Biorisanamento di mais contaminato da aflatossine

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1 Biorisanamento di mais contaminato da aflatossine Alberton dr.antonio Medico Veterinario L.P. Seminario Fiera Millenaria Gonzaga (MN) 07 Settenbre 2013

2 Qualche riflessione sul ruolo sui microorganismi

3 Le Micotossine Sostanze tossiche per l uomo e gli animali prodotte in determinate condizioni di T e %UR dal metabolismo secondario di diversi funghi microscopici (muffe). Fortemente termostabili resistenti ai normali trattamenti termici industriali. Se ne conoscono diverse centinaia in grado di creare patologia sia nell uomo che negli animali. Esempi: - Ergotismo Medioevo(consumo di s.cornuta) - Epatocarcinoma in bambini delle Filippine(b.arachidi anni70) - Turkey X disease 160 in UK per consumo di arachidi brasiliane contaminate. - Necrosi bovini

4 Matrici contaminate Prodotti ortofrutticoli Cereali Prodotti di origine animale(latte,formaggi,yogurt) Oleaginose- proteaginose The,caffe,cacao,frutta secca,spezie Uva e derivati (vino)

5 Notizie dai Giornali

6 Funghi tossigeni Le specie più pericolose e note sono comprese nei generi: Aspergillum Fusarium Pennicillum Condizioni di crescita diverse in rapporto a T e%ur

7 Principali micotossine presenti su granelle di cereali e di oleaginose AFLATOSSINE OCRATOSSINE TRICOTECENI FUMONISINE ZEARALENONE Prodotte dal gen.aspergillus. in particolare da : A.flavus A.parasiticus

8 Le Aflatossine Circa 18 composti tra cui i più importanti sono: B (B1,B2) G (G1,G2) M (M1,M2) La M1 è quella che ritrova nel latte e deriva dal metabolismo della B1 da parte di animali alimentati con mangimi o cereali contaminati con B1.

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10 Aflatossina B1 E la tossina di >interesse tossicologico In quanto : GENOTOSSICA ed EPATOCANCEROGENA Nel 13 AIRC ha classificato la B1 nel Gruppo 1,cioè come : Agente Cancerogeno per l Uomo

11 Effetto mutageno sul gene soppressore del TP53 Proteina P53

12 Limiti imposti dalla UE Settore zootecnico: Reg.UE 574/2011 modifica Dir 2002/32 Settore Umano Reg.UE 165/2010 modifica Reg.1881/06 fissa i limiti per AFB1; AFBtotali ;M1

13 Uso zootecnico: limiti di aflatossina B1 ppb=microgrammi/kg

14 Consumo umano limiti di aflatossinab1 ppb=microgrammi/kg.

15 Limiti e impiego di mais

16 Limiti a confronto: USA/UE

17 Motivo delle differenze Usa :i livelli tollerabili sono basati su una valutazione commerciale senza introdurre fattori di rischio per il consumatore o le specie animali. UE :principio guida è tutelare al massimo la salute pubblica e adozione del principio di precauzione.

18 EFSA Journal(2004)3,1-27

19 Biorisanamento con bioactive 1. Risultati di 2 prove di laboratorio su mais contaminato da aflatossine B. 2. Applicazione in campo nel riportare a norma di legge i valori di M1 nel latte.

20 Caratteristiche tecniche Formulazione liquida Ph 3,5 Eh:-230mVolt Da conservare a T ambiente C Scadenza 6 mesi Agitare bene prima dell uso Ottima appetibilità

21 Standard di qualità e sicurezza La prima foto dal microscopio La fermentazione in aerobiosi I dati di fermentazione La fermentazione in anaerobiosi La crescita su piatra

22 1.Prove in vitro Materiali e Metodi Granella di mais contaminata da livelli diversi di aflatossina B Reazione con il prodotto biologico BIOACTIVE derivante fa fermentazione biologica.

23 Materiali e Metodi Dopo macinazione della granella di mais secca la farina così ottenuta viene miscelata con una soluzione acquosa contenente Bioactive. L impasto ottenuto viene posto in contenitori e pressato in modo tale da simulare una condizione di insilamento in condizioni di anaerobiosi. I campioni cosi ottenuti e mantenuti alla temperatura ambiente di C dopo 30gg sono sottoposti ad analisi per aflatossine.

24 1 prova La 1 prova è stata condotta presso il laboratorio R&C Lab di Altavilla Vicentina a Novembre Nel campione iniziale prima del trattamento i livelli di aflatossina B riscontrati in HPLC erano pari a 27,34ppb. Dopo 30 gg. di insilamento i valori riscontrati,sempre all analisi HPLC,si sono attestati a 2,58ppb e quindi ridotti del 0%.

25 Risultato 1 prova Valori di aflatossina B prima e dopo trattamento con Bioactive 30 25,78 25 ppb 20 Controllo Trattato ,58 0 campioni di mais

26 2 prova La 2 prova è stata condotta nel mese di Febbraio 2013 presso il laboratorio TestVeritas di S.Patriciano(TS) Sono stati preparati 7 campioni 5 dei quali con miscele a diversa concentrazione di Bioactive mentre i restanti 2 campioni non trattati sono stati rispettivamente posti in condizioni di aerobiosi e anaerobiosi.la media dei campioni era di 112,5ppb Dopo 32 gg giorni tutti i campioni sono stati esaminati(5 dei 7campioni sono quelli insilati con bioactive).i valori riscontrati al test ELISA per le aflatossine totali in media sono di 30,82ppb e dimostrano come i trattati rispetto ai controlli si sono ridotti del 73%.

27 Risultati in ELISA 2 prova Valori di aflatossine totali prima e dopo trattamento con Bioactive Controllo Trattato campioni di mais

28 2 prova HPLC Dopo avere effettuato i test di screenig con la metodica ELISA i campioni sono stati portati al Laboratotio R&C Lab per effettuare le analisi di conferma in HPLC Il risultato ottenuto è stato il seguente: Mais non trattato ppb 56.5 B1 + ppb 3,5 B2 Mais trattato ppb.3 B1 Al valore di.3 bisogna aggiungere il 2% corrispondente al volume di acqua aggiunta.

29 Risultati di conferma in HPLC 2 prova Valori di aflatossina B prima e dopo trattamento con Bioactive ppb controllo prova campioni di mais

30 2.Prove in campo Materiali e Metodi Biorisanamento di pastone di mais Valutazione dei livelli di M1 nel latte delle bovine alimentate con pastone risanato.

31 Trattamento in campo di 800 q.li di pastone di granella mais Az.di 100 vacche in lattazione Pastone con livelli di ppm di B Razione con 1kg di pastone implica superamento dei 50 ppt di M1 Trattamento con bioactive allo 0,5% Insilamento per 4 settimane Inserimento in razione di 6kg di pastone decontaminato.

32 giorni /0 6 /0 6 /0 6 /0 6 /0 6 /0 6 /0 6 /0 6 /2 0 /2 0 /2 0 /2 0 /2 0 /2 0 /2 0 / ppt RISULTATI ppt di afla M1 nel latte Afla M1 ppt

33 Conclusioni 1) I test di laboratorio condotti dimostrano una forte attività del prodotto Bioactive nel ridurre la contaminazione da Aflatossina B nella farina di mais. 2) Considerando una capacità di risanamento dell 80% è fattibile ricondurre entro i limiti stabiliti dalla legge il mais contaminato e destinato all alimentazione animale. 3) L utilizzo di prodotti decontaminati da Afla B nella bovina in lattazione non induce livelli di M1 nel latte superiori ai limiti di legge.

34 / / / / / / / / / / / / /2 0 0 / / / / / / / / / /2 0 1 / / / / /2 0 / ppt Utilizzo nel Carro miscelatore Andamento dei valori di M1 nel latte di vacche con utilizzo di BIOACTIVE nel carro miscelatore 80 72, ,57 55, ,01 40,45 giorni 41,06 40, ,

35 Grazie per l attenzione