Una Soluzione Semplice per un Esame Difficile: Analisi del Sedimento Urinario SediVue Dx

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1 Una Soluzione Semplice per un Esame Difficile: Analisi del Sedimento Urinario SediVue Dx Graham Bilbrough, MA, VetMB, CertVA, MRCVS Dennis B. DeNicola, DVM, PhD, DACVP Federico Sacchini Mphil, DipRCPath, DipECVCP

2 Presenter information Dennis earned his DVM and PhD from Purdue University in 1978 and 1981, respectively. He was the primary instructor in clinical pathology at Purdue and directed the clinical pathology laboratory and residency program through In 2002, Dennis joined IDEXX Laboratories, Inc. and since that time has served as Chief Veterinary Educator and maintains an adjunct professorship at Purdue. Dennis B. DeNicola, DVM, PhD, dipacvp

3 Obiettivi Presentazione unico strumento per l esame microscopico dell urina per utilizzo ambulatoriale Perche e Quando eseguire l esame dell urina completo Comprendere che la microscopia urinaria, e parte essenziale dell esame dell urina Fornire indicazioni su come funziona il SediVue Dx Capire il valore aggiunto rispetto ai metodi tradizionali Mostrare alcune immagini dimostrative dal SediVue Dx Immagini microscopiche ad alta risoluzione/ contrasto Esempi rappresentativi di strutture urinarie comuni

4 Il valore dell esame dell urina - rieducazione L esame dell urina fornisce informazioni su: Stato di idratazione Aumenti di CREA e SDMA Diabete Malattia epatica Equilibrio acido-base Anemia Infiammazione Malattia emolitica Senza si rischia di perdere: Malattia renale ed epatica UTI Severita del diabete Tumori del tratto urinario Disturbi acido-base Non-specific Illness Non-specific Pain Regular Checkup Vomiting Stopped Eating Il Minimum database e indicato per tutti I tipi di visite Scheduled Surgery Diarrhea Il minimum database include un pannello biochimico + emogramma + Esame Urina Completo ed e indicato per tutti i tipi di visita Itchy Pet Problem Pee

5 Esame dell Urina quando e necessario? La maggior parte dei veterinari e consapevole che il minimum database comprende l esame dell urina completo In meno di 1/3 dei pazienti viene eseguito l esame dell urina come parte del workup diagnostico Difficile ottenere un campione di urina Difficile raccogliere una quantita adeguata di urina Tempo di esecuzione lungo circa 20 minuti Mancanza di fiducia e ripetibilita della microscopia urinaria ambulatoriale Consapevolezza che l invio al laboratorio esterno causa alterazioni Soluzioni adottate dai veterinari: L esame del sedimento urinario non viene eseguito Spedizione al laboratorio di referenza Chemistry Hematology Physical exam

6 Esame dell urina completo? Esame Microscopico Esame fisico Esame chimico Esame microscopico

7 Analisi urina completo esame microscopico Preparazione del campione? Physical examination Chemical examination Microscopic examination IDEXX SediVue Dx Analyzer image IDEXX SediVue Dx Analyzer image IDEXX SediVue Dx Analyzer image

8 Nella vostra pratica clinica, quale e il volume di urina che centrifugate per la valutazione microscopica di routine del sedimento urinario?

9 Esame microscopico dell urina Notevoli variazioni nella preparazione dei campioni osservate sul campo: Il volume di urina varia notevolmente 1.5, 3.0, 5.0, 10.0 ml Dimensioni della centrifuga e forza di centrifugazione Microscopio utilizzato per l esame Valutazione di preparazioni colorate e montate a fresco

10 Standard wet preparation 400 g centrifugation of 5 ml of urine 250 g centrifugation of 1.5 ml of urine 3900 g centrifugation (StatSpin) of 1.5 ml of urine Conclusion: results were similar for cells, casts, and crystals Limitation of study: low number of samples with casts and crystals Source: Layssol C, Geffré A, Braun JP, et al. Comparison of three different methods of urine canine sediment preparation for microscopic analysis (Abstract). Vet Clin Pathol. 2009;38(S1):E40.

11 Method Standard StatSpin Inverted Scope Neat Centrifugation Yes Yes No No Sample volume 5 ml 1.5 ml 60 µl 30 µl %CV Mean / SD 55 / / / 9 14 / 7

12 Esame microscopico dell urina 1.5 ml massimo Spesso < 1.5 ml

13 L esame dell urina ambulatoriale e una metodica specialistica che richiede circa 20 minuti Physical Analysis Chemical Analysis Centrifuge Prepare Slide Read slide Record Results 1 min 3 mins 5 mins 3 mins 5 mins 1 min mins Interrupted workflow, multiple people, expertise 13 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved.

14 Analisi del sedimento urinario automatizzata Esame sedimento automatizzato in medicina umana

15 Analisi del sedimento urinario automatizzata Esame sedimento automatizzato in medicina umana

16 Analisi del sedimento urinario automatizzata Esame sedimento automatizzato in medicina umana

17 Analisi del sedimento urinario automatizzata Esame sedimento automatizzato in medicina umana

18 77 Elektronica UriSed 2 Esperienza in campo umano Lanciato nel unita in uso Distribuito da Roche negli USA Produce l IDEXX VetLab UA IDEXX VetLab UA Analyzer

19 UriSed 2 Veterinary samples Formed Element Sensitivity Specificity RBC 59% 97% WBC 66% 97% Squamous Epi 25% 95% Non-squamous Epi 30% 99% CaOx Dihydrate Crystals 72% 91% Struvite Crystal 39% 99% Hyaline Casts 57% 99% Non-hyaline Casts 89% 88% Bacteria 52% 80%

20 Esame microscopico dell urina automatizzato IDEXX SediVue Dx 170 µl di urina Microscopia automatizzata

21 SediVue Dx - funzionamento Contenitori con 25 cartuccie SediVue Dx V70i Strumento IDEXX SediVue Dx Il campione e inserito qui Cartridge loaded in analyzer Pipetta calibrata a 170 µl of urina non concentrata

22 SediVue Dx - funzionamento La cartuccia caricata e portata alla stazione di centrifugazione Centrifugazione delicata: Circa 260 g (2000 RPMs) 10 secondi Le strutture presenti nell urina sono centrifugate sul fondo della cartuccia e stratificate su un unico piano cartuccia

23 SediVue Dx - funzionamento Autofocus Cattura dell immagine Poco meno di un campo microscopico con obiettivo a 40x (hpf) 70 immagini vengono catturate per l analisi Approssimativamente viene valutato 10 µl di campione 400 μm Via ottica Linear spiral Particelle Carrello Obiettivo volano Specchio CAMERA

24 SediVue Dx - funzionamento 70 immagini catturate 10uL volume di campione analizzato Immagini non sovrapposte Auto-focus in ogni immagine Image focus levels Images (?) focus images

25 SediVue Dx - funzionamento Sedimento urinario: un campione complesso Squamous Epi White blood cells Red blood cells Ca Ox Di

26 Identificazione e classificazione delle strutture Convolutional neural network (CNN) technology

27 Esame microscopico del sedimento automatizzato IDEXX SediVue Dx Analyzer 170 µl di urina Microscopia automatizzata Meno di 3 minuti

28 Al momento per fare le cose correttamente ci vuole tempo

29 SediVue Dx Esame del sedimento urinario automatizzato con immagini ad alta definizione integrato con VetConnect Plus Sediment Analysis < 1 min load-and-go (3 mins total) Physical analysis 1 min Chemical analysis 2 mins Integrated Results 0 mins 3 mins 29 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved.

30 Refertazione e qualita delle immagini Parametri Cellule sangue Batteri Cellule epteliali Cristalli Cilindri RBC WBC Rods Cocci Squamous Non-squamous CaOx Dihydrate Struvite Crystals Hyaline Non-Hyaline Microscope SediVue Dx

31 SediVue: campo microscopico (hpf) 40X Example: WBC algorithm 1 SediVue particle = 1 WBC 20 WBC 30 WBC 1 SediVue image + = 10 WBC 1/2 SediVue image 1 High Power Field of View

32 SediVue Eritrociti e Leucociti Eritrociti Leucociti

33 Eritrociti IDEXX SediVue Dx Analyzer image IDEXX SediVue Dx Analyzer image

34 Leucociti Erythrocytes Leukocytes IDEXX SediVue Dx Analyzer image IDEXX SediVue Dx Analyzer image

35 Batteri - bastoncelli IDEXX SediVue Dx Analyzer image IDEXX SediVue Dx Analyzer image

36 Batteri - bastoncelli IDEXX SediVue Dx Analyzer image Erythrocytes Leukocytes IDEXX SediVue Dx Analyzer image

37 Cilindri granulari SediVue Dx Microscopia automatizzata Microscopia manuale

38 Cilindri ialini SediVue Dx Microscopia automatizzata Microscopia manuale

39 Esperienza iniale al Texas A&M Al momento e in corso uno studio di comparazione al Texas A&M Valutazione microscopica standard di campioni di urina concentrata SediVue con 170 µl di urina ben mescolata non concentrata Dr. Annalisa Hernandez

40 Esperienza iniziale al Texas A&M Una delle prime impressioni Cilindri ialini

41 Cristalli di calcio ossalato diidrato SediVue Dx Microscopia automatizzata Microscopia manuale

42 Cristalli di struvite SediVue Dx Microscopia automatizzata Microscopia manuale

43 Cellule epiteliali squamose Squamous epithelial cells Nonsquamous epithelial cells IDEXX SediVue Dx Analyzer image IDEXX SediVue Dx Analyzer image

44 Nonsquamous epithelial cells Erythrocytes Epithelial cells IDEXX SediVue Dx Analyzer image IDEXX SediVue Dx Analyzer image

45 Cellule epiteliali non squamose Transitional cell carcinoma IDEXX SediVue Dx Analyzer image IDEXX SediVue Dx Analyzer image

46 Lieviti IDEXX SediVue Dx Analyzer image IDEXX SediVue Dx Analyzer image

47 Cristalli IDEXX SediVue Dx Analyzer image IDEXX SediVue Dx Analyzer image Cristalli di biurato di ammonio 47

48 Cristalli IDEXX SediVue Dx Analyzer image IDEXX SediVue Dx Analyzer image 48 Cristalli di carbonato di calcio

49 SediVue Dx Precisione Instrument Mean (/HPF) SD (/HPF) CV (%) Instrument 1 RBC Instrument 1 WBC Instrument 2 RBC Instrument 2 WBC

50 Gocce lipidiche IDEXX SediVue Dx Analyzer image IDEXX SediVue Dx Analyzer image 50

51 Spore fungine IDEXX SediVue Dx Analyzer image 51

52 Thanks for their contribution to: Dennis B. DeNicola DVM, PhD, DACVP Graham Bilbrough MA, VetMB, CertVA, MRCVS Thank you for your attention!