adrenal and ovarian virilizing tumors (3). 2. PRINCIPLE OF THE ASSAY The procedure follows the basic principle of radioimmunoassay where there is competition between a radioactive and a nonradioactive antigen for a fixed number of antibody binding sites (9). The amount of [I-125]-labelled androstenedione bound to the antibody is inversely proportional to the concentration of androstenedione present. The separation of free and bound antigen is achieved by decanting or aspirating the antibodycoated tubes. 3. REAGENTS PROVIDED WITH THE KIT - The reagents are sufficient for 100 determinations. - Store the kit and reagents at 2-8 C. - The expiration date of each reagent is shown on the label. CONJ I 125 Radioactive Conjugate: 1 vial (27 ml) of 125 I labelled androstenedione in a protein-based buffer. Preservative: NaN 3 (<0.1%). Radioactivity content: ±115 kbq. 125 I half-life: 59.9 days. Main radioactive emissions: γ X E (MeV) % CAL Calibrators: Zero Calibrator: 1 vial containing 0 ng/ml androstenedione in human serum. Lyophilized. Reconstitute with 1.0 ml of distilled water. Preservative: NaN 3 (<0.1%). Calibrators 1 to 5: 5 vials of androstenedione in human serum. Lyophilized. Reconstitute with 0.5 ml of distilled water. Preservative: NaN 3 (<0.1%). After reconstitution, the calibrators can be stored at 2-8 C for one month. For the exact CT Coated Tubes: 100 tubes coated with rabbit antiandrostenedione immunoglobulin. Unused tubes must be stored at 2-8 C, protected from moisture. WASH Washing Solution type I (50x concentrated): 1 vial of 20 ml Tris-HCl buffer with detergent and preservative NaN 3 (<0.1%). Bring to 1000 ml with distilled water. The diluted washing solution is stable for 2 months at 2-8 C. 4. MATERIAL REQUIRED BUT NOT SUPPLIED - Plastic test tubes - Test tube racks - Adjustable, automatic micropipettes with disposable tips - Vortex mixer - Graduated cylinder - Aspiration pump or automated washing device - Scintillation gamma counter - Distilled water - Waterbath RADIOACTIVE MATERIAL Radionuclide: I ITALIAN DECREES (D.Lgs. 230/95 D.Lgs. 241/00 art. 19) AND RULES OF PREVENTION AND SECURITY In order to obtain correct and reproducible results, the following rules must be observed: Do not mix reagents of different lots. Do not use reagents beyond their expiry date. Do not store or leave reagents and samples at high temperatures or areas of possible contamination. Use thoroughly clean glassware, free from metal ion contamination or oxidizing substances. Use distilled or deionized water, stored in perfectly clean containers. Carefully avoid any contamination among samples; for this purpose, disposable tips should be used for each sample and reagent. Do not modify the "Assay Procedure" in any way. Altering volume of reagent added exact temperature and incubation times may cause incorrect clinical results. Reconstitute lyophilized reagents as described on the relative labels. Any deviation in reagent use or wrong volumes, may affect the reliability of results obtained. In case of manual procedure, it is important to use calibrated pipettes and have appropriate technical manuals. It is important to prepare and dispense the reagents accurately. Ensure that all the equipment used M453 Rev. 1 06/2007 Pag. 5/10

6 is in perfect working order, has been correctly calibrated and is regularly maintained. Ensure that all the equipment used (glassware, incubators, tube washers, gamma counter and fridge/freezers used for reagent and sample storage) is in perfect working order, has been correctly calibrated and is regularly maintained. Any deviation from the correct use of the equipment listed can produce errors in the methodology, this may affect the reproducibility and reliability of results obtained. Utilise a suitable method for the correct identification of patient samples. Incorrect identification may cause a specificity losses of the system and wrong clinical results. In order to reduce physical, biological and chemical risks, the following precautions must be observed: Use protective individual articles (ex.: disposable gloves, lab coats, etc.) while handling radioactive materials and/or potentially infectious material as well as during the assay. Do not pipette reagents by mouth. Do not smoke, eat, drink or apply cosmetics during the assay. All radiological work should be done in a designated area. Radioactive materials should be stored in their original container in a designated area. A record book for logging receipt and disposal of all radioactive materials should be kept. Any radioactive spills should be taken care of immediately in accordance with established procedures. All material of human origin used for the preparation of control sera and calibrators included in this kit has been tested and found negative for HBsAg, anti-hiv1, anti- HIV2 and anti-hcv. Since no test at present can guarantee complete absence of these viruses, all samples and reagents containing biological material used for the assay must be considered potentially infectious. Avoid splashing and aerosol formation; in such cases, carefully wash with a 3% sodium hypochlorite solution. Any cleaning material used for that purpose must be treated as potentially infectious and disposed accordingly. The sodium azide used as preservative in some reagents may react with lead and copper plumbing; to prevent build-up of explosive metal azides, the reagents should be discarded by flushing the drain with large amounts of water. According to Italian decree D.L. no. 22 dated , in compliance with EEC directives (91/156/EEC, 91/689/EEC, 94/62/EEC), all waste products originating from either manual and/or automated processing are classified as hazardous special waste material (European classification code , infectious waste or potentially infectious waste). As such, they must be eliminated (by) delegating them to special enterprises (companies), qualified for waste collection and disposal. All radioactive waste originating from either manual and/or automated processing, must be eliminated delegating them to special enterprises, qualified for waste collection and disposal, according to D.Lgs.241/2000. Acquisition, storage, use and disposal of radioactive material (liquid and solid) are subjected to regulation and ordination of local authorities. Radioactivity contents to the reference date is shown on the kit external label. 6. SPECIMEN COLLECTION It is recommended to use serum. Highly lipemic or hemolyzed samples must be discarded. Keep samples at 2-8 C for 1 day; for longer periods it is advisable to freeze samples in aliquots at -20 C. Repeated freezing and thawing of samples may decrease androstenedione levels. 7. ASSAY PROCEDURE - Bring all reagents and samples to warm up at room temperature. - Mix samples by gentle agitation before use. - For all calibrators, a duplicate measure is recommended. 1- Prepare plain tubes for Total Counts, and coated tubes for Calibrators, Samples and Controls. 2- Pipette 25 µl of each Calibrator, Control and Sample into the appropriated tubes. Pipette directly to the bottom of the tubes. 3- Add 250 µl of Radioactive conjugate to every tube. Mix gently. 4- Incubate all tubes in a waterbath at 37 C for 60 minutes. 5- Aspirate the contents of each tube, except the tubes for Total Counts. 6- Add 2 ml of diluted washing solution to every tube, except tubes for Total Counts, and aspirate thoroughly or decant the contents of all tubes on absorbent paper. 7- Count the radioactivity bound to the tubes for 1 minute in a gamma counter. We suggest to control the background of the instrument before counting the assay. In order to avoid variations in the sensitivity of the system, the background must be reduced to a minimum or adjusted properly. ASSAY SCHEME Tubes Reagents Total Activity CAL CTR Samples CAL µl CTR µl ---- Samples µl CONJ I µl 250 µl 250 µl 250 µl - Mix and incubate in a water bath at 37 C for 60 minutes - Aspirate or decant and wash: 1 x 2 ml, excepted total activity tubes - Count for 1 minute 8. CALCULATION OF RESULTS The results in this package insert were calculated using loglinear curve fit. Other data reduction methods may give slightly different results. Calculate the binding capacity percentage (B 0 /T%), and the binding percentage for Calibrators, Controls and Samples (B/ B 0 %). Draw the calibration curve on a logit-log or semilog paper, using the spline fitting method, with the calibration doses on the abscissa and the respective B/B 0 % on the ordinate. M453 Rev. 1 06/2007 Pag. 6/10

7 Calculate the B/B 0 % for each sample and read the concentration by interpolation on the calibration curve to obtain androstenedione concentration present in the assayed samples, expressed in ng/ml. EXAMPLE OF CALCULATION The values reported below must be considered as an example and may not be used in place of experimental data. B. PRECISION Repeatability (Intra-assay) Serum Mean ± S.D. C.V. N % ± ± ± Description Average cpm B/B 0 Androstenedione ng/ml Total Activity (T) CAL CAL CAL CAL CAL CAL CONTROL CONTROL P P P INTERNAL QUALITY CONTROL - If the results obtained for Control 1 and/or Control 2 are not within the range specified on Q.C. sheet, the results cannot be used unless a satisfactory explanation for the discrepancy has been given. - If desirable, each laboratory can make its own pools of control samples, which should be kept frozen in aliquots. Any aliquot should not be frozen/thawed more than twice. - Acceptance criteria for the difference between the duplicate results of the samples should rely on Good Laboratory Practises. 9. REFERENCE VALUES It is recommended that each laboratory determines its own reference interval. Values reported below are only indicative. POPULATION N MEAN (ng/ml) MEAN + 3 SD (ng/ml) Males Females All Subjects (Range: ) PERFORMANCES OF THE ASSAY All performance characteristics are expressed in ng/ml. To convert to nmol/l: ng/ml x 3.45 = nmol/l A. SENSITIVITY The theoretical sensitivity, or minimum detection limit, calculated by the interpolation of the mean minus two standard deviations of 20 replicates of the 0 ng/ml Androstenedione calibrator, is 0.05 ng/ml. Reproducibility (Inter-assay) Serum Mean ± S.D. C.V. N % ± ± ± C. ACCURACY Accuracy of the method has been checked by the recovery and parallelism tests: Recovery Test Two serum samples containing different levels of endogenous androstenedione were spiked with known amounts of androstenedione and assayed. Added Expected Measured Recovery S S1 + CAL S1 + CAL S1 + CAL S1 + CAL S1 + CAL S1 + CAL S S2 + CAL S2 + CAL S2 + CAL S2 + CAL S2 + CAL S2 + CAL Parallelism Test Two serum samples were diluted with 0 ng/ml Androstenedione calibrator and assayed. Dilution Expected Measured Recovery S1 undiluted / / / / S2 undiluted / / / / M453 Rev. 1 06/2007 Pag. 7/10

8 D. SPECIFICITY The cross-reactivity of the androstenedione antiserum has been measured against various compounds. The percent cross-reactivity is expressed as the ratio of the androstenedione concentration to the concentration of the reacting compound at 50% binding of the 0 ng/ml calibrator. Compound % Cross-Reactivity Androstenedione 100 Androsterone α -Hydroxyprogesterone Cortisone Isoandrosterone Deoxycortisone Etiocholanolone α-Dihydrotestosterone Dehydroepiandrosterone (DHEA) Progesterone Corticosterone Cortisol Estrone Pregnenolone Cholesterol - DHEA-Sulfate Estradiol-17β Estriol 17 α-hydroxypregnenolone BIBLIOGRAFIA BIBLIOGRAPHY 1. Dorfmon RI, Shipley RA. Androgens. John Wiley and Sons, New York, 1956, Horton R, Tait J. Androstenedione production and interconversion rates measured in peripheral blood and studies on the possible site of its conversion to testosterone. J Endocrinol Invest, 1966, 45, Pang S, Riddick I. Hirsutism. In: Lifshitz F (ed). Pediatric Endocrinology, A Clinical Guide, second edition. Marcel Dekker, Inc., New York, 1990, Cavallo A, Corn C, Bryan GT, Meyer WJ III. The use of plasma androstenedione in monitoring therapy of patients with congenital adrenal hyperplasia. J Pediatr. 1979, 95, Bull NY Acad Med 1977, 53, Barrett-Connor E, Garland C, McPhillips JB, Khaw KT, Wingard DL. A prospective, population-based study of androstenedione, estrogens, and prostate cancer. Canc Res 1990, 50, Rittmaster RS, Thompson DL. Effects of leuprolide and dexamethasone on hair growth and hormone levels in hirsute women. J Clin Endocrinol Metab 1993, 70, Zwicker H., Rittmaster RS. Androsterone sulphate: Physiology and significance in hirsute women. J Clin Endocrinol Metab 1993, 76, Rosen M, Nouri N, Alexander I. Evaluation of a direct assay for the measurement of androstenedione. Clin Chem 1987, 33, 891 (abstract 054). 9. Yalow R, Berson S: Introduction and general considerations. In: Odell WD and Daughaday WH, eds. Principles of Competitives Protein Binding Assays. J.B. Lippincott Co., Philadelphia, 1971, M453 Rev. 1 06/2007 Pag. 8/10

9 SIMBOLI, SYMBOLS, SYMBOLES, SÍMBOLOS, SÍMBOLOS, SYMBOLE, ΣΥΜΒΟΛΑ, SYMBOLIT, SYMBOLER REF EN 980 EDMA Codice di riferimento o di ordine / Reference or order code / Référence ou numéro de commande / Referencia o número de pedido / Referência ou número da encomenda / Referenz oder Bestellnummer / κωδικός προϊόντος ή παραγγελίας / Refarans veye sipariş numarsı / Referenční nebo objednací číslo LOT Lotto / Lot / Lot / Lote / Lote / Charge / παρτίδα / Parti / šarže 100 RDATE Sufficiente per 100 test / Sufficient for 100 tests / Suffisant pour 100 déterminations / Suficiente para 100 determinaciones / Componentes para 100 testes / Genügend für 100 Tests / επαρκεί για 100 τεστ / 100 test için yeterli / Dostačující pro 100 testů Data di Riferimento / Reference date / Date de référence / Fecha de referencia / Data de refêrencia / Referenzdatum / ημερομηνία βαθμονόμησης / Referans Targhi / referenční datum RCNS Ricostituire con / reconstitute with / reconstituer avec / reconstituir con / reconstituir com / rekonstituiren mit / ανασυστάται με / ile karıştırma / rekonstituovat IVD Data di scadenza / Expiry date / Date d expiration / Fecha de caducidad / Data de vencimento / Verfallsdatum / Ηµεροµηνία λήξης / Son kullanma targhi / Datum expirace Per uso diagnostico in-vitro / For in-vitro diagnostic use / Pour diagnostic in-vitro / Para uso diagnóstico In-vitro / Aplicação do diagnóstico In-vitro / Für den Gebrauch in der IN-VITRO-DIAGNOSTIK / για in vitro διαγνωστική χρήση / In-vitro diagnostik kullanım / Pro použití in-vitro H 2 O Acqua distillata o deionizzata / Deionized or distilled water / Eau deionisée ou distillée / Agua destilada o desionizada / Água destilada ou deionizada / Deionisiertes oder Destilliertes Wasser / απιονισμένο -απεσταγμένο νερό / Deiyonize veya distile su / Deionizovaná nebo destilovaná voda Marcatura CE secondo le direttive IVD 98/79/CE / CE marking according to IVD guidelines 98/79/EC / Marquage CE conforme aux directives IVD 98/79/EC / Marcado CE según directiva de IVD 98/79/CE / Marcação- CE segundo a directriz-ivd 98/79/CE / CE- Markierung bei Erfüllung der IVD Richtlinie 98/79/EG / Σηµανση CE βάσει κοινοτικής οδηγίας IVD 98/79/EC / 98/79/EC IVD tüzüğüne göre CE işareti / CE označení dle IVD 98/79/EU Conservare a 2-8 C / Keep at 2-8 C / Conserver à 2-8 C / Conservar a 2-8 C / Conservar a 2-8 C / Lagerung bei 2-8 C / φύλαξη στους 2-8 C / 2-8 C da saklayınız / Skladovat při 2-8 C Fabbricante / Manufacturer / Fabriquant / Produzido por / Fabricante / Produkt der / κατασκευάζεται από / Tarafından üretilmiştir / výrobce Rischio biologico / Biohazard / Risque Biologique / Riesgo Biológico / Risco Biológico / Biogefährdung/ Bιολογικός κίνδυνος / Riziko tehlike biyolojik/ Biologicky nebezpečné Consultare la metodica operativa / Consult instructions for use / Consulter le mode opératoire / Consultar las instrucciones de uso / Consultar as instruções de uso / Schauen Sie die Arbeitsanleitung an / συμβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης / kullanımda başvurulacak bilgiler / Sledujte návod k použití M453 Rev. 1 06/2007 Pag. 9/10

10 "Le Istruzioni per l'uso tradotte nelle altre lingue di interesse sono consultabili sul sito Internet all'indirizzo The instructions for use available in the other languages of interest can be viewed on our website Οι οδηγίες χρήσης μεταφρασμένες στις άλλες ενδιαφερόμενες γλώσσες όπως επίσης στην ηλεκτρονική διεύθυνση In den anderen Sprachen von Interesse ist die Bedienungsanleitung kann auf der Website unter der Adresse konsultiertwerden. "Le mode d emploi dans les autres langues intéressées est consultable sur le site Internet à l'adresse Las instrucciones de uso traducidas en los otros idiomas de interés se pueden consultar en nuestro sitio Internet "As instruções de uso traduzidas nos outros idiomas de interesse podem ser consultadas no nosso site Internet, ao endereço RADIM S.p.A. - Via del Mare, Pomezia (Roma) - Italia Tel.: Fax: National Order Entry: Export Department: Customer Care: info@radim.it -