RADIOIMMUNOLOGIA COMPONENTI REAZIONI ESECUZIONE DOSAGGI R.I.A.

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1 RADIOIMMUNOLOGIA COMPONENTI REAZIONI ESECUZIONE DOSAGGI R.I.A.

2 Radioimmunologia Inserita nel contesto della Medicina Nucleare

3 La storia Il RIA nasce dalla combinazione di tecniche mutuate dall immunochimica e dalla radio chimica (R.S.Yalow e S.A. Berson 1959): è un metodo di misura della concentrazione

4 Requisiti essenziali delle Metodiche Radioimmunologiche Sensibilità capacità di rilevare la sostanza di interesse anche a concentrazioni molto basse Specificità capacità di distinguere le sostanze di interesse da altre a struttura simile (eventualmente presenti anche a livelli più elevati) nei fluidi biologici

5 Operatori in Radioimmunologia Equipe formata da Tecnico sanitario di radiologia medica Infermiere Medico Nucleare

6 Logistica in Radioimmunologia Accettazione Ambulatorio prelievi (dentro la provetta un paziente) Laboratorio radioimmunologico

7 Struttura ed accessori di un laboratorio RIA o Pareti o Pavimenti o Banconi o Vetreria o Strumentazione

8 Frigorifero e Kit

9 Banconi

10 La Strumentazione

11 ELEMENTI CHE COMPONGONO KIT PER DOSAGGIO RADIOIMMUNOLOGICO STANDARS ANTIGENE (caldo, marcato o tracciante-freddo ATISIERO (liquido, solido) SEPARATORE TAMPONE PROVETTE O BIGLIE SENSIBILIZZATE

12 Sostanze di reazione Antigene (Ag) sostanza presa in esame (Analita) e sostanza di riferimento (Standard) Antigene (Ag*) introduzione di un isotopo nella sua struttura molecolare (R.I.A.) Anticorpo (Ab) proteina sierica, appartenente alle immunoglob.,reagisce con Ag Anticorpo (Ab*) Introduzione di un isotopo nella sua struttura molecolare (IRMA)

13 Proprietà dell antisiero Titolo Indica la diluizione finale dell antisiero, che deve essere tale da legare in assenza di Ag inattivo il 50% dell Ag*. Affinità Avidità con cui l Ag lega l Ab

14 Proprietà dell antigene marcato Purezza radiochimica è la percentuale di attività totale dovuta al radionuclide presente nella forma chimica desiderata. Attività specifica è il numero di atomi radioattivi introdotti nella molecola. Immunoreattività è la capacità di interazione anticorpale.

15 ANTIGENE(Ag*)ANTICORPO(Ab*) L Antigene o l Anticorpo possono essere marcati con diversi isotopi radioattivi, i più usati sono: Isotopo T ½ Emiss. KeV 125 J 60 gg γ 28,35 3 H 12,26 anni β Co 267 gg γ 122

16 TERMINOLOGIA ANTIGENE sostanza capace di indurre la produzione di anticorpi ANTISIERO miscela di anticorpi in grado di legare specificatamente la molecola da da dosare TRACCIANTE di solito Ag reso radioattivo mediante l introduzione di un radioisotopo nella struttura molecolare INCUBAZIONE tempo necessario affinchè avvenga la reazione COMPETIZIONE l Ag non marcato e l Ag* competono per i siti leganti di un Ab specifico ( RIA )

17 TERMINOLOGIA IMMUNOCOMPLESSO complesso antigene anticorpo ( legato B bound ) SEPARAZIONE si separa il libero ( F ) dal legato ( B ) NSB o Bianco, quota di legame aspecifico CONTEGGIO contatore Y multipozzetto a scintillazione solida, contatore ß a scintillazione liquida

18 Fattori che concorrono alla buona riuscita dell esame Accettazione Modalità di prelievo Separazione Stoccaggio Scongelamento Stoccaggio Kits Giusta ricostituzione dei reagenti ed esecuzione dell esame esame

19 Tecnica di dosaggio A- Ricostituzione dei reagenti B- Addizione dei reattivi C- Incubazione 1) temperatura 2) tempo D- Separazione dell Ag libero (free) dal complesso Ag/ Ab (Bound) E- Conteggio (scintill. solida, scintill. liquida) F- Calcolo dei risultati

20 Componenti dosaggi R.I.A. Antigene (Ag) freddo Antigene (Ag*) caldo, marcato, tracciante Antisiero (Ab) specifico (liquido o solido) Precipitante o Separatore

21 Reazione R.I.A. Dosaggio per competizione Analita da dosare Ag Ag Ab Ag* Ab Ag* (Ag Ab)* Bound NB: Inversamente proporzionale Free

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23 Cpm (Bound) DOSE Risposta

24 Componenti dosaggi IRMA Antigene (Ag) freddo Anticorpo (Ab) freddo Anticorpo (Ab*) marcato. Tracciante Provette sensibilizzate, biglie sensibilizzate

25 Reazione IRMA (Ab*) Metodo Sandwich Ag è in grado di legarsi con due molecole anticorpali Fase 1 Immuno estrazione in fase solida Fase 2 Ag Ab* Ab incubaz Rimozione del Sovranatante Ab Ag incubaz Rimozione del Sovranatante Bound direttamente proporzionale alla concentrazione dell analita

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27 Diversificazione dei rifiuti Rifiuti radioattivi : Liquidi o solidi Rifiuti biologici Rifiuti cartacei