TPHA SYPHILIS TEST REF KH1. Italiano p. 3 English p. 10. M67 Rev /2007

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1 TPHA SYPHILIS TEST REF KH1 100 Italiano p. 3 English p. 10 M67 Rev /2007

2 REAGENTI DEL KIT - KIT REAGENTS Reag. Quant. Stato fisico, Physical state DIL 1 x 20 ml Pronto per l'uso, Ready to use NEG 1 x 1 ml Pronto per l'uso, Ready to use POS 1 x 1 ml Pronto per l'uso, Ready to use TEST CELL 1 x 8.5 ml Pronto per l'uso, Ready to use CTR CELL 1 x 8.5 ml Pronto per l'uso, Ready to use "Le Istruzioni per l'uso tradotte nelle altre lingue di interesse sono consultabili sul sito Internet all'indirizzo The instructions for use available in the other languages of interest can be viewed on our website Οι οδηγίες χρήσης μεταφρασμένες στις άλλες ενδιαφερόμενες γλώσσες όπως επίσης στην ηλεκτρονική διεύθυνση In den anderen Sprachen von Interesse ist die Bedienungsanleitung kann auf der Website unter der Adresse konsultiertwerden. "Le mode d emploi dans les autres langues intéressées est consultable sur le site Internet à l'adresse Las instrucciones de uso traducidas en los otros idiomas de interés se pueden consultar en nuestro sitio Internet "As instruções de uso traduzidas nos outros idiomas de interesse podem ser consultadas no nosso site Internet, ao endereço M67 Rev /2007 Pag. 2/20

3 TEST DI EMOAGGLUTINAZIONE INDIRETTA PER LA DETERMINAZIONE QUALITATIVA E/O QUANTITATIVA DEGLI ANTICORPI ANTI-TREPONEMA PALLIDUM NEL SIERO O PLASMA UMANO PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO 1. APPLICAZIONI CLINICHE La sifilide è una malattia venerea cronica, contagiosa e spesso congenita, dovuta al Treponema pallidum. Questo organismo appartiene ad un gruppo di batteri gram-negativi, denominati Spirochete, che sono così definiti per la loro particolare struttura cellulare. L'infezione può essere contratta mediante contatto con le superfici sierose originatesi da lesioni del tessuto epiteliale della pelle e delle mucose. Se non trattata, la malattia può causare delle alterazioni irreversibili nei sistemi cardiovascolare e nervoso. La sifilide è una malattia ad elevata incidenza, malgrado i progressi della moderna terapia antibiotica. 2. PRINCIPIO DEL METODO Il test TPHA SYPHILIS è un test di emoagglutinazione indiretta per l identificazione e la determinazione degli anticorpi specifici anti-treponema pallidum. Le emazie ottenute da volatili sono sensibilizzate con antigeni del Treponema pallidum (ceppo di Nichol). Messe a reagire con un campione umano, in presenza di anticorpi specifici anti-treponema, producono una reazione di agglutinazione caratteristica, rilevabile nei pozzetti ad U delle piastre per microtitolazione. Anticorpi diretti contro altri treponemi non patogeni sono rimossi da un estratto di treponemi di Reiter presente nella sospensione cellulare, riducendo notevolmente la presenza di falsi positivi. La presenza di altri anticorpi eterofili aspecifici può essere messa in evidenza e rimossa attraverso le emazie di controllo non sensibilizzate. 3. REAGENTI CONTENUTI NEL KIT I reattivi sono sufficienti per 100 test (metodo qualitativo) o per 14 test (metodo quantitativo). La data di scadenza di ciascun reagente è indicata sulla rispettiva etichetta. Prima dell uso sia le emazie sensibilizzate che le emazie di controllo devono essere accuratamente risospese. I reagenti devono essere conservati a 2-8 C in posizione verticale (vedi Nota 1) e sono stabili fino alla data di scadenza. Non mescolare reagenti di lotti diversi. M67 Rev /2007 Pag. 3/20

4 DIL NEG POS Diluente Campioni (tappo bianco): 1 flacone (20 ml) di tampone fosfato ph 7.2. Pronto per l'uso. Conservante: NaN 3 (<0.1%). Controllo Negativo (tappo blu): 1 flacone (1 ml) di siero di controllo, pre-diluito 1/20, non reattivo con le emazie sensibilizzate. Pronto per l'uso. Conservante: NaN 3 (<0.1%). Controllo Positivo (tappo nero): 1 flacone (1 ml) di siero di controllo, pre-diluito 1/20, positivo alla reazione con le emazie sensibilizzate. Il titolo di questo controllo è 1:2560 con una variazione di più o meno una doppia diluizione. Pronto per l'uso. TEST CELL Emazie Sensibilizzate (tappo verde): 1 flacone (8.5 ml) di soluzione stabilizzata contenente emazie di volatile in sospensione sensibilizzate con antigene di Treponema pallidum (Ceppo di Nichol). Pronte per l'uso. Agitare bene prima dell'uso. Conservante: NaN 3 (<0.1%). CTR CELL Emazie di Controllo (tappo bianco): 1 flacone (8.5 ml) di soluzione stabilizzata contenente emazie di volatile in sospensione non sensibilizzate. Pronte per l'uso. Agitare bene prima dell'uso. Conservante: NaN 3 (<0.1%). 4. MATERIALE RICHIESTO MA NON FORNITO Micropipette a punte intercambiabili o microdiluitore con capacità variabile. Piastre rigide per microtitolazione con fondo ad U. NOTE 1. Le emazie sensibilizzate e le emazie di controllo si depositano durante la conservazione; è importante che siano sempre coperte dal tampone per evitarne l essicazione. 2. La seguente procedura per l assorbimento di agglutinine aspecifiche da parte di un campione deve essere eseguita se i campioni di siero o plasma mostrano agglutinazione con le emazie di controllo: a) Prendere un'aliquota di 100 µl del campione in esame ed aggiungere 400 µl della sospensione di emazie di controllo. b) Mescolare bene e lasciare incubare per 1 ora a temperatura ambiente. c) Centrifugare le cellule per 5 minuti a 1000 rpm. d) Testare il supernatante dopo diluizione 1/4 con il diluente campioni (diluizione finale 1/20). 5. AVVERTENZE E PRECAUZIONI M67 Rev /2007 Pag. 4/20

5 Per ottenere risultati corretti e riproducibili è necessario osservare le seguenti norme: Non mescolare reagenti di lotti differenti. Non usare i reagenti dopo la data di scadenza. Usare vetreria perfettamente pulita ed esente da contaminazioni di ioni metallici o sostanze ossidanti. Usare acqua distillata o deionizzata, conservata in recipienti perfettamente puliti. Evitare accuratamente contaminazioni tra campioni; a tal fine è consigliabile usare pipette con puntali monouso per ogni campione e per ogni reattivo. Non modificare in alcun modo il Procedimento Operativo di esecuzione del test. Eventuale non rispetto di: sequenza e quantità nell aggiunta dei reattivi tempi e temperatura di incubazione può dare luogo a risultati clinici errati. In caso di procedura manuale è importante l utilizzo di pipette calibrate e l acquisizione di un adeguata manualità tecnica. In particolare è essenziale una buona precisione nella preparazione e dispensazione dei reattivi. E necessario un adeguato piano di manutenzione (pulizia e calibrazione) di tale strumentazione. Assicurarsi che la strumentazione utilizzata per la conservazione dei campioni e/o del dispositivo sia perfettamente funzionante. La conservazione a temperature diverse dall atteso può dare luogo a denaturazione biologica dei materiali (reattivi e/o campioni). E necessario un adeguato piano di manutenzione di tale strumentazione e un controllo periodico della temperatura registrata. Utilizzare un adeguato metodo per la corretta identificazione dei campioni al fine di evitare sia la perdita di specificità del dispositivo che risultati analitici errati. Per evitare contaminazioni personali ed ambientali è necessario osservare le seguenti norme di sicurezza: Utilizzare guanti monouso durante la manipolazione di materiale potenzialmente infetto e durante il dosaggio. Non pipettare i reagenti con la bocca. Non fumare, mangiare, bere o applicare cosmetici durante l'esecuzione del dosaggio. I materiali di origine umana utilizzati nella preparazione del presente kit sono stati saggiati per la presenza di HBsAg, anti-hiv e anti-hcv e sono risultati ripetutamente negativi. Comunque nessun test attualmente disponibile garantisce l'assenza degli agenti virali responsabili della sindrome da immunodeficienza acquisita, dell'epatite B ed epatite C. Tutti i reagenti e tutti i campioni di siero umano devono essere considerati potenzialmente infettivi. M67 Rev /2007 Pag. 5/20

6 Evitare la produzione di schizzi e la formazione di aerosol; in tal caso, ripulire accuratamente con ipoclorito di sodio ad una concentrazione del 3%. Il mezzo adoperato per la pulizia deve essere trattato come residuo potenzialmente infetto ed eliminato secondo le opportune modalità. La sodio azide contenuta come conservante in alcuni reagenti può reagire con il piombo ed il rame delle tubature formando azidi di metallo altamente esplosive. Per evitare la formazione e l'accumulo di tali composti far scorrere abbondante acqua sui reagenti eliminati. Ai sensi del D.L. italiano n. 22 del , che fa riferimento alle direttive CEE (91/156/CEE, 91/689/CEE, 94/62/CEE), tutti i rifiuti provenienti da lavorazioni manuali e/o in automatico sono classificati rifiuti speciali pericolosi con codice di classificazione CER ; devono quindi essere eliminati affidandoli a ditte autorizzate al ritiro ed allo smaltimento. 6. RACCOLTA E CONSERVAZIONE DEI CAMPIONI Il dosaggio può essere effettuato su siero o plasma (EDTA) umano; i campioni contaminati o emolizzati devono essere scartati. I campioni di siero o plasma- EDTA possono essere conservati a 2-8 C per 24 ore, oppure congelati a -20 C per 4 settimane. Diluire i campioni 1/20 con il diluente campioni (es.: 10 µl di campione µl di diluente in un singolo pozzetto di microtitolazione) e dosarli nella stessa giornata. 7. PROCEDIMENTO OPERATIVO DOSAGGIO QUALITATIVO Attendere che i reagenti ed i campioni raggiungano la temperatura ambiente. Agitare i campioni per inversione prima dell'uso. 1 - Preparare i pozzetti necessari al dosaggio, prevedendo 2 pozzetti per ciascun campione pre-diluito e controllo (vedi fig. 1) N.B.: i controlli sono forniti pre-diluiti. 2 - Dispensare nei pozzetti adiacenti (1 e 2) 25 µl di campioni pre-diluiti e di controlli. 3 - Dispensare 75 µl di emazie di controllo nel pozzetto Dispensare 75 µl di emazie sensibilizzate nel pozzetto Agitare la piastra in modo che il contenuto di ogni pozzetto sia miscelato perfettamente. 6 - Incubare per minuti a temperatura ambiente, su una superficie piana, evitando vibrazioni ed esposizione alla luce diretta. L'incubazione può essere prolungata fino a ore a temperatura ambiente. 7 - Leggere i risultati. 8. INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI (Test qualitativo) I risultati sono letti visivamente confrontandoli con i controlli positivi e negativi. M67 Rev /2007 Pag. 6/20

7 Le letture sono valutate con un punteggio secondo il livello di emoagglutinazione e vengono espresse con i valori: 4+, 3+, 2+, 1+, +/- o negativo, come riportato nella tabella sottostante. La diagnosi finale dovrebbe essere basata sulla correlazione tra i risultati del test e la storia clinica del paziente. Livello di emoagglutinazione Lettura Risultato Tappeto uniforme di emazie che copre l intero fondo del pozzetto e a 4+ Positivo volte anche il bordo. Tappeto uniforme di emazie che copre parzialmente il fondo del 3+ Positivo pozzetto. Tappeto più ridotto circondato da un anello di cellule. 2+ Positivo Tappeto più ridotto circondato da un anello più piccolo e distinto di 1+ Positivo cellule. Anello di cellule molto ben definito con un buco nella parte centrale. +/- Bottone definito di cellule nonagglutinate con, a volte, un piccolo buco al centro. Dubbio: testare di nuovo - Negativo Il controllo negativo deve mostrare un pattern non-agglutinato sia nel pozzetto 1 (emazie di controllo) che nel pozzetto 2 (emazie sensibilizzate). Il controllo positivo deve mostrare agglutinazione nel pozzetto 2 (emazie sensibilizzate) ma non nel pozzetto 1 (emazie di controllo). Le emazie di controllo nel pozzetto 1 dovrebbero mostrare un sedimento di cellule non agglutinate indicanti che il campione è privo di agglutinine aspecifiche. In caso di reazione positiva nel pozzetto di controllo il risultato è da scartare ed il campione in esame deve essere invalidato e trattato con le emazie di controllo (vedere "Limiti del dosaggio" e Nota 2). I campioni positivi dovrebbero essere ulteriormente esaminati con un test quantitativo. 9. PROCEDIMENTO OPERATIVO M67 Rev /2007 Pag. 7/20

8 DOSAGGIO QUANTITATIVO Attendere che i reagenti ed i campioni raggiungano la temperatura ambiente. Agitare i campioni per inversione prima dell'uso. Considerando le pre-diluizioni iniziali 1/20 dei campioni, effettuare delle diluizioni seriali in rapporto 1/2 con il diluente campioni (diluizione finale 1/80) e dosarli come descritto nella Fig Preparare i pozzetti necessari al dosaggio, prevedendo 7 pozzetti per ciascun campione pre-diluito e per ogni controllo. N.B.: i controlli sono forniti pre-diluiti. 2 - Dispensare 25 µl di diluente campioni nei pozzetti 3, 4, 5, 6 e 7, appartenenti alla stessa fila. 3 - Dispensare 25 µl di ciascun campione pre-diluito o controllo nei pozzetti 1, 2 e 3 della stessa fila indicata al punto Dal pozzetto 3 prelevare 25 µl e trasferirli nel pozzetto 4, poi nel 5 e così via fino ad arrivare al pozzetto 7; scartare il volume residuo (25 µl) dell'ultima diluizione. 5 - Aggiungere 75 µl di emazie di controllo nel pozzetto 1 e 75 µl di emazie sensibilizzate nel pozzetto 2, 3, 4, 5, 6 e Procedere nel dosaggio come indicato dal punto 5 al punto 7 del procedimento qualitativo. 10. INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI (Test quantitativo) Un campione che mostra agglutinazione nei pozzetti di dosaggio e nessuna reazione nel pozzetto di controllo deve essere considerato POSITIVO. Il titolo è definito dall'ultima diluizione dello stesso campione che mostri una reazione positiva (es.: diluizione finale pozzetto 3 = 1/160; pozzetto 7 = 1/2560). 11. LIMITI DEL DOSAGGIO 1 - I campioni che risultano ripetutamente positivi devono essere dosati anche con un test di conferma, per completare il profilo diagnostico del campione in esame. Risultati falsamente positivi sono stati riportati in pazienti affetti da malattia di Hansen, mononucleosi infettiva ed alcune patologie autoimmuni. La diagnosi finale deve essere supportata da ulteriori valutazioni cliniche e diagnostiche. 2 - Gli anticorpi anti-sifilide persistono anche dopo un trattamento efficace; pertanto un risultato positivo al test TPHA può indicare un infezione pregressa o corrente. M67 Rev /2007 Pag. 8/20

9 3 - L esecuzione del test quantitativo su campioni ripetutamente prelevati lungo un periodo di tempo può essere usata per evidenziare un infezione recente, caratterizzata da un incremento del titolo anticorpale di almeno quattro volte. 4 - Come test di conferma può essere utilizzato il test FTA-Abs poiché questo consente una differenziazione tra anticorpi IgG ed IgM precoci. 12. LEGENDA SIMBOLI: vedi pag. 16 M67 Rev /2007 Pag. 9/20

10 INDIRECT EMOAGGLUTINATION TEST FOR THE QUALITATIVE AND/OR QUANTITATIVE DETERMINATION OF ANTI-TREPONEMA PALLIDUM ANTIBODIES IN HUMAN SERUM OR PLASMA FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE ONLY 1. CLINICAL APPLICATIONS Syphilis is a chronic, contagious and often congenital venereal disease caused by Treponema pallidum. This organism belongs to a gram-negative group of bacteria called Spirochetes, which are defined by their unique cellular structure. Infection results from contact with moist surfaces, originating in lesions of the epithelial tissue of the skin and mucous membranes. If untreated the disease may result in irreversible changes in the cardiovascular and nervous system. Syphilis remains a disease of high incidence, despite advances in modern antibiotic therapy. 2. PRINCIPLE OF THE ASSAY The TPHA Syphilis test is an indirect haemagglutination test for the detection and titration of specific antibodies against Treponema pallidum. Avian erythrocytes are sensitised with antigens of Nichol s strain of Treponema pallidum. In the presence of syphilitic antibodies, these test cells aggregate to form characteristic patterns on the surface of the microplate wells. Antibodies directed against other nonpathogenic treponemes are absorbed by an extract of Reiter s treponemes present in the cell suspensions, thus greatly reducing false positives. Other nonspecific reactions can be detected and eliminated with the non-sensitised control cells. 3. REAGENTS PROVIDED WITH THE KIT The reagents are sufficient for 100 determinations (qualitative test) or for 14 determinations (quantitative test). The expiry date of each reagent is shown on the vial label. The test and control cells should be thoroughly resuspended prior to use. The reagents should be stored at 2-8 C in an upright position (Note 1) and are stable until the expiry date. Reagents should not be interchanged with those of other batches. M67 Rev /2007 Pag. 10/20

11 DIL NEG POS Sample Diluent (white cap): 1 vial (20 ml) of phosphatebuffered saline, ph 7.2. Ready to use. Preservative: NaN 3 (<0.1%). Negative Control (blue cap): 1 vial (1 ml) of control serum, prediluted 1/20, non-reactive to the sensitised cells. Ready to use. Preservative: NaN 3 (<0.1%). Positive Control (black cap): 1 vial (1 ml) of control serum, pre-diluted 1/20, reactive to the sensitised cells. The titre of this control is 1:2560 and the result may vary plus or minus one doubling dilution. Ready to use. TEST CELL Test Cells (green cap): 1 vial (8.5 ml) of stabilised suspension of avian cells sensitised with Nichol s Treponema pallidum antigen. Ready to use. Mix well before use. Preservative: NaN 3 (<0.1%). CTR CELL Control Cells (white cap): 1 vial (8.5 ml) of non-sensitised suspension of stabilised avian cells. Mix well before use. Preservative: NaN 3 (<0.1%). 4. MATERIAL REQUIRED BUT NOT PROVIDED - Micropipettes with interchangeable tips or microdiluter with variable capacity. - U-well microtitration plates. NOTES 1. The test and control cells settle out when stored. It is important that the settled cells are covered by buffer to prevent them from drying out. 2. The following procedure for absorption of non-specific agglutinins from a sample should be carried out if sera or plasma samples show agglutination with the control cells: a) Take a 100 μl aliquot of sample and add 400 μl of the control cells. b) Mix well and allow to stand at room temperature for 1 hour. c) Centrifuge the cells for 5 minutes at 1000 rpm. d) Test a 1/4 dilution of the supernatant in diluent (final dilution 1/20). M67 Rev /2007 Pag. 11/20

12 5. WARNINGS AND PRECAUTIONS In order to obtain correct and reproducible results, the following rules must be observed: Do not mix specific reagents of different lots, if not otherwise indicated. Do not use reagents beyond their expiry date. Use thoroughly clean glassware, free from metal ion contamination or oxidizing substances. Use distilled or deionized water, stored in perfectly clean containers. Carefully avoid any contamination among samples; for this purpose, disposable tips should be used for each sample and reagent. Do not modify the "Assay Procedure" in any way. Altering sequence and volume of reagents added exact incubation times and temperature may cause incorrect clinical results. In case of manual procedure, it is important to use calibrated pipettes and have appropriate technical manuals. It s important to prepare and dispense the reagents accurately. Ensure that all the equipment used is in perfect working order, has been correctly calibrated and is regularly maintained. Ensure that all the equipment used for samples storage and/or the system is in perfect working order. The storage at different suggested temperature may cause biological material denaturation (samples and/or reagents). Ensure that the equipment used is regularly maintained and periodically check the recorded temperature. Utilise a suitable method for the correct identification of patient samples. Incorrect identification may cause a specificity losses of the system and wrong clinical results. In order to avoid personal and environmental contamination, the following precautions must be observed: Use disposable gloves while handling potentially infectious material and while performing the assay. Do not pipette reagents by mouth. Do not smoke, eat, drink or apply cosmetics during the assay. All material of human origin used for the preparation of this kit tested negative for HBsAg, anti-hiv and anti-hcv. Since no test at present can guarantee complete absence of these viruses, all samples and reagents containing biological material used for the assay must be considered potentially infectious. Avoid splashing and aerosol formation; in such cases, carefully wash with a 3% sodium hypochlorite solution. Any such cleaning material must be treated as potentially infectious and disposed of accordingly. Some reagents contain sodium azide as preservative; to prevent build-up of explosive metal azides in lead and copper plumbing, reagents should be discarded by flushing the drain with large amounts of water. M67 Rev /2007 Pag. 12/20

13 According to Italian decree D.L. no. 22 dated , in compliance with EEC directives (91/156/EEC, 91/689/EEC, 94/62/EEC), all waste products originating from either manual and/or automated processing are classified as hazardous special waste material (European classification code ). As such, they must be eliminated by delegating to special enterprises, qualified for waste collection and disposal. 6. SPECIMEN COLLECTION AND STORAGE The assay must be performed in human serum or plasma (EDTA) samples; haemolised or contaminated samples should be avoided. Fresh serum or EDTA plasma samples may be stored for 24 hours at +2-8 C or 4 weeks at -20 C. Dilute samples 1/20 with Sample Diluent and use on the same day. This should be performed by mixing 10 μl of sample with 190 μl of Sample Diluent in a single microtitre well. 7. ASSAY PROCEDURE QUALITATIVE TEST Bring the test reagents and samples to room temperature. Mix samples by inversion before use. 1. Prepare the wells needed for the assay, using 2 wells for each pre-diluted sample and control (see Fig.1). Note: controls are provided already pre-diluted. 2. Dispense 25 μl of pre-diluted samples and controls into adjacent wells (1 and 2) of a microtitration plate. 3. Dispense 75 μl of control cells into the well Dispense 75 μl of test cells into the well Shake the plate to ensure the contents of each well are thoroughly mixed. 6. Incubate for minutes at room temperature, on a flat surface away from vibration and direct sunlight. The incubation can be prolonged overnight at room temperature. 7. Read the results. 8. INTERPRETATION OF RESULTS (Qualitative test) Results are read visually by comparison with positive and negative control sera. Readings are scored by the degree of haemagglutination and reported as 4+, 3+, 2+, 1+, +/- or negative, as shown in the table below. The final diagnosis should be based on a correlation of the test results with the patient s clinical history. M67 Rev /2007 Pag. 13/20

14 Degree of haemagglutination Reading Report Uniform mat of cells covering entire base of well sometimes with folded 4+ Reactive edges. Uniform mat of cells partially covering base of well. 3+ Reactive Smaller mat surrounded by a ring of cells. 2+ Reactive Smaller mat surrounded by a smaller more distinct ring of cells. 1+ Reactive Well defined dense ring with a hole in the centre. +/- Definite button of non-agglutinated cells sometimes with a small hole in the centre. Negative Indeterminate: retest. Non-reactive The negative control must show a non-agglutinated pattern with both control (well 1) and test cells (well 2). The positive control must show agglutination with test cells (well 2), but not with control cells (well 1). The control cells (well 1) should reveal a non-agglutinated pattern of cells indicating the absence of non-specific agglutinins in the sample. In case of positive reaction in the control well, the result should be excluded and the sample treated with the control cells (see Limitation of the test and Note 2). Positive samples should be retested by the quantitative test. 9. ASSAY PROCEDURE QUANTITATIVE TEST Bring the test reagents and samples to room temperature. Mix samples by inversion before use. Starting with the 1/20 dilution make serial twofold dilutions in Sample Diluent (final dilution 1/80) and test each one as described in Fig Prepare the wells needed for the assay, using 7 wells for each pre-diluted sample and control (see Fig.1). Note: controls are provided already pre-diluted. 2. Dispense 25 μl of Sample Diluent into the adjacent wells 3, 4, 5, 6 and Dispense 25 μl of each pre-diluted sample or control into the wells 1, 2 and 3. M67 Rev /2007 Pag. 14/20

15 4. Take 25 μl of each pre-diluted sample or control from the well 3 and transfer them into the well 4, then into the well 5 and so on, up to the well 7; discard the remaining volume (25 μl) of the last dilution. 5. Add 75 μl of the control cells into the well 1 and 75 μl of the test cells into the wells 2, 3, 4, 5, 6 and Carry on with the assay as described by steps 5-7 in the Qualitative test". 10. INTERPRETATION OF RESULTS (Quantitative test) A sample showing haemagglutination in the test wells should be reported as a POSITIVE result, provided that no haemagglutination takes place in the control well. The titre is defined as the final dilution which shows a positive result (ex.: final dilution well 3 = 1/160; well 7 = 1/2560). 11. LIMITATIONS OF THE TEST 1. Samples retested and found to be positive should be also assayed with a confirmatory test, in order to complete the diagnostic profile of the tested sample. False positive results have been known to occur with patients suffering from leprosy, infectious mononucleosis and some autoimmune diseases. Final diagnosis should be sustained by further diagnostic and clinical evaluation. 2. Syphilis antibodies persist after a successful course of treatment. Therefore a positive result with the TPHA test may indicate a past or current infection. 3. Performing the quantitative test on samples taken over a period of time can be used to indicate a fresh infection, which is characterised by at least a four-fold increase in antibody titre. 4. For confirmation the FTA-Abs test should be used, since it allows a differentiation between IgG and the early IgM antibodies. 12. SYMBOLS LEGEND: see p. 16 M67 Rev /2007 Pag. 15/20

16 SIMBOLI, SYMBOLS, SYMBOLES, SÍMBOLOS, SÍMBOLOS, SYMBOLE, ΣΥΜΒΟΛΑ, SYMBOLIT, SYMBOLER EN 980 EDMA REF LOT Codice di riferimento o di ordine / Reference or order code / Référence ou numéro de commande / Referencia o número de pedido / Referência ou número da encomenda / Referenz oder Bestellnummer / κωδικός προϊόντος ή παραγγελίας / Refarans veye sipariş numarsı / Referenční nebo objednací číslo Lotto / Lot / Lot / Lote / Lote / Charge / παρτίδα / Parti / šarže Data di scadenza / Expiry date / Date d expiration / Fecha de caducidad / Data de vencimento/ Verfallsdatum / Ηµεροµηνία λήξης / Son kullanma targhi / Datum expirace IVD Per uso diagnostico in-vitro / For in-vitro diagnostic use / Pour diagnostic invitro / Para uso diagnóstico In-vitro / Aplicação do diagnóstico In-vitro / Für den Gebrauch in der IN-VITRO-DIAGNOSTIK / για in vitro διαγνωστική χρήση / In vitro diagnostik kullanım / Pro použití in-vitro Marcatura CE secondo le direttive IVD 98/79/CE / CE marking according to IVD guidelines 98/79/EC / Marquage CE conforme aux directives IVD 98/79/EC / Marcado CE según directiva de IVD 98/79/CE / Marcação-CE segundo a directriz-ivd 98/79/CE / CE-Markierung bei Erfüllung der IVD Richtlinie 98/79/EG / Σηµανση CE βάσει κοινοτικής οδηγίας IVD 98/79/EC / 98/79/EC IVD tüzüğüne göre CE işareti / CE označení dle IVD 98/79/EU Conservare a 2-8 C / Keep at 2-8 C / Conserver à 2-8 C / Conservar a 2-8 C / conservar a 2-8 C / Lagerung bei 2-8 C/ φύλαξη στους 2-8 C/ 2-8 C da saklayınız / Skladovat při 2-8 C Fabbricante / Manufacturer / Fabriquant / Produzido por / Fabricante / Produkt der / κατασκευάζεται από / Tarafından üretilmiştir / Výrobce Rischio biologico / Biohazard / Risque Biologique / Riesgo Biológico / Risco Biológico / Biogefährdung/ Bιολογικός κίνδυνος / Riziko tehlike biyolojik/ Biologicky nebezpečné Consultare la metodica operativa / Consult instructions for use / Consulter le mode opératoire / Consultar las instrucciones de uso / Consultar as instruções de uso / Schauen Sie die Arbeitsanleitung an / συμβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης / Kullanımda başvurulacak bilgiler / Sledujte návod k použití M67 Rev /2007 Pag. 16/20

17 100 Sufficiente per 100 test / Sufficient for 100 tests / Suffisant pour 100 déterminations / Suficiente para 100 determinaciones / Componentes para 100 testes / Genügend für 100 Tests / επαρκεί για 100 τεστ / 100 test için yeterli / Dostačující pro 100 testů RDATE Data di Riferimento / Reference date / Date de référence / Fecha de referencia / Data de refêrencia/ Referenzdatum / ημερομηνία βαθμονόμησης / Referans Targhi / Referenční datum RCNS Ricostituire con / Reconstitute with / Reconstituer avec / Reconstituir con / Reconstituir com / Rekonstituiren mit / ανασυστάται με / Ile karıştırma / Rekonstituovat H 2 O Acqua distillata o deionizzata / Deionized or distilled water / Eau deionisée ou distillée / Agua destilada o desionizada / Água destilada ou deionizada / Deionisiertes oder Destilliertes Wasser / απιονισμένο -απεσταγμένο νερό / Deiyonize veya distile su / Deionizovaná nebo destilovaná voda M67 Rev /2007 Pag. 17/20

18 BIBLIOGRAFIA REFERENCES 1 - Lesinski J., Krach J., & Kadziewicz J.: Brit. J. vener. Dis. 1974, 50: Rathlev T. : Brit. J. vener. Dis. 1967, 43: Sequeira P.J.L., & Eldridge A.E.: Brit. J. vener. Dis. 1973, 49: Tomizawa T., Kasamatsu S., Yamaya S.: Jap. J. Med. Sci. Biol. 1969; 22: M67 Rev /2007 Pag. 18/20

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