IVD DISCHI PER ANTIBIOGRAMMA CARTUCCIA DA 50 DISCHI STUDIO DI SENSIBILITÀ AGLI AGENTI ANTIMICROBICI. 1- INTERESSE CLINICO 2- PRINCIPIO
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- Ilaria Salvatori
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1 DISCHI PER ANTIBIOGRAMMA CARTUCCIA DA 50 DISCHI STUDIO DI SENSIBILITÀ AGLI AGENTI ANTIMICROBICI. IVD 1- INTERESSE CLINICO Questi dischi vengono impiegati per valutare in vitro in modo semi-quantitativo la sensibilità agli agenti antimicrobici dei batteri a crescita rapida e di alcune specie esigenti mediante una tecnica di diffusione in mezzo Agar. Tale metodo segue una procedura standardizzata pubblicata dall WHO 1 e adottata come norma consensuale sia dal CLSI/NCCLS 2 sia dal CA-SFM 3 (detta procedura viene aggiornata periodicamente). Consultare i documenti più recenti del CLSI/NCCLS 2, CA-SFM 3, BSAC 4 per le raccomandazioni relative all'esecuzione dell antibiogramma e alla sua interpretazione. 2- PRINCIPIO I dischi di carta impregnati di una determinata concentrazione di agente antimicrobico vengono posizionati sulla superficie di un mezzo adeguato (A) precedentemente inseminato mediante un inoculo calibrato (A) con una coltura pura del batterio da testare. Dopo l incubazione (A), si esaminano le piastre di Petri, si misurano gli aloni di inibizione intorno ai dischi e si confrontano con i valori critici (A) dei diversi agenti antimicrobici testati, al fine di determinare la classificazione clinica (resistente, intermedio, sensibile). Il diametro dell alone di inibizione è proporzionale alla sensibilità del batterio testato. (A) secondo le raccomandazioni in vigore (CLSI/NCCLS 2, CA-SFM 3, BSAC 4 ). 3- PRESENTAZIONE Si tratta di dischi da 6,5 mm prodotti a partire da carta assorbente di qualità superiore impregnati di agenti antimicrobici in precise concentrazioni. I dischi sono chiaramente identificati da una sigla, formata da 1 a 3 lettere, stampata su ciascun lato del disco (tabella 1). I dischi Bio-Rad sono presentati in cartucce da 50 dischi confezionati in contenitori a tenuta stagna contenenti un disidratante. Tabella 1 : Dischi per antibiogramma CARICA DEL DISCO SIMBOLO CONFEZIONE CODICE PRODOTTO Amikacin 30 µg AN 4x50 diski Amoxicillin 25 µg AMX 4x50 diski Amoxicillin + Clavulanic Acid µg AMC 4x50 diski Ampicillin 10 µg AM 4x50 diski Ampicillin + Sulbactam µg SAM 4x50 diski Azithromycin 15 µg AZM 4x50 diski Aztreonam 30 µg ATM 4x50 diski Bacitracin 130 µg / 10 IU B 4x50 diski Carbenicillin 100 µg CB 100 4x50 diski Cefaclor 30 µg CEC 30 4x50 diski Cefalexin 30 µg CN 4x50 diski Cefamandole 30 µg MA 4x50 diski Cefazolin 30 µg CZ 4x50 diski Cefepime 30 µg FEP 4x50 diski Cefixime 5 µg CFM 4x50 diski µg CFM 4x50 diski Cefoperazone 75 µg CFP 4x50 diski µg CFP 4x50 diski Cefotaxime 30 µg CTX 4x50 diski Cefotetan 30 µg CTT 4x50 diski Cefoxitin 30 µg FOX 4x50 diski Cefpirome 30 µg CPO 4x50 diski Cefpodoxime 10 µg CPD 4x50 diski
2 CARICA DEL DISCO SIMBOLO CONFEZIONE CODICE PRODOTTO Cefprozil 30 µg CPR 4x50 diski Cefsulodin 30 µg CFS 4x50 diski Ceftazidime 30 µg CAZ 4x50 diski Ceftibuten 30 µg CTB 4x50 diski Ceftriaxone 30 µg CRO 4x50 diski Cefuroxime 30 µg CXM 4x50 diski Cefalotin 30 µg CF 4x50 diski Chloramphenicol 30 µg C 4x50 diski Ciprofloxacin 5 µg CIP 4x50 diski Clarithromycin 15 µg CLR 4x50 diski Clindamycin 2 µg CM 4x50 diski Colistin 10 µg CS 4x50 diski µg CS 4x50 diski Doxycycline 30 µg DO 4x50 diski Ertapenem 10 µg ETP 10 4x50 diski Erythromycine 15 µg E 4x50 diski Flumequine 30 µg UB 4x50 diski Fosfomycin 50 µg FOS 4x50 diski µg FOS 200 4x50 diski Fusidic Acid 10 µg FA 4x50 diski Gentamicin 10 µg GM 4x50 diski µg / 10 IU GM 4x50 diski Gentamicin (high load) 120 µg GEN 120 4x50 diski µg GEN 500 4x50 diski Imipenem 10 µg IPM 4x50 diski Isepamicin 30 µg ISP 4x50 diski Kanamycin 30 µg K 4x50 diski Kanamycin (high load) 1mg KAN 4x50 diski Latamoxef (Moxalactam) 30 µg MOX 4x50 diski Levofloxacin 5 µg LVX 4x50 diski Lincomycin 15 µg L 4x50 diski Linezolid 30 µg LZD 30 4x50 diski Mecillinam 10 µg MEC 4x50 diski Meropenem 10 µg MEM 4x50 diski Metronidazole 4 µg MTR 4x50 diski Mezlocillin 75 µg MZ 4x50 diski Minocycline 30 µg MNO 4x50 diski Moxifloxacin 5 µg MXF 4x50 diski Mupirocin 5 µg MUP 4x50 diski Nalidixic Acid 30 µg NA 4x50 diski Neomycin 30 IU N 4x50 diski Netilmicin 30 µg NET 4x50 diski Nitrofurantoin 300 µg FT 4x50 diski Nitroxolin 20 µg NI 4x50 diski Norfloxacin 10 µg NOR 4x50 diski µg NOR 4x50 diski Ofloxacin 5 µg OFX 4x50 diski Oxacillin 1 µg OX1 4x50 diski µg OX 4x50 diski Oxolinic Acid 10 µg OA 4x50 diski Pefloxacin 5 µg PEF 4x50 diski Penicillin 6 µg / 10 IU P 4x50 diski Pipemidic Acid 20 µg PI 4x50 diski Piperacillin 100 µg PIP 4x50 diski µg PIP 4x50 diski Piperacillin + Tazobactam µg TZP 4x50 diski µg TZP 4x50 diski Polymixin 50 µg / 300 IU PB 4x50 diski Pristinamycin 15 µg PT 4x50 diski Rifampicin 5 µg RA 4x50 diski µg RA 4x50 diski
3 CARICA DEL DISCO SIMBOLO CONFEZIONE CODICE PRODOTTO Sparfloxacin 5 µg SPX 4x50 diski Spectinomycin 100 µg SPT 4x50 diski Spiramycin 100 µg SP 4x50 diski Streptomycin 10 µg S 4x50 diski Streptomycin (high load) 300 µg STR 4x50 diski µg STR 4x50 diski Sulfonamides 300 µg SSS 4x50 diski µg SSS 4x50 diski Teicoplanin 30 µg TEC 4x50 diski Tetracycline 30 µg TE 4x50 diski Ticarcillin 75 µg TIC 4x50 diski Ticarcillin + Clavulanic Acid µg TCC 4x50 diski Tobramycin 10 µg TM 4x50 diski Trimethoprim + Sulfamethoxazole µg SXT 4x50 diski Trimethoprim 5 µg TMP 4x50 diski Vancomycin 30 µg VA 4x50 diski * Le concentrazioni dei dischi secondo CLSI/NCCLS sono indicate in neretto 4- CONSERVAZIONE La data di scadenza si riferisce esclusivamente ai dischi contenuti nelle cartucce intatte conservate attenendosi alle istruzioni del produttore. La data di scadenza e il numero di lotto sono indicati su ogni confezione (cartuccia e contenitore). Le cartucce contenenti i dischi devono essere conservate nel loro contenitore ad una temperatura compresa tra + 2 e + 8 C in luogo asciutto. Portare i contenitori a temperatura ambiente (18-30 C) prima di aprirli, una volta completato il posizionamento dei dischi, riportare le cartucce inutilizzate a C. Non utilizzare i dischi dopo la data di scadenza. Non utilizzare cartucce di dischi rimaste a temperatura ambiente (18-30 C) per oltre 8 ore, o altrimenti controllare il livello di performance accettabile prima di continuare a utilizzarle (5). Se le cartucce vengono conservate nel distributore una volta depositati i dischi è necessario conservare il distributore stesso a C in luogo asciutto con essiccante all interno. La stabilità dei dischetti nella cartuccia aperta e posta nel distributore (conservato con essicante secondo le raccomandazioni) è 4 wks stata validata per 6 settimane in condizioni di routine, ad eccezione dei dischi antibiotici contrassegnati dal simbolo la cui stabilità verrà indicata nelle prossime settimane all'interno del relativo riquadro. 5- MATERIALE NECESSARIO, MA NON FORNITO distributore di dischi: 6 dischi Cod dischi Cod dischi Cod mezzi di coltura (secondo le raccomandazioni in vigore (CLSI/NCCLS 2, CA-SFM 3, BSAC 4 ) reagenti ceppi batterici per il controllo di qualità indicatore di opacità equivalente allo standard Mac Farland 0.5 materiale di laboratorio necessario per eseguire gli antibiogrammi mediante tecnica di diffusione in mezzo Agar. 6- PRECAUZIONI PER L USO Seguire le istruzioni di utilizzo indicate nelle raccomandazioni in vigore (CLSI/NCCLS 2, CA-SFM 3, BSAC 4 ). Rispettare per ciascuna fase le tecniche e le precauzioni in vigore in materia di protezione contro i pericoli microbiologici. Dopo l uso, sterilizzare le colture e tutto il materiale contaminato. 7- MODO OPERATIVO Campioni: i dischi non devono essere utilizzati per test eseguiti direttamente su campioni biologici. Fare riferimento alle raccomandazioni in vigore (CLSI/NCCLS 2, CA-SFM 3, BSAC 4 ) nelle quali sono precisati i metodi di preparazione dell inoculo a partire da una coltura pura e nuova. Fare riferimento alle istruzioni raccomandate dal CLSI/NCCLS 2, CA-SFM 3, BSAC 4 per tutte le fasi da seguire per effettuare l antibiogramma e ricavare i risultati: il CLSI/NCCLS 2, CA-SFM 3, BSAC 4 propongono un metodo standard per la preparazione dell inoculo, la semina sulle piastre di Petri, la scelta e la disposizione dei dischi da sottoporre a test, la temperatura e la durata dell incubazione. Si consiglia di applicare nel contempo le buone pratiche di laboratorio. 3
4 8- INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI Misurare con precisione il diametro delle zone di inibizione osservate e fare riferimento ai diametri critici forniti dalle linee guida in vigore (CLSI/NCCLS 2, CA-SFM 3, BSAC 4 ). Per un dato micro-organismo, viene fornita una classificazione clinica (resistente intermedio, sensibile o non sensibile) in funzione del diametro osservato e dei diametri critici dell antibiotico testato. Detti criteri di classificazione clinica in base ai diametri critici vengono aggiornati periodicamente dal CLSI/NCCLS 2, CA-SFM 3, BSAC PERFORMANCE/CONTROLLO QUALITÀ Le prestazioni dei dischi antibiotici sono controllate sistematicamente servendosi dei seguenti ceppi: Escherichia coli ATCC Staphylococcus aureus ATCC Pseudomonas aeruginosa ATCC Neisseria gonorrhoeae ATCC Enterococcus faecalis ATCC Enterococcus faecalis ATCC Clostridium perfringens ATCC Clostridium sporogenes ATCC La tabella 2 riassume i limiti accettabili dei diametri di inibizione ottenuti mediante diffusione in mezzo Agar per i ceppi di riferimento di seguito indicati Carica Norma Limiti accettabili dei diametri di inibizione (mm) dei dischi E. coli ATCC S. aureus ATCC P. aeruginosa ATCC Amikacin 30 µg CLSI/NCCLS Amoxicillin 25 µg CA-SFM Amoxicillin + clavulanic acid 20 / 10 µg CLSI/NCCLS Ampicillin 10 µg CLSI/NCCLS Ampicillin + sulbactam 10 / 10 µg CLSI/NCCLS Azithromycin 15 µg CLSI/NCCLS Aztreonam 30 µg CLSI/NCCLS Bacitracin 10 UI Interna Carbenicillin 100 µg CLSI/NCCLS Cefaclor 30 µg CLSI/NCCLS Cefalexin 30 µg Interna Cefalotin 30 µg CLSI/NCCLS Cefamandole 30 µg CLSI/NCCLS Cefazolin 30 µg CLSI/NCCLS Cefepime 30 µg CLSI/NCCLS Cefixime 10 µg Interna Cefixime 5 µg CLSI/NCCLS Cefoperazone 30 µg Interna Cefoperazone 75 µg CLSI/NCCLS Cefotaxime 30 µg CLSI/NCCLS Cefotetan 30 µg CLSI/NCCLS Cefoxitin 30 µg CLSI/NCCLS Cefpirome 30 µg Interna Cefpodoxime 10 µg CLSI/NCCLS Cefprozil 30 µg CLSI/NCCLS Cefsulodin 30 µg Interna Ceftazidime 30 µg CLSI/NCCLS Ceftibuten 30 µg CLSI/NCCLS Ceftriaxone 30 µg CLSI/NCCLS Cefuroxime 30 µg CLSI/NCCLS Chloramphenicol 30 µg CLSI/NCCLS Ciprofloxacin 5 µg CLSI/NCCLS Clarithromycin 15 µg CLSI/NCCLS Clindamycin 2 µg CLSI/NCCLS Colistin 10 µg CLSI/NCCLS Colistin 50 µg CA-SFM Doxycycline 30 µg CLSI/NCCLS Ertapenem 10 µg CLSI/NCCLS Erythromycine 15 µg CLSI/NCCLS Flumequine 30 µg Interna Fosfomycin 50 µg CA-SFM Fosfomycin 200 µg CLSI/NCCLS Fusidic acid 10 µg CA-SFM Gentamicin 10 µg CLSI/NCCLS Gentamicin 10 UI CA-SFM
5 Carica Norma Limiti accettabili dei diametri di inibizione (mm) dei dischi E. coli ATCC S. aureus ATCC P. aeruginosa ATCC Imipenem 10 µg CLSI/NCCLS Isepamicin 30 µg Interna Kanamycin 30 µg CLSI/NCCLS Latamoxef (Moxalactam) 30 µg CLSI/NCCLS Levofloxacin 5 µg CLSI/NCCLS Lincomycin 15 µg CA-SFM Linezolid 30 µg CLSI/NCCLS Mecillinam 10 µg CLSI/NCCLS Meropenem 10 µg CLSI/NCCLS Mezlocillin 75 µg CLSI/NCCLS Minocycline 30 µg CLSI/NCCLS Moxifloxacin 5 µg CLSI/NCCLS Mupirocin 5 µg Interna Nalidixic Acid 30 µg CLSI/NCCLS Neomycin 30 UI Interna Netilmicin 30 µg CLSI/NCCLS Nitrofurantoin 300 µg CLSI/NCCLS Nitroxolin 20 µg Interna Norfloxacin 5 µg Interna Norfloxacin 10 µg CLSI/NCCLS Ofloxacin 5 µg CLSI/NCCLS Oxacillin 5 µg CA-SFM Oxacillin 1 µg CLSI/NCCLS Oxolinic Acid 10 µg Interna Pefloxacin 5 µg CA-SFM Penicillin 6 µg/10 UI CLSI/NCCLS Pipemidic Acid 20 µg Interna Piperacillin 100 µg CLSI/NCCLS Piperacillin 75 µg CA-SFM Piperacillin + tazobactam 75 / 10 µg Interna Piperacillin + tazobactam 100 / 10 µg CLSI/NCCLS Polymixin 300 UI CLSI/NCCLS Pristinamycin 15 µg CA-SFM Rifampicin 5 µg CLSI/NCCLS Rifampicin 30 µg CA-SFM Sparfloxacin 5 µg CLSI/NCCLS Spectinomycin 100 µg Interna Spiramycin 100 µg Interna Streptomycin 10 µg CLSI/NCCLS Sulfonamides 300 µg CLSI/NCCLS Sulfonamides 200 µg Interna Teicoplanin 30 µg CLSI/NCCLS Tetracycline 30 µg CLSI/NCCLS Ticarcillin 75 µg CLSI/NCCLS Ticarcillin + clavulanic acid 75 / 10 µg CLSI/NCCLS Tobramycin 10 µg CLSI/NCCLS Trimethoprim 5 µg CLSI/NCCLS Trimethoprim + sulfamethoxazole 1.25 / µg CLSI/NCCLS Vancomycin 30 µg CLSI/NCCLS Per il controllo qualità (norma interna) : Gentamicin 120 µg : E. faecalis ATCC (16-23 mm) Streptomycin 300 µg : E. faecalis ATCC (14-20 mm) Gentamicin 500 µg : S. aureus ATCC (30-34 mm) ; E. faecalis ATCC ( mm) Kanamycin 1 mg : S. aureus ATCC ( 14 mm) ; E. faecalis ATCC ( 10 mm). Streptomycin 500 µg : S. aureus ATCC (24-28 mm) ; E. faecalis ATCC (14-25 mm). Metronidazole 4µg : Clostridium perfringens ATCC 13124, Clostridium sporogenes ATCC mm Haemophilus influenzae ATCC è raccomandato come ceppo di controllo di qualità aggiuntivo utile per verificare le proprietà nutrizionali del mezzo HTM. Nonostante non si disponga di criteri di interpretazione affidabili per lo S. pneumoniae con alcuni ß-lattamici, Streptococcus pneumoniae ATCC è il ceppo indicato per il controllo di qualità di tutti i test di antibiogramma per lo Streptococcus spp. Neisseria gonorrhoeae ATCC è raccomandato per i test dei dischi di spectinomicina con un diametro accettabile pari a mm (CLSI/NCCLS). 5
6 Il deterioramento della carica dei dischi di 1 µg ossacilina si può stabilire nel modo migliore con lo Staphylococcus aureus ATCC con un diametro pari a mm. 10-CONTROLLO QUALITÀ DEL PRODUTTORE Tutti i prodotti fabbricati e commercializzati dalla società Bio-Rad sono sottoposti ad un sistema di assicurazione di qualità dal ricevimento delle materie prime fino alla commercializzazione dei prodotti finiti. Ciascun lotto di prodotto finito è soggetto a un controllo di qualità e viene messo in commercio soltanto se risulta conforme ai criteri di approvazione. La documentazione relativa alla produzione e al controllo di ciascun lotto è conservata presso il produttore. 11-LIMITI DI UTILIZZO Le classificazioni cliniche (resistente, intermedio, sensibile e non sensibile) possono variare soltanto di un millimetro, corrispondente ad un normale margine di errore in laboratorio. Possono altresì essere utilizzati altri agenti anti-microbici oltre a quelli citati nella tabella 2. I test di sensibilità a tali agenti devono essere interpretati basandosi sulla presenza o assenza di una zona di inibizione precisa e devono essere considerati esclusivamente come test qualitativi in attesa che vengano determinate le zone di interpretazione. Rilevare tutti i diametri delle zone di interpretazione. L interpretazione finale, come per tutte le interpretazioni in campo biologico, non può essere stabilita in base al risultato di un solo test, bensì in base ad un insieme di dati clinici e di risultati biochimici, citologici e immunologici. Le performance del test non dipendono solo dall attività dei dischi, ma anche da fattori quali l utilizzo di un inoculo, di ceppi di controllo adeguati, di mezzi di coltura idonei precedentemente testati e di una temperatura di stoccaggio adeguata. 12-BIBLIOGRAFIA 1.World Heath Organization Expert Committee on Biological Standardization Technical report series 822. W-H.O., Geneva. 2.National Committee for Clinical Laboratory Standards Approved standard M2-A7. Performance standards for antimicrobial susceptibilitity tests, 7th ed. NCCLS, Wayne, Pa. 3.National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS document M100-S12. Performance standards for antimicrobial susceptibilitity testind, 12th informational, Wayne, Pa. 4.Comité de l antibiogramme French Society of Microbiolgoy. 5.V. Loncle-Provot, E. Keller, M.O. Gourdin, M.L. Garrigues, Etude de la stabilité des diski antibiotiques dans les conditions d'utilisation en routine, 18th interdisciplinary meeting on anti-infectious chemotherapy, Paris, dec.3/ WHO : World Health Organization (Organizzazione Mondiale della Sanità) 2 CLSI/NCCLS : Clinical and Laboratory Standards Institute / National Committee for Clinical Laboratory Standards 3 CA-SFM : Comité de l Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie 4 BSAC : British Society for Antimicrobial Chemotherapy Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) /2006 Fax : +33 (0)
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