Cat. KHB1IWT (96 Test) Cat. KHB1IWTB (192 Test)

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1 Cat. KHB1IWT (96 Test) Cat. KHB1IWTB (192 Test) Italiano p. 3 English p

2 Reagenti del Kit - Kit Reagents Reag. Quant. Stato fisico, Physical State KHB1IWT KHB1IWTB Pozzetti, Wells Pronti per l'uso, Ready for use S. di lavaggio, 1 x 50 ml 1 x 50 ml Conc Washing S. Contr Neg Neg Contr 1 x 2 ml 1 x 2 ml Liquido e pronto per I'uso Liquid and ready for use Contr Pos Pos Contr. 1 x 1 ml 1 x 1 ml Liquido e pronto per I'uso Liquid and ready for use Trac. 1 x 14 ml 2 x 14 ml Liquido e pronto per I'uso Liquid and ready for use Crom/Chrom 1 x 15 ml 2 x 15 ml Liquido e pronto per I'uso Liquid and ready for use T.Substr, Subtr B. 1 x 15 ml 2 x 15 ml Liquido e pronto per I'uso Liquid and ready for use R. Bloccante, Blocking R. 1 x 14 ml 2 x 14 ml Liquido e pronto per I'uso Liquid and ready for use - 2 -

3 DOSAGGIO IMMUNOENZIMOMETRICO PER LA DETERMINAZIONE QUALITATIVA DELL ANTIGENE DI SUPERFICIE DELL EPATITE B (HBsAg) NEL SIERO 0 PLASMA UMANO. PER USO DIAGNOSTICO'IN VITRO APPLICAZIONI CLINICHE E PRINCIPIO DEL METODO Il dosaggio dell'antigene di superficie dell'epatite B (HBsAg), nel siero o plasma umano, è di grande importanza nella diagnosi delle infezioni da virus dell'epatite B (HBV). L'HBsAg compare nel siero del paziente mediamente dopo 4-12 settimane dall'infezione e precede la comparsa dei sintomi clinici. La presenza di questo marker indica infettività del campione di sangue. Questo Kit di terza generazione per la determinazione qualitativa dell'hbsag in campioni di siero o plasma utilizza una coppia di anticorpi monoclonali, uno immobilizzato su micropiastra e I'altro coniugato con perossidasi (HRPO), che riconoscono entrambi il determinante "a" comune ai due sottotipi ad e ay dell'antigene. Durante l'incubazione, l'hbsag presente nei campioni si lega contemporaneamente ad entrambi gli anticorpi, formando un "sandwich". Al termine dell'incubazione, il materiale non legato viene rimosso mediante aspirazione e lavaggio. L attività enzimatica rimasta fissata sulla fase solida sarà quindi direttamente proporzionale alla concentrazione di HBsAg nei campioni e viene evidenziata aggiungendo ai pozzetti una soluzione di Cromogeno (tetrametilbenzidina, TMB) e Tampone Substrato. L intensità del colore sviluppato viene misurata mediante uno spettrofotometro a 450 nm. REAGENTI CONTENUTI NEL KIT I reagenti sono sufficienti per 96 test (cat.khb1iwt) o per 192 test (cat. KHB1IWTB). Il kit deve essere conservato a 2-8 C. La data di scadenza di ciascun reagente è indicata sulla rispettiva etichetta. 1 - Micropiastra Sensibilizzata: micropozzetti divisibili singolarmente, ricoperti di anticorpo monoclonale anti-hbsag (topo). I pozzetti non utilizzati devono essere riposti a 2-8 C nella busta di alluminio (custodia della micropiastra) sigillata accuratamente. 2 - Soluzione di Lavaggio (concentrata): PBS e tween 20. Conservante: Mertiolato (<0.05%). Portare il contenuto del flacone a 500 ml con H 2 0 distillata, lavando 2-3 volte il flacone. Nel caso siano presenti cristalli insoluti, risospenderli, ponendo il flacone a 37 C per qualche minuto. 4a- Controllo Negativo: Matrice sierica negativa. Conservante: Neomicina e Mertiolato (<0.05%). Pronto per l uso. 4b - Controllo Positivo: Soluzione tampone con HBsAg e BSA. Conservante: Neomicina e Mertiolato (<0.05%), Pronto per l'uso

4 8 - Tracciante Enzimatico: IgG monoclonali anti-hbsag coniugate con perossidasi di rafano (HRPO), in TRIS-HCl, BSA e stabilizzanti, Conservante: Neomicina. Pronto per l'uso. 9a- Cromogeno: Tetrametilbenzidina in tampone fosfato-citrato e DMSO. Pronto per l'uso. 9b- Tampone Substrato: Tampone fosfato-citrato e H %. Pronto per l'uso. N.B.: Dispensare separatamente rispettando la sequenza indicata: 1) Cromogeno e 2) Tampone Substrato considerando un intervallo di tempo non superiore ai 5 minuti tra le due dispensazioni. In alternativa, diluire in rapporto 1+1 il Cromogeno ed il Tampone Substrato utilizzando, un flacone di vetro tenendo, la miscela al riparo dalla luce. Dispensare la soluzione entro 10 minuti dal momento della preparazione. 10- Reagente Bloccante: H 2 SO 4 2N. Pronto per l uso. - Copripiastra autoadesivo. MATERIALE NECESSARIO MA NON FORNITO Micropipette automatiche a puntali monouso da 100, 200 e 300 Kl. Termostato ad aria regolabile a 37 C. Cilindro graduato da 500 ml. Pompa aspirante oppure apparecchiatura automatica per il lavaggio delle micropiastre (Radim Washer cod. SM1c o SM2c o equivalente). Spettrofotometro di precisione per micropiastre con possibilità di misura in assorbanza nell'intervallo A ad una lunghezza d'onda di 450 nm (Radim Reader cod. SM1b o SM2b o equivalente). H 2 0 distillata. AVVERTENZE E PRECAUZIONI Per ottenere risultati corretti e riproducibili, è necessario osservare le seguenti norme: Non mescolare reagenti di lotti differenti. Non usare i reagenti dopo la data di scadenza. Usare vetreria perfettamente pulita, priva di contaminazioni di ioni metallici o sostanze ossidanti. Usare acqua distillata, conservata in recipienti perfettamente puliti. Evitare accuratamente contaminazioni tra campioni; a tal fine è consigliabile usare pipette con puntali monouso per ogni campione e per ogni reattivo. Rispettare i tempi di incubazione dispensando il Cromogeno ed il Reagente Bloccante in un tempo non superiore ai 3-4 minuti; dispensare i due reagenti nella stessa sequenza

5 Per evitare contaminazioni personali ed ambientali, è necessario osservare le seguenti norme di sicurezza: Utilizzare guanti monouso durante la manipolazione di materiale potenzialmente infetto e durante il dosaggio. Non pipettare i reagenti con la bocca. Non fumare, mangiare, bere o applicare cosmetici durante l esecuzione del dosaggio. Le soluzioni di Cromogeno e Reagente Bloccante vanno manipolate con cautela. Evitare il contatto con la pelle, gli occhi e le mucose. In caso di incidente, lavare abbondantemente con acqua. I materiali di origine umana utilizzati nella preparazione del presente kit sono stati saggiati per la presenza di HBsAg e di anticorpi anti-hiv e anti-hcv e sono risultati ripetutamente negativi. Comunque, nessun test attualmente disponibile garantisce l'assenza degli agenti responsabili della sindrome da immunodeficienza acquisita, dell'epatite B ed epatite C. Tutti i reagenti ed i campioni di siero umano devono essere considerati potenzialmente infettivi; pertanto i rifiuti del dosaggio devono essere decontaminati ed eliminati secondo opportune regole di sicurezza. Il materiale monouso combustibile deve essere incenerito; il materiale non combustibile deve essere sterilizzato in autoclave per almeno 1 ora a 121 C. I rifiuti liquidi vanno addizionati di ipoclorito di sodio fino ad una concentrazione finale del 3%, lasciando agire l'ipoclorito per almeno 30 minuti. I rifiuti liquidi contenenti acido devono essere neutralizzati con quantità proporzionale di base. prima di essere trattati con ipoclorito di sodio. Evitare la produzione di schizzi e la formazione di aereosol; in tal caso, ripulire accuratamente con ipoclorito di sodio ad una concentrazione del 3%. Il mezzo adoperato per la pulizia deve essere trattato come residuo potenzialmente infetto ed eliminato secondo le modalità opportune. RACCOLTA E PREPARAZIONE DEI CAMPIONII Il dosaggio può essere effettuato su siero o plasma. I campioni fortemente lipemici o emolizzati devono essere scartati. I campioni possono essere conservati a 2 8 C per 1-2 giorni; a 20 C per tempi più lunghi. I campioni di plasma possono presentare filamenti di fibrina che interferiscono nel dosaggio; assicurarsi pertanto che siano perfettamente limpidi prima di dosarli. Si consiglia di non congelare e scongelare ripetutamente i campioni

6 PROCEDIMENTO OPERATIVO* - Attendere che i reagenti ed i campioni raggiungano la temperatura ambiente. - Agitare, i campioni per inversione prima dell'uso. 1 - Preparare i pozzetti necessari per il dosaggio, prevedendo la determinazione in quadruplicato del Controllo Negativo e in duplicato del Controllo Positivo e del Bianco. 2 - Dispensare 100 :l di Controllo Negativo, di Controllo Positivo e di ciascun Campione nei rispettivi pozzetti. 3 - Dispensare 100 :l di Tracciante Enzimatico in tutti i pozzetti, eccetto quelli del Bianco. 4 - Coprire la micropiastra con il foglio adesivo ed agitare delicatamente. 5 - Incubare: Procedimento A: 3 ore a 37 C; oppure Procedimento B: 90 minuti a 37 C. 6 - Rimuovere il foglio adesivo ed aspirare accuratamente la miscela di incubazione da tutti i pozzetti. 7 - Lavare i pozzetti 4 volte con 300 :l di Soluzione di lavaggio diluita. Aspirare accuratamente il liquido da tutti i pozzetti. 8 - Dispensare 100 :l di Cromogeno e 100 :l di Tampone Substrato in tutti i pozzetti in un intervallo di tempo tra le due dispensazioni non superiore ai 5 minuti; oppure dispensare 200 :l della soluzione Cromogeno-Tampone Substrato (vedi paragrafo reagenti). 9 - Incubare per 20 minuti a 37 C al riparo dalla luce troppo intensa Dispensare 100 :l di Reattivo Bloccante in tutti i pozzetti Leggere la densità ottica dei pozzetti a 450 nm in uno spettrofotometro preferibilmente bicromatico, con lunghezza d'onda di riferimento a 620 nm (azzerando lo strumento con il Bianco). La lettura deve essere completata entro 1 ora dal termine del dosaggio. * Qualora si utilizzasse nel procedimento operativo lo strumento BRIO, far riferimento al relativo manuale. SCHEMA DEL DOSAGGIO: vedi p

7 CALCOLO DEI RISULTATI Controllo Medio Negativo: calcolare la densità ottica media dei Controlli Negativi, escludendo i valori aberranti (densità ottica maggiore di 0.100). Se i valori aberranti sono due o più, il dosaggio non deve essere considerato valido. Controllo Medio Positivo: la densità ottica media dei Controlli Positivi deve essere maggiore di (Procedimento A) o maggiore di (Procedimento B); in caso contrario il dosaggio non deve essere considerato valido. Valore soglia: Procedimento A: Controllo Medio Negativo Procedimento B: Controllo Medio Negativo ESEMPIO DI CALCOLO I valori sotto riportati debbono essere considerati unicamente un esempio e non devono essere utilizzati in luogo dei dati sperimentali. Controlli Negativi: ( ):4 = (Controllo Medio Negativo) (<0.100) Controlli Positivi: Procedimento A: ( ):2 = (Controllo Medio Positivo) (>0.800). Procedimento B: ( ):2 = (Controllo Medio Positivo (>0.400). Il dosaggio deve essere considerato valido. Valore soglia = Procedimento A: ( )=0.060 Procedimento B: ( )=0.040 INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI I campioni con densità ottica minore del valore soglia sono da considerare non reattivi per HBsAg, mentre quelli con densità ottica maggiore al valore soglia. sono da considerare reattivi per HBsAg. Un campione non reattivo al primo dosaggio (inferiore al valore soglia) deve essere considerato HBsAg negativo. Un campione reattivo al primo dosaggio (superiore al valore soglia) deve essere dosato nuovamente per conferma; se non risulta ripetutamente reattivo, deve essere considerato HBsAg negativo, in caso contrario (ripetutamente reattivo) deve essere considerato HBsAg positivo. I campioni che forniscono valori di densità ottica compresi nell'intervallo del valore soglia ± 10% (area grigia) sono da considerare di dubbia interpretazione e devono essere nuovamente dosati per conferma. Assorbanza inferiore al valore soglia: campioni HBsAg negativi. Assorbanza superiore al valore soglia: campioni HBsAg positivi. Assorbanza compresa nell'intervallo del valore soglia ± 10% (area grigia): incerta presenza di antigeni HBsAg

8 PRESTAZIONI METODOLOGICHE Sensibilità La sensibilità del metodo è stata valutata, dosando diluizioni seriali degli standards di HBsAg (sottotipi ad e ay ) forniti dal Paul Ehrlich Institute (Germania). Gli standards sono espressi in U/ml. Sottotipo ad Sottotipo ay HBsAg Assorbanza HBsAg Assorbanza Proc. A Proc. B Proc. A Proc. B 4 U/ml U/ml U/ml U/ml U/ml U/ml U/ml U/ml U/ml U/ml U/ml U/ml Assorbanza del Controllo medio Negativo = Assorbanza. del Valore Soglia: Procedimento A: Procedimento B: La minima dose misurata di HBsAg è risultata pari a U/ml per il sottotipo ad e a 0.08 U/ml per il sottotipo ay. Specificità Su un campione di oltre 1500 donatori la specificità del presente metodo è risultato pari al 99.8%

9 IMMUNOENZYMOMETRIC ASSAY FOR THE QUALITATIVE DETERMINATION OF THE SURFACE ANTIGEN OF THE HEPATITIS B VIRUS (HBsAg) IN HUMAN SERUM OR PLASMA. FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE ONLY CLINICAL APPLICATIONS AND PRINCIPLE OF THE ASSAY The assay of the hepatitis B virus surface antigen (HBsAg) in human serum or plasma is an important tool in the diagnosis of an infection with the hepatitis B virus. The HBsAg appears about 4 to 12 weeks after the infection in the patients blood and precedes the first clinical symptoms of such an infection. The presence of this hepatitis marker indicates the infectivity of the sample. This testkit is a third generation assay for the qualitative determination of HBsAg in serum or plasma using two monoclonal antibodies which recognize the "a" detection which is common to both subtypes "ad" and "ay" of the antigen. This test is based on an immunoenzymometric assay (IEMA). Two different anti-hbsag monoclonal antibodies are used, one adsorbed on the wells and the other conjugated to horseradish peroxidase (HRPO). During the first incubation, the HBsAg present in the samples is bound to both monoclonals at once, by forming a "sandwich". Following this incubation, the unbound material is removed by aspiration and washing cycle. The residual enzyme activity found in the wells will thus be directly proportional to HBsAg concentration in the samples and evidenced by incubating the solid phase with a Chromogen solution (Tetramethylbenzidine, TMB) in a Substrate-Buffer. Colorimetric reading will be performed by using a spectrophotometer at a 450 nm wavelength. REAGENTS PROVIDED WITH THE KIT The reagents are sufficient for 96 tests (cat. KHB1IWT) or for 192 tests (cat. KHB1IWTB). Store the kit at 2-8 C. The expiry date of each reagent is shown on the vial label. 1 - Coated Microplate: breakable wells, coated with mouse monoclonal Anti-HBsAg antibody. Keep unused wells at 2-8 C in the provided aluminium bag carefully sealed. 2 - Washing Solution (concentrated): PBS and TWEEN 20. Preservative: Thimerosal (<0,05%). Take vial content to 500 ml with distilled H 2 0. In presence of undissolved crystals, re-suspend the solution by placing the vial at 37 C for a few minutes

10 4a- Negative Control: Negative serum matrix. Preservative: Neomycin and Thimerosal (<0.05%). Ready for use. 4b- Positive Control: HBsAg in buffer solution with BSA. Preservative: Neomycin and Thimerosal (<0.05%). Ready for use. 8 - Enzyme Tracer: monoclonal IgG anti-hbsag conjugated to horseradish peroxidase (HRPO), in TRIS-HCl with BSA and stabilizers. Preservative: Neomycin. Ready for use. 9a- Chromogen: Tetramethylbenzidine with phosphate-citrate buffer and DMSO. Ready for use. 9b- Substrate Buffer: Phosphate-citrate buffer and 0.03% H Ready for use. NOTE: Pipette in the following order: 1) Chromogen and 2) Substrate Buffer, at an interval not greater than 5 minutes between the two reagents. Alternatively, make a 1+1 dilution with equal volumes of Chromogen and Substrate Buffer in glassware. Avoid direct light exposure and use within 10 minutes from preparation. 10- Blocking Reagent: 2N H 2 SO 4. Ready for use. - Adhesive Plate Sealer. MATERIAL REQUIRED BUT NOT SUPPLIED Automatic 100, 200 and 300 Kl micropipettes with disposable tips. Incubator, adjustable at 1200 rpm Graduated 500 ml cylinder. Aspiration pump or automated well washing device (Radim Washer cod. SM1c or SM2c or equivalent). Microplate spectrophotometer capable of measuring absorbances within a A interval at 450 nm wavelength (Radim Reader cod. SM1b or SM2b or equivalent) Distilled H 2 O. WARNINGS AND PRECAUTIONS In order to obtain reproducible results, the following rules must be observed: Do not mix reagents of different lots. Do not use reagents beyond their expiry date. Use thoroughly clean glassware, free from contamination of metal ions or oxidating substances. Use distilled water, stored in clean containers. Avoid any contamination among samples; for this purpose, disposable tips should be used for each sample and reagent. Follow exact incubation times. Dispense Chromogen and Blocking Reagent in not more than 3-4 minutes; dispense the two reagents in the same sequence

11 In order to avoid personal and environmental contamination, the following precautions must be observed: Use disposable gloves while handling potentially infectious material and performing the assay. Do not pipette reagents by mouth. Do not smoke, eat, drink or apply cosmetics during the assay. Chromogen and Blocking Reagent should be handled with care. Avoid contact with skin, eyes and mucous membranes. In case of accident rinse thoroughly with running water. All material of human origin used for the preparation of this kit tested negative for HBsAg, anti-hiv and anti-hcv. Since no test at present can guarantee complete absence of these viruses, all samples and reagents used for the assay must be considered potentially infectious; therefore, the assay waste must be decontaminated and disposed of, in accordance with established safety procedures. Disposable ignitable material must be incinerated; disposable non-ignitable material must be sterilized in autoclave for at least 1 hour at 121 C. Liquid wastes must be added with sodium hypochlorite at a final concentration of 3%. Let the hypochlorite act for at least 30 minutes. Liquid wastes containing acid must be neutralized with appropriate amounts of base before treating with sodium hypochlorite. Avoid splashing and aerosol formation; in case of spilling, wash carefully with a 3% sodium hypochlorite solution and dispose of this cleaning liquid as potentially infectious waste. SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION The assay can be performed in serum or plasma samples. Highly lipemic or hemolyzed samples must be discarded. Keep samples at 2-8 C for 1-2 days; for longer periods it is advisable to freeze samples at 20 C. Plasma samples may present fibrin filaments which could interfere with the assay; make sure that samples are always perfectly clear before testing. Repeated freezing and thawing of samples should be avoided

12 ASSAY PROCEDURE* Allow reagents and samples to warm up at room temperature. Mix the samples by inversion before use. 1 - Prepare the wells required for the assay. Negative Control should be included in quadruplicate and in duplicate Positive Control and Blank. 2 - Pipette 100 :l of Negative Control, Positive Control and Samples, into the corresponding wells. 3 - Add 100 :l of Enzyme Tracer into each well, except for the Blank well 4 - Cover the microplate with adhesive sheet and mix gently. 5 - Incubate: Procedure A: 3 hours at 37 C; or Procedure B: 90 minutes at 37 C. 6 - Remove the adhesive sheet, and carefully aspirate the incubation mixture from all wells. 7 - Wash the wells 4 times with 300 :l of diluted Washing Solution. Aspirate all liquid from the wells. 8 - Pipette 100 :l of Chromogen and 100 :l of Substrate Buffer into all wells. Consider a maximum interval of 5 minutes between the two reagents, starting from the beginning of the step 8; or pipette 200 :l of Chromogen-Substrate solution (see reagent paragraph) into the wells. 9 - Incubate for 20 minutes at 37 C, avoid direct light exposure Pipette 100 :l of Blocking Reagent into all wells Read the absorbance of the wells with a bichromatic spectrophotometer at 450 nm, with a reference wavelength of 620 nm (setting the instrument at zero with the Blank well). Reading must be completed within 1 hour from the end of the assay. * Please refer to the BRIO instruction sheet, when using the instrument. ASSAY SCHEME: see p

13 CALCULATION OF RESULTS Mean absorbance of the Negative Control: calculate the mean absorbance of the negative controls, discarding the outlying values (absorbance higher than 0.100). The test should be considered invalid if two or more values ars outlying values. Mean absorbance of the Positive Control: the mean absorbance value of the positive controls should be higher than (Procedure A) o higher than (Procedure B) otherwise the assay should be considered invalid. Cut-off Value: Procedure A: Mean Negative Control Procedure B: Mean Negative Control EXAMPLE OF CALCULATION The values shown below must be considered as an example and must not be used in place of experimental data. Negative Controls: ( ) :4 = 0.01 O(Mean Negative Control) (<0.100). Positive Controls: Procedure A: ( ):2=1.248 (Mean Positive Control) Procedure B: ( ):2 =0.848 (Mean Positive Control) The test must be considered valid, Cut-off value = Procedure A: ( )= Procedure B: ( )= INTERPRETATION OF RESULTS Samples with an absorbance higher than the cut-off value should be considered reactive for HBsAg. Samples with an absorbance lower than the cut-off value should be considered non-reactive for HBsAg. Samples non-reactive in the first assay (absorbance lower than the cut-off value) should be considered negative for the HBsAg. Samples reactive in the first assay (absorbance higher than the cut-off value) should be retested for confirmation. If the sample results repeatedly not reactive it should be considered negative for the HBsAg. Samples resulting repeatedly reactive should be considered positive for HBsAg. Samples with an absorbance within the range of the cut-off ± 10% (grey area) should be considered doubtful and must be retested. Absorbance lower than the cut-off value: samples HBsAg negative. Absorbance higher than the cut-off value: samples HBsAg positive. Absorbance within the range of the cut-off ± 10% (grey area): samples HBsAg doubtful

14 PERFORMANCES OF THE ASSAY Sensitivity The sensitivity of the method has been evaluated assaying a serial dilution of HBsAg standards (subtypes ad and ay ) supplied by the Paul Erlich Institute (Germany). These standard values are expressed in U/ml. Subtype ad Subtype ay HBsAg Absorbance HBsAg Absorbance Proc. A Proc. B Proc. A Proc. B 4 U/ml U/ml U/ml U/ml U/ml U/ml U/ml U/ml U/ml U/ml U/ml U/ml Absorbance of the Mean Negative Controls = Absorbance of Cut-off Value: Procedure A: Procedure B: The minimal HBsAg concentration detected is 0.15 U/ml for the "ad" subtype and 0.08 U/ml for the "ay" subtype. Specificity The specificity of the method has been calculated on samples of 1500 blood donors and resulted in a specificity of 99.8%

15 Schema del dosaggio Assay scheme Reaq. Contr Neg Neg Contr. Contr Pos Pozzetti Bianco, Contr Neg Contr Pos Campioni, Wells Blank Neg Contr/ Pos Contr Samples Kl Kl ---- Pos Contr. Campioni, Samples Kl Trac Kl 100 Kl 100 Kl - Incubare, Incubate: A: 37 C 3h; oppure, or B: 37 C 90 - Aspirare e lavare, Aspirate and wash: 4 x 300 Kl Crom/ Chrom 100 Kl 100 Kl 100 Kl 100 Kl T.Substr., Substr B. 100 Kl 100 Kl 100 Kl 100 Kl oppure, or Crom-Substr., Chrom-Substr. 200 Kl 200 Kl 200 Kl 200 Kl - Incubare, Incubate: 37 C 20. R.Bloccante, Blocking R. 100 Kl 100 Kl 100 Kl 100 Kl - Leggere, Read: 450 nm

16 Bibliografia-References 1 - B.S. Blumerg, A.I. Suntnick, W.T. London : Hepatitis and leukemia: their relation to Australia antigen. Bull. N.Y., Acad.Med.,44:1566 (1968). 2 - R.D. Aach,J.W. Grisham, C.W. Parker: Detection of Australia antigen by radioimmunoassay. Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 68:1056 (1971). 3 - F.B. Hollinger, V.Vorndam, G.R. Dreesman: Assay of Australia antigen and antibody employing double antibody and solid phase radioimmunoassay techniques and comparison with passive hemagglutination methods. J.Immunol., 107:1099 (1971) 4 - Wolters G., Kuijpers L., Kacaki J. and Schuurs A., Solid-phase enzyme immunoassay for detection of Hepatitis B surface antigen, J.Clin.Pathol. 29: , Wei R., Knight G.J., Zimmerman D.H. and Bond H.E., Solid-phase enzyme-immunoassay for detection of hepatitis B surface antigen, Clin.Chem.23: , J.H.Walsh, F.Yalow, S.A.Berson: Detection of Australia antigen and antibody by means of radioimmunoassay techniques. J.Infect.Dis., 121:550(1970). 7 - David D.S., Present W., Martinis J., Wang R., Bartholomew R., Desmond W. and Sevier E.D.: Monoclonal antibodies in the detection of hepatitis infection. Med. Lab. Sci. 38: , Goodall A.H., Miescher G., Meek F.M., Janossy G. and Thomas H.C.: Monoclonal antibodies in a solid-phase radiometric assay for HBsAg. Med.Lab.Sci. 38: , Shih JW-K., Cote P.J., Dapolito G.M., and Gerin J.L.: Production of monoclonal antibodies against hepatitis B surface antigen (HBsAg) by somatic cell hybrids. J.Virol.Meth. 1: , RADIM SpA - Via del Mare, Pomezia (Roma) Italia Telefono: 0039/(0)6/ (r.a. 5 linee) - Tlx: RADIM I Fax: 0039/(0)6/ RADIM S.A. - Parc Scientifique du Sart-Tilman - Avenue Pre Aily, Angleur (Liège) Belgique - Tel.: 0032/(0)41/ Fax: 0032/(0)41/ /95 M87 - Rev