Analisi del gene del recettore B del peptide natriuretico di tipo C (NPR2) in pazienti con bassa statura idiopatica e in un gruppo di controlli

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Lelia Marchesi
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1 Analisi del gene del recettore B del peptide natriuretico di tipo C (NPR) in pazienti con bassa statura idiopatica e in un gruppo di controlli C. Volta, A. Smerieri, M.E. Street, E. Favaro, S. Bernasconi Dipartimento Età Evolutiva Università di Parma

2 SHOX point mutations and deletions in Leri- Weill dyschondrosteosis C Falcinelli, L Iughetti, A Percesepe, G Calabrese, F Chiarelli, M Cisternino, L De Sanctis, I Pucarelli, G Radetti, M Wasniewska 9, G Weber, L Stuppia,, S Bernasconi and A Forabosco Journal of Medical Genetics ;9:e-e SHOX (Short HOmeoboX containing) gene mutations have been investigated in unrelated families affected by Leri-Weill dyschondrosteosis (LWD), included in the study because of the presence of Madelung deformity of the forearms and disproportionate stature. Genomic deletions encompassing SHOX were assessed through the analysis of microsatellites within and flanking the gene. In non-deleted cases mutation analysis was performed through sequencing of the coding regions of the gene. Ten out of the families studied showed SHOX gene deletions. In the remaining families, sequence analysis showed three novel point mutations (one frameshift and two missense). Thirteen out of (%) families with typical LWD harbour a SHOX gene mutation; point mutations, predominantly involving the homeobox region, occur less frequently than large deletions.

3 Mutazione in omozigosi del gene NPR e bassa statura nel topo Chusho H et al. PNAS

6 Mutazione in eterozigosi del gene NPR e bassa statura nell uomo Olney RC et al. J Clin Edocrinol Metab

7 NPR-B: Recettore del Peptide Natriuretico di Tipo B esoni

8 MATERIALI E METODI Casistica: soggetti di bassa statura ( dall unità di Parma, da Messina e da Bari) e soggetti con statura normale reclutati dal Centro di Parma. Sono stati ad oggi studiati soggetti con bassa statura idiopatica Età:. anni ±,9 peso alla nascita: 9, gr ± BMI:, ±, Ht SDS*: -, ±, controlli Età:, anni ±,9 peso alla nascita: 9 gr ± BMI:, ±, Ht SDS*:, ±,9 *p <., (t=,)

9 Risultati Esone WT Mutazione Gruppo c.dna Proteina G K Bassa Statura c.+ C>A; Nessuna variazione G T % dei Soggetti di Bassa Statura % dei Soggetti di Controllo c.inst - G Controllo c.insg; STOP CODON

10 CONCLUSIONI () -La mutazione identificata nell esone del paziente con bassa statura non determina variazioni nella sequenza aminoacidica. -L inserzione di timina identificata per l esone sia nel gruppo di controllo sia nei soggetti di bassa statura non mostra una distribuzione significativamente diversa (p<,). Non sembrerebbe quindi attribuibile un significato patologico a tale polimorfismo. - La mutazione identificata nell esone del paziente di controllo determina un allungamento della catena peptidica di 9 amminoacidi ma, data la sua posizione terminale potrebbe non avere conseguenze cliniche.

11 Risultati Esone WT Mutazione Gruppo c.dna Proteina G K Bassa Statura c.+ C>A; Nessuna variazione C T Bassa Statura c.9 C>T p.av G T % dei Soggetti di Bassa Statura % dei Soggetti di Controllo c.inst - G Controllo c.insg; STOP CODON

12 CONCLUSIONI () -La mutazione in omozigosi c.9 C>T, individuata nell esone del paziente di bassa statura, non è mai stata descritta in precedenza. - La mutazione determina nella sequenza aminoacidica l inserimento in posizione di Valina al posto di Alanina; sono entrambi amminoacidi idrofobici. Ulteriori indagini e confronti sulla struttura terziaria permetteranno di capire gli effetti della mutazione.

13 CONCLUSIONI () - Se la mutazione in omozigosi c.9 C>T, individuata nell esone del paziente di bassa statura fosse clinicamente significativa potremmo affermare che il,9% delle basse stature idiopatiche può essere dovuto a tale mutazione e ciò corrisponde al calcolo teorico del lavoro di Olney del,%

14 Cattedra di Pediatria

15 Interazione del Recettore NPRB col Peptide Natriuretico (CNP)

16 MATERIALI E METODI () METODICHE UTILIZZATE PCR (Polymerase Chain Reaction) Screening di mutazione con DHPLC (Denaturino High Performance Liquid Chromatography ) Sequenziamento degli esoni risultati mutati

17 DHPLC (Denaturino High Performance Liquid Chromatography ) Nessuna mutazione individuata Eterodulex che individua la mutazione Absorbance (mv) 9 Time (Minutes) 9 Absorbance (mv) Time (Minutes) Neg Pr 9 Esempio di individuazione della mutazione

18 Analisi con DHPLC (Denaturino High Performance Liquid Chromatography ) Esone : temperatura Esone : temperature Temperature (ºC) Temperature (ºC) Base Position. ºC Base Position. ºC. ºC. ºC Due esempi di analisi di esoni con DHPLC: il software produce la curva di denaturazione in cui è visibile il punto di flesso in corrispondenza della temperatura di denaturazione. Per alcuni esoni è sufficiente una temperatura sola per aprire l intero tratto di DNA, per altri sono necessarie più temperature.

19 Esempio di sequenziamento con polimorfismo individuato

20 Absorbance (mv) Exon Exon Absorbance (mv) Time (Minutes) Me T= C T= C T=, C ME 9 9 Absorbance (mv) 9 Absorbance (mv) Me Time (Minutes) Me T=, C 9 9 Time (Minutes) Time (Minutes) Exon Absorbance (mv) Exon Absorbance (mv) Time (Minutes) O.G. T=, C T=, C 9 Me. 9 Absorbance (mv) Absorbance (mv) Time (Minutes) T=, C T=, C O.G. 9 9 Time (Minutes) Time (Minutes)

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