22q11.2 MICRODELETIONS AND MILD HYPOTHYROIDISM IN PEDIATRIC PATIENTS WITH CONGENITAL HEART DEFECTS

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1 22q11.2 MICRODELETIONS AND MILD HYPOTHYROIDISM IN PEDIATRIC PATIENTS WITH CONGENITAL HEART DEFECTS Marcello Frigerio Laboratorio di Biologia Molecolare IRCCS Policlinico San Donato

2 Sindrome da Delezione 22q Clinica Ritardo del Linguaggio e Psicomotorio (68%) Disturbi Psichiatrici (10%) Difetti Endocrini: Ipoparatiroidismo Ipotiroidismo Anomalie Apparato Genito-Urinario (36%) Espressività Clinica Altamente Variabile Dismorfismi Facciali Malformazioni Cardiache (80%) Alterazioni del Tronco Cono Tronco Arterioso Tetralogia Fallot IAA Gothelf D. Dev Disabil Res Rev Page 2 Momma K. Am J Cardiol

3 Sindrome da Delezione 22q Genetica Incidenza: 1/4000 nati vivi Frequentemente Sporadica Trasmissione Aut. Dominante Caratteristiche Alterazioni: del classica 3Mb (90%) del 1,5Mb (7%) del distali Metodiche di Rilevazione: FISH CGH-Array qpcr Page 3 Heather E. Am J Hum Genet

4 Scopo dello Studio Sperimentare i vantaggi della metodica di RealTime PCR quantitativa, come test di screening per la rilevazione di microdelezioni 22q11.2 su ampia casistica di pazienti pediatrici affetti da difetti cardiaci congeniti. Page 4

5 Real-time PCR Quantitativa (qpcr) D22S181 PRODH TUPLE1 COMT PRINCIPIO Amplificazione in SYBR Green di 6 Marcatori nella regione 22q11.2 e confronto con Geni Housekeeping RISULTATO D22S936 VPREB1 Numero di copie alleliche del marcatore nel genoma: 1 copia = microdelezione 2 copie = wild type 3 copie = microduplicazione Weksberg Page 5 R. BMC Genomics Weksberg R. Hum Genetics

6 FISH vs CGH Array vs Real-time PCR quantitativa FISH CGH Array Real-time PCR quantitativa Costo Alto Alto Basso Tempistica Giorni Giorni Ore Materiale biologico di Partenza Specifico (no studio retrospettivo) Generico (sì studio retrospettivo) Generico (sì studio retrospettivo) Localizzazione genomica Rilevazione qualitativa del3mb-1,5mb Rilevazione delezioni rare e distali Rilevazione quantitativa (estensione del) Test Screening Page 6

7 Casistica Pazienti Cardiochirurgia Pediatrica Totale Pazienti N = 325 Maschi/Femmine 165/160 Età media (anni) 5.62 ± 4.14 Difetto Cardiaco del Tronco-Cono 117/325 (36%) Altri Difetti Cardiaci Congeniti 208/325 (64%) Casistica Analisi Genetica Scelta di marcatore clinico facilmente accessibile: funzione tiroidea (TSH, FT4) per selezionare tra i 325 pz quelli più a rischio di DGS Page 7 Livelli sierici di TSH = più sensibili rispetto a PTH

8 Risultati Valutazione Endocrina Nella coorte in studio di 325 bambini arruolati sono stati individuati iduati 37 bambini (11.5%) con Ipotiroidismo Subclinico Caratteristica Clinica/Dosaggio Ipotiroidei Subclinici Eutiroidei P TSH (µu/ml) FT4 (ng/ml) 4.95 ( ) 1.34 ( ) 1.47) 1.96 ( ) < ( ) 1.52) ns Ecografia Tiroidea Nella rma - - Page 8 Pz Ipotiroidei Subclinici normali a screening neonatale (ipotiroidismo late-onset) correlazione assetto endocrino malformazione cardiaca

9 Risultati Analisi Genetica 3 pazienti (prevalenza 8.6%) con delezione classica di 3 Mb (confermata in FISH) Età (anni) M/F M M F Difetto Cardiaco Tronco Arterioso Comune DIV DIA Tipici Dismorfismi Facciali Ritardo del linguaggio Assetto Endocrino Ipotiroidismo Subclinico Ipotiroidismo Subclinico Ipotiroidismo Subclinico Page 9

10 Conclusioni 1. Difetti nella funzione tiroidea sono frequenti (11.5%) nella popolazione di pazienti con malformazioni cardiache congenite. 2. Nell 8.6% dei casi l associazione l alterazioni endocrine e difetti cardiaci congeniti è sostenuta da microdelezioni della regione 22q La metodica di qpcr appare come una metodica robusta e affidabile che offre notevoli vantaggi in termini di costi e tempistica; potrebbe quindi rappresentare una valida alternativa alle tecniche di ibridizzazione in situ Page 10

11 Laboratorio Biologia Molecolare IRCCS San Donato Dott.ssa Elena Costa Dott.ssa Rea Valaperta Dott. Paolo Capelli Dipartimento di Endocrinologia IRCCS San Donato Dott.ssa Sabrina Corbetta Dott.ssa Elena Passeri Dipartimento di Cardiochirurgia Pediatrica IRCCS San Donato Dott. Mario Carminati Dott. Carmelo Arcidiacono