Analisi del sangue. Siero vs. plasma. Dati da allegare sempre al prelievo di sangue. Prelievo. Siero=plasma senza fibrinogeno.

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Aloisio Milano
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1 Proteine del plasma Necessità degli anticoagulanti; Siero e plasma; Generalità sulle proteine del plasma; Fattori primari e secondari responsabili dell omeostasi delle proteine del plasma;

2 Analisi del sangue Prelievo Venoso (per la maggior parte degli usi) Capillare (per gli infanti) Arterioso (per gasanalisi) Anticoagulanti Tappo grigio: ossalato (complessa Ca ++ ), fluoruro e iodoacetato (inibitori della glicolisi) Tappo giallo: tubo sterile (senza anticoagulanti) Tappo verde: eparina (proteoglicano, accelera l azione di antitrombina III) Tappo rosso: per siero Tappo rosso-nero: per siero, con gel separatore Tappo blu: citrato (complessa Ca ++ ) Tappo lavanda: EDTA (complessa Ca ++ ) Siero vs. plasma Siero=plasma senza fibrinogeno Dati da allegare sempre al prelievo di sangue Nome, sesso e data di nascita del paziente Clinica/reparto di provenienza o indirizzo (se esterno) Telefono/indirizzo del medico che ha disposto il test Diagnosi clinica o motivazione del test Tipo di materiale inviato Data/ora del prelievo Eventuale trattamento farmacologico in corso

3 Proteine del plasma Sintetizzate dal fegato come pre-proteine Eccetto immunoglobuline e ormoni Convertite in proteine attive dagli enzimi proteolitici del plasma Tutte glicoproteine Eccetto albumina Ogni proteina ha un tempo di semivita (t 1/2 ) caratteristico I livelli plasmatici di alcune proteine aumentano negli stati infiammatori (acute phase protein)

4 Concentrazione totale di proteine nel plasma: g/l Fattori primari Velocità di sintesi proteica Aumento (ipergammaglobulinemia e paraproteinemia) Diminuzione (malnutrizione, malassorbimento, sindromi epatiche, immunodeficienze) Velocità di rimozione Aumento (perdita di proteine, stati catabolici) Volume del plasma Diminuzione (disidratazione) Aumento (eccessiva idratazione, aumento della permeabilità capillare) Fattori secondari Posizione al momento del prelievo Presenza di flebo Aumenti transitori di permeabilità capillare (setticemia o infiammazioni) Stasi: Aumento di proteine totali, ferro, lipidi, colesterolo, alcuni enzimi, bilirubina Diminuzione di potassio Diffusione di fluidi dalla circolazione all interstizio

5 Funzioni principali delle proteine del plasma Regolazione della distribuzione dei liquidi fra sangue e tessuti; Pressione osmotica e oncotica o colloidale; Genesi dell edema tissutale.

6 Pressione osmotica Movimento di H 2 O generato da differenze di concentrazione dei soluti Dipende dalla concentrazione delle particelle non diffusibili e non dalla loro massa Pressione osmotica: somma algebrica della concentrazione di tutti i soluti disciolti Indice di funzionalità renale Osmolarità: Concentrazione del soluto osmoticamente attivo 180 g glucosio = 1 mole = 1 Osmole (non dissocia) 58.5 g NaCl = 1 mole = 2 Osmoli (dissocia in Na + e Cl - ) 1 mosmole = 19.3 mmhg Osmolarità del plasma: 310 mosmoli = mmhg Membrana semipermeabile H 2 O H 2 O NaCl = RT C

7 Pressione oncotica o colloidale Porzione della pressione osmotica dovuta solo alle macromolecole Indice di funzionalità epatica Nel plasma umano: Albumina (69 kda), 45 g/l, 21.8 mmhg Globuline (140 kda), 25 g/l, 6.0 mmhg Fibrinogeno (400 kda), 3 g/l, 0.2 mmhg Pressione oncotica totale del plasma umano: 28.0 mmhg

8 Pressioni nei capillari 30 mmhg Pressioni idrostatiche 10 mmhg 3 mmhg 3 mmhg +33 mmhg +13 mmhg 28 mmhg Pressioni colloidali 28 mmhg 8 mmhg 8 mmhg -20 mmhg -20 mmhg +13 mmhg Totale -7 mmhg 0.5% del flusso è interstiziale (circolazione linfatica)

9 Cause di edema: ritenzione di liquidi nell interstizio Aumento della pressione idrostatica capillare Aumento della permeabilità capillare (infiammazioni, infezioni) Blocco linfatico Diminuzione di proteine totali e pressione colloidale del plasma

10 RUOLO DI ALCUNE PROTEINE DEL PLASMA Albumina; Proteine di trasporto di ioni metallici; a1-anttripsina; Aptoglobina; Acute phase proteins; Elettroforesi delle proteine del siero

11 Albumina Maggior proteina del plasma (50% del totale)e maggior responsabile della pressione oncotica (80%) Facilmente solubile in acqua, carica negativamente: trasportatore non selettivo di acidi grassi, Ca ++, ormoni tiroidei, bilirubina e alcuni farmaci Turnover: g/giorno, t 1/2 =20 giorni, il livello dipende dallo stato nutrizionale e dalla funzionalità epatica Cause di ipoalbuminemia: Diminuzione della sintesi (malnutrizione, malassorbimento, malattie epatiche) > Ipo- e analbuminemia: rari Aumento del volume plasmatico (idratazione, aumento della permeabilità capillare) Aumento di escrezione o degradazione (sindrome nefrotica, enteropatie, emorragie, stati catabolici (sepsi, febbre, traumi, tumori) Iperalbuminemia: quasi sempre un artefatto

12 Proteine di trasporto di ioni metallici Ferro:transferrina, ferritina, emosiderina Rame: ceruloplasmina Sindrome di Wilson (autosomico recessivo) Livello basso in alcuni tumori Livello alto in soggetti sotto contraccettivi orali

13 1 -antitripsina Inibitore delle proteasi (elastasi) L eccesso di elastasi causa distruzione del tessuto polmonare (enfisema) Acute phase protein Livelli bassi: Fumo (rompe un gruppo -S-S-) Deficienza congenita (malattia autosomica recessiva, frequenza 1:3000) Livelli alti: Stati infiammatori acuti

14 Destino di Hb nel plasma Aptoglobina lega Hb libera Complessi aptoglobina-emoglobina rimossi dal reticolo endoteliale Acute phase protein Livelli bassi: > emolisi intravascolare > sindromi epatiche croniche > metastasi > Sepsi Emopexina lega emi Complessi emopexina-eme rimossi dal fegato Transferrina lega Fe Complessi transferrina-fe rimossi (pinocitosi) dal reticolo endoteliale

15 Proteina C-reattiva: acute phase protein Sintetizzata in fegato, 5 subunità (PM 130 KDa) Media la rimozione di polisaccaridi, fosfolipidi, polianioni e attiva il complemento In soggetti sani, <1 mg/l Marker di infezione batterica Livelli superiori a 5 mg/l in assenza di infezioni batteriche: marker di infiammazione cronica Rischio cardiovascolare, infiammazione intestinale, diabete tipo II e rottura delle membrane durante la gravidanza

16 Altre proteine del plasma 1-glicoproteina: Prodotta da tessuti tumorali 1-fetoproteina: Per diagnosi prenatale di malformazioni 2-macroglobulina: Inibitore di proteasi Immunoglobuline Paraproteine Citochine Etc etc

17 Elettroforesi su carta Molecole con carica netta positiva catodo (-) Molecole con carica netta negativa anodo (+) La mobilità elettroforetica dipende da: Intensità del campo elettrico Coefficiente frizionale (dimensione e carica della particella)

18 Elettroforesi delle proteine del siero Siero, non plasma, per eliminare l interferenza del fibrinogeno Separazione delle proteine in base alla loro carica

19 Bande, e

20 Diagnosi differenziata

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