Allerfood (90) Screen IgG Elisa
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1 Allerfood (90) Screen IgG Elisa REF KAF Determinazioni Dosaggio immunoenzimatico per la determinazione semi-quantitativa degli anticorpi IgG verso 90 alimenti mediterranei nel siero umano Per uso diagnostico In Vitro può includere nausea, diarrea e dolori addominali. Le manifestazioni cliniche di un intolleranza alimentare comprendono anche i classici sintomi delle allergie: anafilassi, rinite allergica, dermatite atopica ed orticaria. Sono ancora oggetto di discussione gli effetti esercitati da tale patologia su condizioni quali emicranie, cefalee, sindrome da affaticamento e stress. Si sottolinea che i sintomi da intolleranza alimentare, soprattutto di natura gastrointestinale, possono essere simulati da svariate condizioni di natura diversa. 1. USO PREVISTO Il test Allerfood (90) Screen IgG Elisa è finalizzato alla determinazione della quantità relativa di anticorpi IgG diretti verso gli alimenti nel siero umano. I valori ottenuti devono essere sempre correlati ad una sintomatologia clinica dal momento che, di per sé, l innalzamento di un dato anticorpo legato ad un alimento non implica necessariamente una patologia. Questo kit non fornisce informazioni in merito alle allergie IgE-mediate. 2. APPLICAZIONI CLINICHE Il ruolo svolto da alimenti ed additivi come fattori responsabili di intolleranze o ipersensibilità patologiche ha provocato notevole interesse negli ultimi decenni. Gli alimenti maggiormente coinvolti nelle intolleranze sono: latte vaccino, uova, granoturco, farina di frumento, cacao, frutta secca, soia, molluschi e crostacei. Circa lo 0,5% dei bambini manifesta una marcata ipersensibilità al latte vaccino. Studi condotti suggeriscono che la probabilità di ipersensibilità alimentare nei secondogeniti e nei figli successivi aumenta del 50% qualora il primogenito ne sia clinicamente affetto. La maggior parte degli alimenti appartenenti ad un gruppo tende a presentare proprietà comuni e, talvolta, anche la combinazione di alimenti appartenenti a gruppi diversi può causare cross-reazioni. Per diminuire alcune reazioni di ipersensibilità si consiglia di cuocere gli alimenti, dal momento che la cottura riduce la potenzialità di reazioni di ipersensibilità rispetto agli alimenti crudi. La maggior parte dei sintomi causati dalle intolleranze alimentari è di tipo gastrointestinale e 3. PRINCIPO DEL METODO Gli estratti degli alimenti sono adesi separatamente nei micropozzetti e reagiscono immunologicamente con gli anticorpi specifici presenti nel siero del paziente. Dopo la rimozione con il lavaggio delle proteine seriche in eccesso, l anticorpo coniugato reagisce con il complesso antigene-anticorpo. L enzima rimasto legato reagisce con il TMBsubstrato aggiunto successivamente. L intensità del colore sviluppato viene quindi misurata e risulta essere direttamente proporzionale alla concentrazione di anticorpi IgG specifici per un particolare alimento. 4. REAGENTI CONTENUTI NEL KIT Il kit contiene un numero sufficiente di pozzetti e reagenti per determinare la presenza di anticorpi verso 90 alimenti diversi nel siero di 3 pazienti. MTP DIL WASH CAL POS CONJ Micropriastra sensibilizzata: 3 piastre contenenti micropozzetti rivestiti di sostanze estratte da matrice alimentare. Diluente Campioni: 1 fl. (56 ml). Pronto per l uso. Tampone di Lavaggio (concentrato) 66.67X: 1 fl. (30 ml). Calibratore: 1 fl. (1.0 ml). Controllo Positivo IgG: 1 fl. (1.0 ml). Pronto per l uso. Coniugato Enzimatico: 1 fl. (40 ml). Anticorpi anti-igg coniugati con M448 Rev.5 11/2007 Pag. 1/12
2 TMB SUBS STOP perossidasi di rafano (HRP). Pronto per l uso. Cromogeno: 2 fl (12 ml). tetrametilbenzidina (TMB). Liquido. Tampone Substrato: 2 fl. (12 ml) perossido di idrogeno (H 2 O 2 ). Liquido. Reagente Bloccante: 1 fl. (20 ml) H 2 SO 4 1N. Pronto per l'uso. sia perfettamente funzionante. La conservazione a temperature diverse dall atteso può dare luogo a denaturazione biologica dei materiali (reattivi e/o campioni). E necessario un adeguato piano di manutenzione di tale strumentazione e un controllo periodico della temperatura registrata. Utilizzare un adeguato metodo per la corretta identificazione dei campioni. Possibili conseguenze possono essere sia la perdita di specificità del dispositivo che risultati analitici errati. 5. AVVERTENZE E PRECAUZIONI Per ottenere risultati corretti e riproducibili è necessario osservare le seguenti norme: Non mescolare i reagenti di lotti differenti. Non usare i reagenti dopo la data di scadenza. Non esporre i reattivi e i campioni a calore intenso o a forti sorgenti di inquinamento. Usare vetreria perfettamente pulita ed esente da contaminazioni di ioni metallici o sostanze ossidanti. Usare acqua distillata o deionizzata, conservata in recipienti perfettamente puliti. Evitare accuratamente contaminazioni tra campioni; a tal fine è consigliabile usare pipette con puntali monouso per ogni campione e per ogni reattivo. Non modificare in alcun modo il Procedimento Operativo di esecuzione del test. Eventuale non rispetto di: sequenza e quantità nell aggiunta dei reattivi tempi e temperatura di incubazione può dare luogo a risultati clinici errati. In caso di procedura manuale è importante l utilizzo di pipette calibrate e il possesso di un adeguata manualità tecnica. In particolare è essenziale una buona precisione nella preparazione e dispensazione dei reattivi. E necessario un adeguato piano di manutenzione (pulizia e calibrazione) di tale strumentazione. Assicurarsi che la pompa di aspirazione oppure l apparecchiatura automatica per il lavaggio delle micropiastre sia perfettamente funzionante. Un lavaggio non accurato delle micropiastre può dare luogo a misclassificazione dei campioni. E necessario un adeguato piano di manutenzione di tale strumentazione. Assicurarsi che lo spettrofotometro per micropiastre sia perfettamente funzionante. L utilizzo di uno spettrofotometro non calibrato o con filtri non puliti, può comportare un errore nella lettura dei campioni, con conseguente possibile misclassificazione degli stessi. E necessario un adeguato piano di manutenzione (pulizia e calibrazione) di tale strumentazione. Assicurarsi che la strumentazione utilizzata per la conservazione dei campioni e/o del dispositivo Per evitare contaminazioni personali ed ambientali è necessario osservare le seguenti norme di sicurezza: Utilizzare guanti monouso durante la manipolazione di materiale potenzialmente infetto e durante il dosaggio. Non pipettare i reagenti con la bocca. Non fumare, mangiare, bere o applicare cosmetici durante l'esecuzione del dosaggio. Le soluzioni di Cromogeno e Reagente Bloccante vanno manipolate con cautela. Evitare il contatto con la pelle, gli occhi e le mucose. In caso di incidente lavare abbondantemente con acqua. I materiali di origine umana utilizzati nella preparazione del presente kit sono stati saggiati per la presenza di HBsAg, anti-hiv e anti-hcv e sono risultati ripetutamente negativi. Comunque nessun test attualmente disponibile garantisce l'assenza degli agenti virali responsabili della sindrome da immunodeficienza acquisita, dell'epatite B ed Epatite C. Tutti i reagenti contenenti materiale biologico e tutti i campioni di siero umano devono essere considerati potenzialmente infettivi. Evitare la produzione di schizzi e la formazione di aerosol; qualora ciò si verificasse ripulire accuratamente con ipoclorito di sodio ad una concentrazione del 3%. Il mezzo adoperato per la pulizia deve essere trattato come residuo potenzialmente infetto ed eliminato secondo le modalità opportune. La sodio azide contenuta come conservante in alcuni reagenti può reagire con il piombo ed il rame delle tubature formando azidi di metallo altamente esplosive. Per evitare la formazione e l'accumulo di tali composti far scorrere abbondante acqua durante l eliminazione dei reagenti. Ai sensi del D.L. italiano n. 22 del , che fa riferimento alle direttive CEE (91/156/CEE, 91/689/CEE, 94/62/CEE) tutti i rifiuti provenienti da lavorazioni manuali e/o in automatico sono classificati rifiuti speciali pericolosi con codice di classificazione CER ; devono quindi essere eliminati affidandoli a ditte autorizzate al ritiro e allo smaltimento. M448 Rev.5 11/2007 Pag. 2/12
3 6. PREPARAZIONE DEL CAMPIONE Diluire il siero del paziente con il Diluente Campioni in rapporto 1:100 (es. 0.1 ml di siero + 10 ml di diluente campioni). 7. PREPARAZIONE E CONSERVAZIONE DEL REAGENTE 1. Tampone di lavaggio: Diluire il contenuto del Tampone di lavaggio (conc X) con 2000 ml di acqua distillata in un contenitore idoneo. Apporre sul contenitore un etichetta con la dicitura Soluzione di lavoro del Tampone di Lavaggio e conservare in ambiente refrigerato a 2-8 C. Una volta diluito, il tampone di lavaggio è stabile 6 mesi se mantenuto a 2-8 C. 2. Soluzione TMB-Substrato: Miscelare in parti uguali il Cromogeno con il Tampone Substrato 30 minuti prima dell uso (ad esempio, mescolare 5 ml di Cromogeno e 5 ml di Tampone Substrato per ogni paziente o piastra da utilizzare). Eliminare la miscela di soluzione inutilizzata. Non scambiare i tappi dei due reagenti. Non utilizzare la soluzione substrato preparata qualora presenti un colore bluastro. Dopo la preparazione la soluzione è stabile 60 minuti a temperatura ambiente. 8. PROCEDURA DEL DOSAGGIO Attendere che i reagenti raggiungano la temperatura ambiente prima dell uso. 1. PREPARAZIONE DELLA CURVA DI CALIBRAZIONE: etichettare 4 provette di vetro da 12x75 mm, riportando le seguenti concentrazioni: 50, 100, 200 e 400 U/ml. Dispensare 150 µl di diluente campioni in ogni provetta. Aggiungere 150 µl di Calibratore IgG alla provetta da 400 U/ml. Mescolare e trasferire 150 µl del liquido nella provetta da 200 U/ml. Mescolare e trasferire 150 µl del liquido nella provetta da 100 U/ml. Mescolare nuovamente e trasferire 150 µl del liquido nella provetta da 50 U/ml. Dovranno risultare così 150 µl nelle provette da 100, 200 e 400 U/ml, e 300 µl nella provetta da 50 U/ml. Questa sarà la curva di calibrazione da utilizzare nel dosaggio. Trasferire 100 µl del liquido presente in ciascuna provetta nella micropiastra, come indicato nella tabella sottostante. Provetta Pozzetto 50 U/ml (CAL 1) 1B 100 U/ml (CAL 2) 1C 200 U/ml (CAL 3) 1D 400 U/ml (CAL 4) 1E Dispensare 100 µl di Diluente campioni nel pozzetto 1A e 100 µl di Controllo Positivo nel pozzetto 1F. 2. Dispensare 100 µl di siero diluito in ciascuno degli altri pozzetti (per la diluizione vedi Preparazione del campione, sezione 6). 3. Coprire le piastre con parafilm o con una pellicola di plastica ed incubare per 1 ora a temperatura ambiente (22-25 C). 4. Dopo l incubazione, lavare tutti i pozzetti 3 volte con 300 µl di tampone di lavaggio (v. Sezione 7 per la preparazione della soluzione di lavaggio). 5. Aggiungere 100 µl di Coniugato Enzimatico IgG-HRP a tutti i pozzetti. 6. Incubare le piastre per 30 minuti a temperatura ambiente (22-25 C). 7. Lavare nuovamente le piastre come descritto nel punto Aggiungere 100 µl di Soluzione substrato a tutti i pozzetti (v. Sezione 7 per la preparazione della soluzione substrato). 9. Coprire e incubare le piastre per 10 minuti a temperatura ambiente (22-25 C). 10. Aggiungere 50 µl di Reagente bloccante a tutti i pozzetti (il colore del liquido nei pozzetti da blu diventa giallo). 11. Impostare il lettore per micropiastre su 450 nm e leggere il valore delle assorbanze in tutti i pozzetti. 12. Disegnare la curva su carta millimetrata lineare, interpolando l assorbanza dei campioni con le concentrazioni dei calibratori (pozzetti 1A -1E). I valori di seguito riportati debbono essere considerati unicamente come esempio. Non utilizzare questi dati per il calcolo dei risultati. Pozzetto Concentrazione Assorbanza 1A 0 U/ml 0,070 1B 50 U/ml 0,562 1C 100 U/ml 0,858 1D 200 U/ml 1,221 1E 400 U/ml 1,767 1F Controllo positivo 1,408 1G Campione siero 0,280 M448 Rev.5 11/2007 Pag. 3/12
4 9. CONTROLLO QUALITA Il test è considerato valido se i valori di densità ottica (D.O. a 450 nm) ottenuti rientrano nelle specifiche di controllo qualità di seguito riportate: DO pozzetto 1A < 0.2 DO pozzetto 1B > 1,2 x DO 1A DO pozzetto 1C > 1,2 x DO 1B DO pozzetto 1D > 1,2 x DO 1C DO pozzetto 1E > 1,2 x DO 1D Concentrazione positiva > 100 U/ml 10. INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI La lettura delle assorbanze, dopo estrapolazione in U/ml Radim, deve essere interpretata per ogni sostanza estratta da matrice alimentare così come di seguito indicato: VALORE INTERPRETAZIONE < 50 U/ml Negativo U/ml Lievemente positivo U/ml Moderatamente positivo +2 > 200 U/ml Altamente positivo NOTE SULL AUTOMAZIONE Il dispositivo può essere utilizzato con strumentazione automatica di kit ELISA su micropiastra. Si garantisce l applicabilità su strumentazione RADIM e/o SEAC Qualora si utilizzi strumentazione automatica di altri fornitori, è responsabilità dell utilizzatore assicurarsi che il kit sia stato opportunamente validato. 12. LEGENDA SIMBOLI: Vedi pag. 11 M448 Rev.5 11/2007 Pag. 4/12
5 Disposizione dei 90 alimenti (Micropiastra per 1 paziente) A BLANK Mela Broccoli Bietole Merluzzo Aglio Lattuga, Iceberg Semi di senape Pera Riso Zucca (vari tipi) Trota B CAL 1 Carciofi Burro Fiocchi di latte C CAL 2 Asparagi Cavolo Formaggi (stagionati) Caffè Uva (bianca) Limone Avena Pepe nero Segale Calamari Tonno Noce di cola Pompelmo Lenticchie Olive Fagioli Pinto Salmone Fragola Tacchino D CAL 3 Avocado Zucchero di canna Ceci Granturco Piselli verdi Fagioli Lima Cipolla Ananas Sardine Fagiolini Noce, nera E CAL 4 Banana Melone Pollo Latte vaccino Pepe verde Aragosta Arancia Prugna Gamberetti Semi di girasole Grano F Controllo positivo Orzo, integrale Carote Cacao Cetrioli Nasello Malto Prezzemolo Maiale Sogliola Patate dolci Lievito per panettieri G Mandorle Manzo Cavolfiore Cannella Uovo, albume/tuorlo Miele Maggiorana Pesca Patate Fagioli di soia Tè, nero Lievito di birra H Formaggi fusi Barbabietole Sedano Vongole Melanzana Agnello Funghi Arachidi Coniglio Spinaci Pomodori Yogurt M448 Rev.5 11/2007 Pag. 5/12
6 Allerfood (90) Screen IgG Elisa REF KAF Test Enzyme Immunoassay for semiquantitative detection of IgG Antibodies to 90 mediterranean Foods in Human Serum For In Vitro diagnostic use only 1. INTENDED USE The Allerfood (90) Screen IgG Elisa test is for measuring the relative amount of food-specific IgG antibody in human serum. The values obtained must always be correlated with the clinical presentation, since elevation of a certain food-specific antibody by itself does not necessarily mean disease. This kit does not provide information about IgE-mediated allergies. 2. CLINICAL APPLICATIONS The role of food and food additives as causative factors in food hypersensitivity diseases have prompted a considerable interest for many years. Commonly implicated foods include cow's milk, eggs, wheat, corn, chocolate, nuts, soybean and shellfish. About 0.5% of infants may have a hypersensitivity reaction to cow s milk. Research studies suggest that in a child with proven food hypersensitivity, the probability of food hypersensitivity in subsequent siblings is increased up to 50%. Most of the foods that belong to one group may share common properties, and sometimes foods of two different groups may also show cross-reactive reactions. To reduce certain food hypersensitivity reactions, cooked foods may be recommended because cooked food causes less intolerance reactions than raw food. Most common food intolerance symptoms are gastrointestinal-related and may include nausea, diarrhea, and abdominal pain. The clinical manifestations of food intolerance also include classic allergic symptoms such as anaphylaxis, allergic rhinitis, atopic dermatitis, and urticaria. The role of food intolerance in conditions such as migraine headaches and tension-fatigue syndrome is controversial. It is important to remember that the symptoms of food intolerance, especially gastrointestinal symptoms, can be mimicked by a variety of other conditions. 3. PRINCIPLE OF THE ASSAY Specific food extracts are immobilized separately onto microtitre wells. The antigens are allowed to react with specific antibodies present in the patient s serum. Excess serum proteins are removed by the wash step. Enzyme labeled antibody conjugate is allowed to react with antigen-antibody complex. A color is developed by the addition of a substrate that reacts with the coupled enzyme. The color intensity is measured and is directly proportional to the concentration of IgG antibody specific to a particular food. 4. REAGENTS PROVIDED WITH THE KIT This kit contains sufficient wells and reagents to assay 3 patient sera for antibodies to 90 different foods. MTP DIL WASH CAL POS CONJ Coated Microplate: 3 plates coated with different foods. Sample Diluent: 1 vial (56 ml). Ready for use. Wash Buffer (concentrated) 66.67X: 1 vial (30 ml). Calibrator: 1 vial (1.0 ml). IgG Positive Control: 1 vial (1.0 ml). Ready for use. Enzyme Conjugate: 1 vial (40 ml). Antibody anti-igg conjugated with horseradish peroxidase (HRP). Ready for use. TMB Chromogen: 2 vials (12 ml) tetramethylbenzidine (TMB). Liquid. SUBS STOP Substrate Buffer: 2 vials (12 ml) hydrogen peroxide (H 2 O 2 ). Liquid. Blocking Reagent: 1 vial (20 ml) H 2 SO 4 1N. Ready for use. M448 Rev.5 11/2007 Pag. 6/12
7 5. WARNINGS AND PRECAUTIONS In order to obtain correct and reproducible results, the following rules must be observed: Do not mix reagents from different lots. Do not use reagents beyond their expiry date. Do not store or leave reagents and samples at high temperatures or areas of possible contamination. Use thoroughly clean glassware, free from metal ion contamination or oxidizing substances. Use distilled or deionized water, stored in perfectly clean containers. Carefully avoid any contamination among samples; for this purpose, disposable tips should be used for each sample and reagent. Do not modify the "Assay Procedure" in any way. Altering volume reagent added temperature and exact incubation times may cause incorrect clinical results. In case of manual procedure, it is important to use calibrated pipettes and have appropriate technical manuals. Primary importance is a good precision preparing and dispensing the reagents. Ensure that all the equipment used is in perfect working order, has been correctly calibrated and is regularly maintained. Ensure that the aspiration pump or automated well washing device is in perfect working order. Inadequate rinsing of wells may cause an incorrect samples classifications. Ensure that all the equipment used is in perfect working order. Ensure that the microplate spectrophotometer is in perfect working order. The use of a not calibrated spectrophotometer or not clean filters may cause a wrong reading samples with consequent incorrect samples classifications. Ensure that all the equipment used is in perfect working order. Ensure that all the equipment used for samples storage and/or the system is in perfect working order. The storage at different suggested temperature may cause biological material denaturation (samples and/or reagents). Ensure that the equipment used is in perfect working order and periodically check the recorded temperature. Utilise a suitable method for the correct identification of patient samples. Incorrect identification may cause specificity losses of the system and wrong clinical results. In order to avoid personal and environmental contamination, the following precautions must be observed: Use disposable gloves while handling potentially infectious material and while performing the assay. Do not pipette reagents by mouth. Do not smoke, eat, drink or apply cosmetics during the assay. Chromogen and Blocking Reagent should be handled with care. Avoid contact with skin, eyes and mucous membranes. In case of accident rinse thoroughly with running water. All material of human origin used for the preparation of this kit tested negative for HBsAg, anti-hiv and anti-hcv. Since no test at present can guarantee complete absence of these viruses, all samples and reagents containing biological material used for the assay must be considered potentially infectious. Avoid splashing and aerosol formation; in such cases, carefully wash with a 3% sodium hypochlorite solution. Any such cleaning material must be treated as potentially infectious and disposed of accordingly. Some reagents contain sodium azide as preservative; to prevent build-up of explosive metal azides in lead and copper plumbing, reagents should be discarded by flushing the drain with large amounts of water. According to Italian decree D.L. no. 22 dated , in compliance with EEC directives (91/156/EEC, 91/689/EEC, 94/62/EEC), all waste products originating from either manual and/or automated processing are classified as hazardous special waste material (European classification code ). As such, they must be eliminated by delegating to special enterprises, qualified for waste collection and disposal. 6. PREPARATION OF PATIENT SAMPLE Dilute patient s serum 1:100 whit Sample Diluent (ex. 0.1 ml of patient serum + 10 ml of Sample Diluent). 7. REAGENTS PREPARATION AND STORAGE 1. Wash Buffer: Wash the contents of the vial into a 2000 ml flask with distilled water and Q.S. to 2000 ml mark with distilled water. Label it as Working Wash Buffer and store refrigerated at 2-8 C. The Working Wash Buffer is stable for 6 months at 2-8 C. 2. Substrate Solution: Mix Chromogen and Substrate Buffer in equal proportions 30 minutes before use (for example mix 5 ml each of Chromogen and 5 ml of Substrate Buffer for each patient or plate to be used). Discard the unused substrate mix solution. Do not interchange the caps on these solutions. If the mixed substrate solution looks blue in color before use, it should be discarded. Mixed substrate solution is stable for 60 minutes at room temperature. M448 Rev.5 11/2007 Pag. 7/12
8 8. ASSAY PROCEDURE Bring all the reagents to room temperature before use. 1. PREPARATION OF CALIBRATION CURVE: Label four 12 x 75 mm glass tubes as 50, 100, 200 & 400 U/ml. Dispense 150 µl of Sample Diluent into these four tubes. Add 150 µl of IgG Calibrator to the tube labeled 400 U/ml. Mix and transfer 150 µl into tube labeled 200 U/ml. Mix and transfer 150 µl into the tube labeled 100 U/ml. Again mix and transfer 150 µl into the tube labeled 50 U/ml. At this point you should have 150 µl in tubes 100, 200 & 400 U/ml, and 300 µl in tube 50 U/ml. This is the calibration curve to be used in the assay. Transfer 100 µl from each of these tubes to the microplate as follows. Tube Label Well 50 U/ml (CAL 1) 1B 100 U/ml (CAL 2) 1C 200 U/ml (CAL 3) 1D 400 U/ml (CAL 4) 1E Add 100 µl of Sample Diluent to Well 1A and 100 µl of Positive Control to well 1F. 2. Dispense 100 µl of the diluted patient serum sample (See Preparation of the Patient Sample Section 6 above) into each well. 3. Cover the plates with parafilm or plastic wrap and incubate at room temperature (22-25 C) for 1 hour. 4. After incubation, wash all the microwells three times with 300 µl of working wash buffer each time. (See Reagents Preparation Section 7). 5. Add 100 µl of IgG-HRP Enzyme Conjugate to all the wells. 6. Incubate the plates for 30 minutes at room temperature (22-25 C). 7. Wash the plates again as in step Add 100 µl of Substrate Solution mix to all the wells (see Reagents Preparation and Storage). 9. Cover the plates and incubate for 10 minutes at room temperature (22-25 C). 10. Add 50 µl of Blocking Reagent to all the wells. (Blue color in the wells will change to yellow). 11. Set the microplate reader at 450 nm and read absorbance in all the wells. 12. Plot the curve, using absorbance vs. the concentrations in the wells 1A -1E, on linear graph paper. A sample curve is given below. Do not use sample for data calculation. Well Concentration Absorbance Position 1A 0 U/ml B 50 U/ml C 100 U/ml D 200 U/ml E 400 U/ml F Positive Control G Patient Sample QUALITY CONTROL The assay is considered valid, if it meet the following Q.C. specifications for O.D. (Optical Density) at 450 nm. O.D. Well 1A < 0.2 O.D. Well 1B > 1.2 x OD 1A O.D. Well 1C > 1.2 x OD 1B O.D. Well 1D > 1.2 x OD 1C O.D. Well 1E > 1.2 x OD 1D Concentration Positive > 100 U/ml 10. INTERPRETATION OF RESULTS The absorbance readings, after extrapolation as Radim U/ml, should be interpreted as follows for each food extract. READING INTERPRETATION < 50 U/ml Negative U/ml Mildly Positive U/ml Moderately Positive +2 > 200 U/ml Highly Positive AUTOMATIC TEST This test can be used with automatic instrument for ELISA kits on microplate. We guarantee its applications on RADIM and/or SEAC automatic instruments. While using a non RADIM or SEAC automatic instrument for microplate, it is under end user responsibility, to make sure that it was appropriately tested for ELISA kits. 12. SYMBOLS LEGEND: see pag. 11 M448 Rev.5 11/2007 Pag. 8/12
9 BIBLIOGRAFIA / REFERENCES 1. Anderson, C.M. and Burke, V. Pediatric Gastroenterology, Oxford: Blackwell, Back, S.A., Lee, W.Y., Remigio, L.K. and May, C.C. Studies of hypersensitivity reactions to foods in infants and children. J. Clin. Allergy Immunol., 62, 327, Eastham, E.J. and Walker, W.A. Adverse effects of milk formula ingestion on the gastrointestinal tract. Gastroenterol., 76, 366, Kuitunen, P., Visakorpi, K. J., Savilahti, E. and Pelkonen, P. Malabsorption syndrome with intolerance: Clinical findings and course in 54 cases. Arch. Dis. Child., 54, 351, All, M., et al. Serum concentration of allergy specific IgG antibodies in inhalant allergy: Effects of specific immunotherapy. Amer. J. Clin. Pathol., 80, 290, Farrel, M. Food allergy, in Manual of Allergy and Immunology, ed: Lawlor, G.J. and Fischer, T.J., M448 Rev.5 11/2007 Pag. 9/12
10 90 Foods Mediterranean (1 Patient) Microplate Map A BLANK Apple Broccoli Chard Codfish Garlic Lattuce Iceberg Mustard Seed Pear Rice Squashes Trout B CAL 1 Artichoke Butter Cheese (cottage) Coffee Grape White/concord Lemon Oat Black pepper Rye Squid Tuna C CAL 2 Asparagus Cabbage Cheese (Cured) Cola nut Grapefruit Lentils Olive Pinto bean Salmon Strawberry Turkey D CAL 3 Avocado Cane Sugar Chick peas Corn Green pea Lima bean Onion Pineapple Sardine String bean Walnut, black E CAL 4 Banana Cantaloupe Chicken Cow s milk Green pepper Lobster Orange Plum Shrimp Sunflower seed Wheat F Positive Control Barley, whole grain Carrot Cocoa Cucumber Hake Malt Parsley Pork Sole Sweet Potato Yeast, Baker s G Almond Beef Cauliflower Cinnamon Eggs, white/yolk Honey Marjoram Peach Potato Soybean Tea, Black Yeast, Brewer s H American Cheese Beets Celery Clam Eggplant Lamb Mushroom Peanut Rabbit Spinach Tomato Yogurt M448 Rev.5 11/2007 Pag. 10/12
11 LEGENDA SIMBOLI SYMBOLS LEGEND EN 980 EDMA REF LOT Codice di riferimento o di ordine / reference or order code / Référence ou numéro de commande / referencia o número de pedido / referência ou número da encomenda / Referenz oder Bestellnummer / κωδικός προϊόντος ή παραγγελίας / Refarans veye sipariş numarsı / referenční nebo objednací číslo Lotto / lot / Lot / lote / lote / charge / παρτίδα / parti / šarže Rischio biologico / Biohazard / Risque Biologique / Riesgo Biológico / Risco Biológico / Bιολογικός κίνδυνος Consultare la metodica operativa / consult instructions for use / consulter le mode opératoire / consultar las instrucciones de uso / consultar as instruções de uso / Schauen Sie die Arbeitsanleitung an / συμβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης / kullanımda başvurulacak bilgiler / Sledujte návod k použití Data di scadenza / expiry date / date d expiration / Fecha de caducidad / Data de vencimento / Verfallsdatum / Ηµεροµηνία λήξης / Son kullanma targhi / datum expirace 270 Sufficiente per 3 pazienti / sufficient for 3 patients / suffisant pour 3 patients / suficiente para 3 pacientes/ Componentes para 3 pacientes / genügend für 3 patienten / επαρκεί για 3 ασθενείς IVD Per uso diagnostico in-vitro / For in-vitro diagnostic use / Pour diagnostic in-vitro / Para uso diagnóstico In-vitro / aplicação do diagnóstico In-vitro / Für den Gebrauch in der IN-VITRO-DIAGNOSTIK / για in vitro διαγνωστική χρήση / in vitro diagnostik kullanım / pro použití in-vitro Marcatura CE secondo le direttive IVD 98/79/CE / CE marking according to IVD guidelines 98/79/EC / marquage CE conforme aux directives IVD 98/7/EC / marcado CE según directiva de IVD 98/79/CE / marcação-ce segundo a directriz-ivd 98/79/CE / CE-Markierung bei Erfüllung der IVD Richtlinie 98/79/EG / Σηµανση CE βάσει κοινοτικής οδηγίας IVD 98/79/EC / 98/79/EC IVD tüzüğüne göre CE işareti / CE označení dle IVD 98/79/EU Conservare a 2-8 C / keep at 2-8 C / conserver à 2-8 C / Conservar a 2-8 C / conservar a 2-8 C / Lagerung bei 2-8 C / φύλαξη στους 2-8 C / 2-8 C da saklayınız / skladovat při 2-8 C Fabbricante / Manufacturer / Fabriquant / produzido por / Fabricante / produkt der / κατασκευάζεται από / tarafından üretilmiştir / výrobce RDATE Data di Riferimento / Reference date / Date de référence / Fecha de referencia / Data de refêrencia / Referenzdatum / ημερομηνία βαθμονόμησης / Referans Targhi / referenční datum RCNS Ricostituire con / reconstitute with / reconstituer avec / reconstituir con / reconstituir com / rekonstituiren mit / ανασυστάται με / ile karıştırma / rekonstituovat H 2 O Acqua distillata o deionizzata / deionized or distilled water / eau deionisée ou distillée / agua destilada o desionizada / água destilada ou deionizada / Deionisiertes oder Destilliertes Wasser / απιονισμένο -απεσταγμένο νερό / deiyonize veya distile su / deionizovaná nebo destilovaná voda M448 Rev.5 11/2007 Pag. 11/12
12 "Le Istruzioni per l'uso tradotte nelle altre lingue di interesse sono consultabili sul sito Internet all'indirizzo The instructions for use available in the other languages of interest can be viewed on our website Οι οδηγίες χρήσης μεταφρασμένες στις άλλες ενδιαφερόμενες γλώσσες όπως επίσης στην ηλεκτρονική διεύθυνση In den anderen Sprachen von Interesse ist die Bedienungsanleitung kann auf der Website unter der Adresse konsultiertwerden. "Le mode d emploi dans les autres langues intéressées est consultable sur le site Internet à l'adresse Las instrucciones de uso traducidas en los otros idiomas de interés se pueden consultar en nuestro sitio Internet "As instruções de uso traduzidas nos outros idiomas de interesse podem ser consultadas no nosso site Internet, ao endereço RADIM S.p.A. - Via del Mare, Pomezia (Roma) - Italia Tel.: Fax: National Order Entry: Export Department: Customer Care: info@radim.it -
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