LABORATORIO NAZIONALE DI RIFERIMENTO PER LE MICOTOSSINE Resoconto attività anno 2009 e programma anno 2010

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1 Laboratorio Nazionale di Riferimento per le Micotossine Dipartimento di sanità Publica Veterinaria e Sicurezza Alimentare Istituto Superiore di Sanità LABORATORIO NAZIONALE DI RIFERIMENTO PER LE MICOTOSSINE Resoconto attività anno 2009 e programma anno 2010 Indice Pag. - Attività svolta nell anno Attività 2 2. Aggiornamento e formazione professionale 8 3. Consuntivo Spese Pubblicazioni 11 - Programmazione attività per l anno Allegato: Resoconto dei dati raccolti dalle risposte al questionario inviato agli II.ZZ.SS 13 1

2 ATTIVITÀ SVOLTA NELL ANNO 2009 Il Dipartimento di Sanità Pubblica Veterinaria e Sicurezza Alimentare DSPVSA (ex Centro Nazionale per la Qualità e per i Rischi Alimentari CNQRA) è stato designato Laboratorio Nazionale di Referenza per le Micotossine (LNR Micotossine) dal Ministero della Salute in ottemperanza al Regolamento 882/2004. LNR Micotossine opera principalmente con la finalità di formare ed informare le strutture laboratoristiche che operano sul territorio nazionale relativamente alle attività di controllo ufficiale effettuate sugli alimenti e sui mangimi per il controllo delle micotossine. È inoltre compito del LNR Micotossine lo sviluppo di attività legate alla valutazione del rischio da micotossine derivante dal consumo di alimenti e mangimi. Nel corso del 2009, LNR Micotossine ha svolto la propria attività nei seguenti settori: 1. Attività correlate alla standardizzazione dei metodi di analisi e studi interlaboratorio 2. Aggiornamento e formazione 1. ATTIVITÀ 1.1 Rete del Sistema Sanitario Nazionale In accordo con l articolo 33 del Regolamento 882/2004, è compito del Laboratorio Nazionale di Riferimento coordinare, nella loro sfera di competenza, le attività dei laboratori ufficiali responsabili dell analisi dei campioni a norma dell articolo 11; e c) se del caso, organizza test comparativi tra i laboratori nazionali ufficiali e assicurano un adeguato follow-up dei test comparativi effettuati. (comma 2 e 3). A tale scopo l LNR Micotossine ha aperto, con i Laboratori responsabili delle analisi per le Micotossine presso gli Istituti Zooprofilattici Sperimentali, un dialogo per venire a conoscenza delle realtà locali e per registrare le esigenze in termini di metodiche, studi collaborativi o proficiency testing. A tale proposito, è stata indetta presso l ISS una prima riunione in data 8 marzo

3 1.2 Sorveglianza Nell ambito dei programmi di sorveglianza finalizzati alla valutazione del rischio da micotossine, l LNR ha condotto uno studio per la valutazione della contaminazione da ocratossina A (OTA) in prodotti commerciali a base di cacao. Lo studio iniziato nel 2008 e concluso nel 2009, ha fornito utili informazioni sulla esposizione del consumatore italiano alla OTA derivante dal consumo di cioccolato e cacao. Il documento finale è stato consegnato all Autorità Competente (Ministero Salute) con lettera protocollo ISS 25256/CNRA-AL.22 - ocratossina A (OTA) nei prodotti di cacao. Su valutazione del Consiglio Superiore della Sanità, lo studio è stato giudicato esaustivo per portare alla definitiva abrogazione della circolare n.6 del 2003 che fissava i limiti massimi nel cacao e cioccolato. 1.3 Attività ufficiale Le attività di controllo ufficiale, l emissione di pareri e le analisi di revisione espletate nell anno 2009 dal Reparto OGM e Micotossine, sede del LNR, sono elencate nelle liste riportate di seguito. Lista delle analisi di revisioni riguardanti l analisi delle micotossine richieste nel 2009 MATRICE ANALITA ESITO PISTACCHI AFB1 - AF TOTALI NON FAV PISTACCHI SGUSCIATI AFB1 - AF TOTALI NON FAV PISTACCHI AFB1 - AF TOTALI NON FAV MANDORLE SGUSCIATE AFB1 - AF TOTALI NON FAV SALSA DI NOCI AFB1 - AF TOTALI FAV MANDORLE SGUSCIATE AFB1 - AF TOTALI NON FAV PISTACCHI AFB1 - AF TOTALI NON FAV PISTACCHI SGUSCIATI AFB1 - AF TOTALI NON FAV PISTACCHI SGUSCIATI AFB1 - AF TOTALI NON FAV MAIS AF B1 FAV FARINA TIPO"0" DON NON FAV GRANO DON FAV LATTE BOVINO AFM1 FAV FARINA DI MAIS BRAMATA Fumonisine NON FAV 3

4 Lista dei Pareri richiesti nel 2009 Fissazione di un tenore massimo di OTA per le spezie e la liquerizia Stabilimento in grado di effettuare la cernita ed ogni altro trattamento fisico per ridurre i tenori di Aflatossine (p.c) secondo sollecito (prot del 14/12/2009 Zearalenone in crusca di grano e in cereali da colazione ad alto contenuto di fibre. Applicazione di limiti massimi temporanei (e.p.c) Schema di circolare riguardante "Abrogazione dei tenori massimi di OTA nei prodotti a base di cacao. Allineamento con UE Deossinivalenolo in pasta dall'italia Fumonisine in farina di mais per polenta applicazione del reg. Ce n.1126/2007 Richiesta di indagine conoscitiva sulla esposizione all'ota nel cacao e nei prodotti a base di cacao Abrograzione tenori massimi di OTA nel cacao. Allineamento con UE. Reg CE n.1152/ elenco dei punti designati per i controlli all'importazione in Italia di determinati prodotti alimentari da alcuni paesi terzi a causa del rischio di contaminazione da aflatossine e p.c. 1.4 Accreditamento Al fine di fornire prestazioni e risultati di laboratorio qualificati e riconosciuti in ambito nazionale e internazionale, LNR Micotossine si è allineato al sistema qualità del Dipartimento entrato in vigore il 24/04/2009 che garantisce una politica della qualità conforme alla norma UNI CEI EN ISO/IEC Il Dipartimento di Sanità Pubblica Veterinaria e Sicurezza Alimentare, è ad oggi accreditato dal Sistema Italiano di Accreditamento ACCREDIA con numero di accreditamento N Metodi accreditati/in accreditamento/sotto Sistema Gestione Qualità (SGQ) I metodi analitici applicati dal LNR Micotossine ricadono tutti sotto il Sistema Gestione Qualità. Nella Tabella 1 sottostante sono riportati in elenco le prove accreditate ACCREDIA che il LNR micotossine esegue. 4

5 Tabella 1. Metodi accreditati ACCREDIA. Materiale / prodotto / matrice Denominazione della prova Mais e mangimi Aflatossina B 1 Norma / metodo di riferimento OG-Met,AF.IV /anno 2006 (J.AOAC Int, vol 86, No6, 2003) Accreditato/ in accreditamento/ accreditato Burro di arachidi, pasta di pistacchio, Aflatossine B 1G 1B 2G 2 UNI EN 14123:2008 accreditato Latte e latte in polvere Aflatossina M 1 UNI EN 14501:2008 accreditato Grano e prodotti derivati Ocratossina A OG-Met,OTA.IV/2006 (estensione del metodo UNI EN14132:2003) accreditato Grano e prodotti derivati Deossinivalenolo OG-Met,DON-I/2006 CEN /TC 275 N 285TC (J. AOAC Int, 88, 4, 2005). accreditato Nella Tabella 2, di seguito riportata, sono invece indicati i metodi che il laboratorio esegue nell ambito delle attività ufficiali ma che non sono sotto accreditamento. Tabella 2. Metodi sotto Sistema Qualità, non accreditati. Materiale / prodotto / matrice Pasta di fichi, paprica, nocciole Denominazione della prova Norma / metodo di riferimento Aflatossine B1G1B2G2 UNI EN 14123:2008 Accreditato/ in accreditamento/ Nocciole,mandorle,farina di castagne Aflatossine B1G1B2G2 UNI EN 14123:2008 Orzo e caffè tostato Ocratossina A UNI EN 14132:2003 Cacao Ocratossina A Metodo interno validato (J liquid chromatography & related technologies vol. 26, no. 4, 2003) Vino e birra Ocratossina A UNI EN 14133:2003 Paprika Ocratossina A Metodo interno validato (estensione metodo CRL per la determinazione di Ocratossina nei mangimi) Alimenti destinati ai lattanti e bambini Aflatossina B1 e Ocratossina A Metodo interno in corso di validazione (estensione metodo DRAFT pren 15851/2008) Succo e purea di mela Patulina UNI EN 14177:2004 Orzo, mais, farina di frumento, e alimenti a base di Zearalenone TC 275 WI : cereali per lattanti e bambini 5

6 Mais e prodotti derivati Fumonisine B1 e B2 UNI EN 14352:2005 Mais e avena Deossinivalenolo Metodo interno validato (metodo R-Biopharm Rhone o equivalente) Grano e avena Tossine T-2 e HT-2 Metodo interno validato (metodo R-Biopharm Rhone o equivalente) 1.5 Standardizzazione di metodiche e ring trial Organizzazione di studi di validazione e ring test Nell ambito dello sviluppo di attività finalizzate alla diffusione di strumenti diagnostici utili ai fini del controllo ufficiale, LNR Micotossine ha iniziato un lavoro sistematico di validazione in house di metodi multimicotossina. Tali metodi multimicotossina risultano particolarmente utili nell analisi di alcune delle matrici per le quali sussistono limiti di legge per micotossine diverse. I. Studio di validazione metodo multimicotossina AFs-OTA per HPLC in baby food e paprica. II. Studio di validazione metodo HPLC multimicotossina la determinazione simultanea di Zearalenone, Deossinivalenolo, T2 e HT2 nei mangimi. La validazione dei metodi in house segue le fasi indicate nella procedura generale di Reparto. Il Reparto OGM e Micotossine da tempo organizza nell ambito di progetti di ricerca studi di validazione di metodi per l analisi di micotossine. Nell anno 2009, sono stati organizzati due studi coinvolgendo i laboratori del Servizio Sanitario Nazionale e laboratori privati nazionali ed internazionali che si occupano di micotossine; ciò è stato fatto sia nell ambito delle attività dell LNR che nell ambito dell espletamento di attività legate a progetti di ricerca. Nel 2009 sono stati condotti i seguenti studi di validazione interlaboratorio: 1. Metodo in HPLC per la determinazione dell Ocratossina A in campioni di prosciutto crudo 2. Metodo immunoenzimatico per la determinazione del deossinivalenolo (DON) in campioni di grano tenero (2008/2009) 6

7 1.5.2 Partecipazione a studi interlaboratorio Il LNR Micotossine partecipa regolarmente a circuiti inerlaboratorio al fine di mantenere il controllo di qualità esterno. Inoltre, l LNR partecipa costantemente anche all attività di organizzata dal Laboratorio Comunitario (CRL Mycotoxin JRC-Geel) per la validazione di metodi per le micotossine. Durante l anno 2009, la partecipazione del LNR ha riguardato gli studi e ring test di seguito riportati. Nella lista sono indicati anche i valori degli z-score ottenuti che in tutti i casi sono risultati più che soddisfacenti essendo compresi fra -1 e +1) 2008/2009 Proficiency Testing of National Reference Laboratories (NRLs) on Deoxynivalenol (DON) in cereal product, organizzato da CRL Mycotoxin JRC-Geel. Collaborative trial for the determination of Ochratoxin A in animal feed, organizzato da CRL Mycotoxin JRC-Geel. Ochratoxin A in baby food proficiency test 1772 FAPAS, Central Science Laboratory, Sand Hutton, York, UK (z score =0,5). Ochratoxin A in baby food proficiency test 1778 FAPAS, Central Science Laboratory, Sand Hutton, York, UK (z score =0,2). Ochratoxin A in paprika proficiency test 1773 FAPAS, Central Science Laboratory, Sand Hutton, York, UK (z score=0,6). Aflatoxin analysis proficiency test 4133 FAPAS, Central Science Laboratory, Sand Hutton, York, UK (z score=1,0). Ochratoxin A in wine proficiency test 1775 FAPAS, Central Science Laboratory, Sand Hutton, York, UK (z score=0,3). Aflatoxin analysis in Maize proficiency test 4122 FAPAS, Central Science Laboratory, Sand Hutton, York, UK (z score=0,2). Aflatoxin analysis in animal feed (cereal based) proficiency test 4124 FAPAS, Central Science Laboratory, Sand Hutton, York, UK (z score=1,0). Aflatoxin analysis in maize (cereal based) proficiency test 4148 FAPAS, Central Science Laboratory, Sand Hutton, York, UK (z score=0,7). 7

8 Deoxynivalenol in Wheat flour proficiency test 2247 FAPAS, Central Science Laboratory, Sand Hutton, York, UK (z score=0,5). Deoxynivalenol in Wheat flour proficiency test 2259 FAPAS, Central Science Laboratory, Sand Hutton, York, UK (z score=0,6). Aflatoxin M1 analysis in milk proficiency test 4146 FAPAS, Central Science Laboratory, Sand Hutton, York, UK (z score=0,2). 2. AGGIORNAMENTO E FORMAZIONE PROFESSIONALE 1.1 Organizzazione di eventi Nei giorni settembre 2009, ha avuto luogo, presso l Istituto Superiore di Sanità,, il III Congresso Nazionale: Le Micotossine nella Filiera Agro-alimentare e Zootecnica. L evento, di risonanza nazionale, ha riscosso anche in questa sua terza edizione un pieno successo. Nell ambito del Congresso,le attività del LNR sono state oggetto di una comunicazione orale, in cui è stato presentato anche il nuovo sito web del LNR ( 1.2 Sito web Tale sito è attivo presso il sito web dell Istituto Superiore di Sanità ( con un link specifico del Laboratorio Nazionale di Riferimento ( E in continua evoluzione per il suo miglioramento grazie al lavoro costante di aggiornamento e ottimizzazione realizzato dal personale del Reparto. E stato predisposta l attivazione di una piattaforma dedicata ai laboratori del Sistema Sanitario Nazionale con entrata riservata e controllata la cui attivazione è predisposta per coloro che si iscrivono seguendo le istruzioni indicate. Descrizione delle sezioni componenti le finestre attive del SITO INTERNET LNR- MICOTOSSINE Chi siamo Attività di controllo Metodi di analisi Pubblicazioni Documenti 8

9 Eventi Normativa Link Mycotoxin Newsletter! General informations Recent mycotoxin publication Research projects on mycotoxins Upcoming events Mycotoxin regulation Documents News Link 1.3 Relazioni a convegni o corsi o o o o o o o o Valutazione del rischio da micotossine in alimenti e mangimi: analisi critica dei risultati ottenuti dai progetti di ricerca nazionali ed europei (Dr.ssa Marina Miraglia) Nuovi approcci per la valutazione del rischio da micotossine (Dr.ssa Francesca Debegnach) Valutazione della esposizione della popolazione italiana alla ocratossina A nel cacao e nel cioccolato (Dr Carlo Brera) Micotossine ed autismo (Maria Elisabetta Raggi, IRCCS E. Medea, Dr.ssa Barbara De Santis, ISS) Valutazione comparativa dell'incidenza di micotossine fra le pratiche di produzione di mais convenzionale, biologico e biotecnologico (Dr.ssa Barbara De Santis, ISS) Come utilizzare i risultati ottenuti nei progetti di ricerca nazionali e valutazione delle prospettive future (Dr. Carlo Brera) Laboratorio Nazionale di Riferimento - un anno di attività (Dr.ssa Barbara De Santis, ISS) Applicazione delle procedure di campionamento: a che punto siamo? (Dr. Carlo Brera, ISS) 9

10 3. Consuntivo spese 2009 Si riportano i costi relativi al mantenimento delle attività descritte, rilevando che tali risorse finanziarie non scaturiscono da finanziamento dedicato. Tabella 3. Personale impiegato nelle attività del LNR Personale (Nominativo) Qualifica Tipologia di contratto Attività svolta M. Miraglia Dirigente T.ind. Dirigente Coordinamento C. Brera Primo ricercatore T.ind. attività di formazione Coordinamento attività standardizzazione metodi e ring trial B. De Santis Ricercatore T.ind. Coordinamento attività accreditamento F. Debegnach Ricercatore T.d Attività standardizzazione metodi e ring trial E. Gregori Ricercatore T.d Attività di accreditamento E. Pannunzi Ricercatore Borsista Attività standardizzazione metodi e ring trial E. Prantera Ricercatore Borsista Attività standardizzazione metodi e ring trial Dove T.ind: personale dipendente a tempo indeterminato; T.d.: personale dipendente a tempo determinato. Costo medio annuo % utilizzo Costo TOTALE ,00 Totale Spese Personale: Tabella 4. Ammortamento attrezzature, materiali di consumo, spese per ring test Voce Costo ( ) Manutenzioni strumenti Materiale di consumo Missioni Totale Spese:

11 4. PUBBLICAZIONI Carlo Brera, Francesca Debegnach, Barbara De Santis, Elena Pannunzi, Clara Berdini, Elisabetta Prantera, Marina Miraglia; Validazione di metodi immunoenzimatici per la determinazione delle micotossine in campioni di cereali, 2009, in Micotossine nei cereali Quaderno IV_2008, Accademia dei Georgofili ISTISAN Congressi: 09/C6 II Congresso Nazionale. Le micotossine nella filiera agro-alimentare 11

12 PROGRAMMAZIONE ATTIVITÀ 2010 Nella programmazione delle attività di futuri studi di validazione e/o proficiency test, l LNR terrà conto anche delle esigenze espresse dalla rete dei laboratori coinvolti nel controllo ufficiale per l analisi delle micotossine. Come precedentemente riportato, nel marzo 2009 è stata indetta la prima riunione che ha visto tra gli argomenti trattati anche la programmazione delle attività di lavoro sulla base delle indicazioni risultate dal questionario inviato dall LNR a tutti gli IIZZSS che hanno provveduto alla relativa elaborazione. (Marzo Questionario per lo studio di validazione interlaboratorio). Per l anno 2010/2011 si prevede l organizzazione delle seguenti attività: Convocazione di una seconda riunione con gli Istituti Zooprofilattici e Ministero Salute per la programmazione delle attività relative a studi di Validazione e/o Proficiency Test. Organizzazione di due studi collaborativi che saranno scelti fra quelli selezionati nell ambito delle riunioni con la rete del Sistema Sanitario Nazionale. Programmazione di un piano di formazione per personale dei Laboratori del Sistema Sanitario Nazionale. 12

13 ALLEGATO RESOCONTO DEI DATI RACCOLTI DALLE RISPOSTE AL QUESTIONARIO INVIATO AGLI II.ZZ.SS. NEL MARZO 2009 Nella programmazione delle attività di coordinamento della rete dei laboratori nazionali del SSN coinvolti nelle attività di controllo ufficiale, il Laboratorio Nazionale di Riferimento (LNR) per l analisi delle micotossine in alimenti e mangimi ha iniziato a prendere contatti con la rete degli Istituti Zooprofilattici Sperimentali. Tale attività proseguirà nel tempo, con scadenza annuale, coinvolgendo tutte le strutture del territorio che svolgono attività inerenti il controllo ufficiale dei prodotti alimentari e dei mangimi sia di produzione nazionale che di importazione. Pertanto, gli enti che saranno direttamente interessati alle attività del LNR saranno oltre gli II.ZZ.SS e il Ministero della Salute, i PIF, gli UVAC e gli USMAF. Nel marzo del 2009 si è tenuta presso l Istituto Superiore di Sanità la prima riunione avente come finalità l acquisizione di informazioni tecniche generali sulla tipologia di strumentazione in dotazione nei laboratori, informazioni sui metodi di analisi in uso presso gli stessi laboratori, sulla messa in opera dei sistemi di qualità e sullo stato di accreditamento delle prove. La raccolta dei dati menzionati è stata effettuata tramite la circolazione di un questionario distribuito durante la riunione di marzo 2009 e di cui si descrivono i risultati in questo documento. Nel questionario è stata inoltre fatta esplicita richiesta ai laboratori di indicare le necessità e le priorità del laboratorio per ciò che riguarda i proficiency testing o gli studi di validazione al fine di orientare 13

14 l organizzazione di studi interlaboratorio, da svolgersi nell arco del , su quelle matrici e/o micotossine risultate di maggiore interesse. Gli IIZZSS presenti alla riunione sono stati (80%): Area Puglia e Basilicata Mezzogiorno Sardegna Umbria e Marche Abruzzo e Molise Lazio e Toscana Venezie Lombardia ed Emilia Romagna Rappresentante R. De Pace P. Gallo G. Chessa R. Orletti L. Annunziata A. Ubaldi e B. Neri G. Biancotto e L. Costiero R. Piro Gli IIZZSS che hanno risposto al questionario sono stati (80%): Abruzzo- Molise Umbria- Marche Lombardia- Emilia Romagna Venezie Basilicata-Foggia Sicilia Lazio-Toscana Le informazioni ricavate dai questionari sono risultate le seguenti suddivise per argomento: STRUMENTAZIONE Per quanto riguarda la strumentazione tutti gli Istituti sono dotati di sistemi ELISA ed LC (HPLC) per l analisi delle micotossine, mentre l 86% dispone di strumentazione per l analisi inlc-ms/ms. La maggioranza dei laboratori, fatta eccezione di uno, non preparano lo slurry del campione e preferiscono manipolare il campione a secco, macinandolo con strumentazione a disposizione del laboratorio. 14

15 SISTEMA DI QUALITÀ Tutti i laboratori hanno implementato un sistema qualità e il 71% dei laboratori è accreditato secondo la norma UNI EN ISO 17025:2005. I metodi acccreditati riguardano l analisi delle principali micotossine (AFs totali, AFM1, OTA, ZEA, DON, FBs) per cereali e mangimi, principalmente. I metodi accreditati prevedono quasi esclusivamente analisi in HPLC ad eccezione di un 10% che viene eseguito in ELISA. Tutti i laboratori accreditati utilizzano CRM e si utilizzano carte di controllo per tenere il processo di analisi sotto controllo interno; tutti i laboratori partecipano a circuiti FAPAS ed a studi interlaboratorio per il controllo di qualità esterno. Tutti i laboratori calcolano il recupero per esprimere il risultato delle analisi. Tutti i laboratori effettuano il calcolo dell incertezza di misura, solo il 29% valuta tale contributo secondo l equazione di Horwitz. 15

16 STUDI INTERLABORATORIO L interesse maggiore espresso per gli studi interlaboratorio ha riguardato studi per : Matrice Micotossina Metodo di conferma LC Latte AFM1 2 Alimenti per l infanzia AFM1 1 Mais FBs 1 Mangimi FBs 2 Cereali FBs 3 Alimenti per l infanzia Aflatossina B1 2 Frutta secca AFBs totali 2 Grano duro AFBs totali 1 Avena AFBs totali 1 Mais AFBs totali 1 Alimenti per l infanzia OTA 1 Caffè OTA 2 Mangime DON 2 Cereali DON 1 16