SIMT-IO 001 ev. 1 1 S.I.M.T. Viterbo Direttore Dr.ssa Tiziana iscaldati Prima Stesura Data: edattori: Gasbarri, De Angelis izzo 06-11-2013 18-10-2016 SIMT-IO 001 ev1 CONGELAMENTO E SCONGELAMENTO EMAZIE CONCENTATE Indice 1 DESCIZIONE ATTIVITÀ... 2 2 ESPONSABILITA... 5 3 BIBLIOGAFIA... 6 4 INDICATOI... 6 Stato delle Modifiche ev. Descrizione Modifica edige Verificato Approvato Emette Data 00 Prima redazione De Angelis izzo Gasbarri iscaldati Gasbarri 06-11-2013 01 Prima revisione izzo, Gasbarri iscaldati Gasbarri 18-10-2016 02 03 04 05 1
SIMT-IO 001 ev. 1 2 S.I.M.T. Viterbo Direttore Dr.ssa Tiziana iscaldati 1 DESCIZIONE ATTIVITÀ Scopo dell istruzione è descrivere le modalità di congelamento e scongelamento di sacche di emazie concentrate prefiltrate prive di buffycoat di gruppo 0 h Negativo. 1.1 CONGELAMENTO EMAZIE: Procedura GLICEOLIZZAZIONE con ACP 215 o Materiale Necessario: SET MONOUSO HEMONETICS EF 225 GLICEOLO AL 57% (FLACONE IN VETO DA 500 ML) SACCHE TANSFE DA 1000 E DA 600 ML EMAZIE CONCENTATE PEFILTATE PIVE DI BUFFY COAT CONNETTOE STEILE L unità di sangue deve essere stata prelevata da non più di 7 giorni e, dopo la rimozione del SAG-M, deve avere un peso netto di circa 240 gr (+/- 10) ed un ematocrito compreso tra il 70% e l 80%. La sacca iniziale deve avere, quindi, un peso lordo di circa 350 gr. o Le emazie da congelare devono essere portate alla stessa temperatura del glicerolo, se sono state conservate a 4 devono rimanere a T.a. per 2 ore prima dell inizio della procedura. o Saldare la sacca da congelare ad una sacca transfer da 1000 ml. A monte del punto da saldare è opportuno chiudere il tubo della sacca con una clamp per garantirne la sterilità nel caso la connessione risultasse imperfetta e per poter eventualmente riconnettere a monte della clamp. A tale scopo è opportuno che il tubo utilizzabile della sacca abbia una certa lunghezza. Questa prima centrifugazione è necessaria per eliminare il SAG-M presente nella sacca di partenza. o Trasferire le emazie della sacca da congelare nella sacca transfer. Per ottenere, con la centrifugazione, una sedimentazione ottimale arrotolare la sacca fin quando è possibile, iniziando dalla parte terminale e fissare la parte arrotolata con un nastro adesivo resistente. o Eseguire la centrifugazione utilizzando il programma 8 a 1620 rcf per 4 minuti con accelerazione 7 e freno 0 (centrifuga CYOFUGE 6000i). o Eliminare il Sa-M, trasferendolo nella sacca iniziale, utilizzando la pressa manuale e successivamente saldare il tubo e staccare la sacca. o Pesare e registrare il peso netto della sacca considerando che la tara della sacca transfer vuota è di circa 50 gr. o Strippare il tubicino ed utilizzarne una piccola parte per l esecuzione dell emocromo per controllare il valore dell ematocrito, che deve essere compreso tra il 70% e l 80%. 2
SIMT-IO 001 ev. 1 3 S.I.M.T. Viterbo Direttore Dr.ssa Tiziana iscaldati o Avviare la Glicerolizzazione delle emazie con procedura automatica mediante l apparecchiatura ACP 215 e seguendo le istruzioni che man mano compaiono sul display dell apparecchiatura; o Connettere il Kit di congelamento al glicerolo e alla sacca di emazie e posizionarlo nell apparecchio programma glicerolizzazione. o inserire peso ed ematocrito dell unità di emazie da congelare. (l apparecchiatura calcolerà automaticamente la quantità di glicerolo al 57% da aggiungere(circa 1,8 il volume delle emazie per raggiungere la concentrazione finale del 40% e la velocità di flusso ed il tempo della procedura). Tutte le istruzioni di lavoro sono riportate dettagliatamente nel manuale dell apparecchiatura. Alla fine della procedura automatica: o staccare la sacca di emazie mediante saldatura termoelettrica. o connettere sterilmente alla sacca dei globuli rossi glicerolizzati una sacca transfer da 600 ml, senza aprire la saldatura e arrotolarla come già fatto in precedenza con del nastro adesivo. o centrifugare i globuli rossi glicerolizzati utilizzando il programma 9 a 1250 rcf per 10 min con accelerazione 7 e freno 0. o separare le emazie dal glicerolo in eccesso mediante separatore manuale; staccare la sacca ed eliminarla. o Strippare il tubo della sacca glicerolizzata, prelevarne un piccolo campione (200 ml c.a.), diluirlo ½ in soluzione fisiologica e controllarne il valore dell emoglobina (valore minimo 14gr/dl). o Conservare le 2 copie degli emocromi ed indicare in entrambi il peso netto della sacca ed il valore dell emoglobina. o pesare la sacca a fine trattamento (tara sacca transfer 600 40 gr). o aggiornare il peso e volume finale delle emazie glicerolizzate nel sistema Emonet, o stampare una nuova etichetta, apporla sull unità e procedere alla conferma di carico. o confezionare le emazie glicerolizzate nell apposito contenitore in cartone politenato predisposto per la temperatura di -80 C e apporre l etichetta definitiva che riporta: o il barcode dell unità o la data di congelamento o la data di scadenza (durata 10 anni) o il gruppo AB0 e fattore h o il n progressivo di glicerolizzazione o collocare il contenitore nel congelatore a 80 C in posizione orizzontale, per permettere un congelamento in strato sottile. 3
SIMT-IO 001 ev. 1 4 S.I.M.T. Viterbo Direttore Dr.ssa Tiziana iscaldati 1.2 SCONGELAMENTO EMAZIE: Procedura DEGLICEOLIZZAZIONE CON ACP 215 o Materiale necessario: SET MONOUSO HAEMONETICS ef 235 SOLUZIONE DEGLICEOLIZZANTE NaCl 12% (100 ml) SOLUZIONE ISOTONICA DI LAVAGGIO: GLUCOSIO 0,2% E NaCl 0,9% SOLUZIONE ADDITIVA HAEMONETICS (SAG-M 350 ml) o Scongelare a bagnomaria l unità di emazie protetta da un sacchetto di plastica impermeabile a 37 C per circa 20 in agitazione. o Estrarre la sacca dal bagnomaria ed effettuare la pesatura. o Deglicerolizzare mediante sistema automatico ACP 215 e seguire le istruzioni che man mano compaiono sul display dell apparecchiatura; o Preparare il kit di scongelamento e collegarlo alle soluzioni necessarie per lo scongelamento NaCl 12%, NaCl 0,9% e soluzione additiva; o Connettere il Kit alla sacca di emazie; o Inserire il peso e l ematocrito dell unità e il sistema calcolerà automaticamente la quantità di soluzioni da aggiungere e il tempo della procedura; Tutte le istruzioni di lavoro sono riportate dettagliatamente sul manuale dell apparecchiatura o Staccare la sacca mediante saldatura termoelettrica; rimuovere il set monouso utilizzato e la sacca contenente le soluzioni di lavaggio. o Strippare il tubicino della sacca finale; o saldare il segmento (almeno 10cm)e utilizzare il campione per: a) calcolo dell Hb free tramite emoglobinometro EMOCUE; Hb low x (1-0,Htc) x100= % di emolisi Hb b) ripetizione e controllo del gruppo AB0 e del fattore h. o Effettuare il trattamento informatico sul sistema EMONET e stampare l etichetta del trattamento o Spostare informaticamente la sacca in EMONET. Il prodotto finale deve avere un peso > di 180 gr e una Hb > di 36 gr/dl Tutte le Emazia Concentrate congelate e scongelate vengono registrate nei moduli (SIMT-MOD 009 SIMT-MOD 010) 4
SIMT-IO 001 ev. 1 5 S.I.M.T. Viterbo Direttore Dr.ssa Tiziana iscaldati 2 ESPONSABILITA esponsabilità: le responsabilità per le attività e gli operatori previsti nella presenta procedura sono indicate dalla seguente tabella secondo la priorità: C = Collabora, = esponsabilità. Attività CONGELAMENTO [TLSB] [BIOLOGO] Controllo emocomponenti C Pesatura emocomponenti C accolta campioni per Controlli Qualità Trattamento in Emonet C Glicerolizzazione delle EC-BD con procedura automatica - Etichettatura egistrazione Conservazione in congelatore 80 C - SCONGELAMENTO Controllo della integrità e validità delle unità da scongelare Scongelamento sacca Trattamento in Emonet Deglicerolizzazione con soluzioni a varie concentrazioni di sali con procedura automatica Etichettatura - egistrazione ilevazione non conformità 5
SIMT-IO 001 ev. 1 6 S.I.M.T. Viterbo Direttore Dr.ssa Tiziana iscaldati 3 BIBLIOGAFIA UNI EN ISO 9001: 2008-8.3 Tenuta sotto controllo dei prodotti non conformi UNI EN ISO 9001: 2008-8.4 Azioni correttive e preventive Decreto Legislativo n. 191 del 19 Agosto 2005 - (Gazzetta Ufficiale 221 del 22/9/05) Decreto 3 Marzo 2005 - (G.U. n. 112 del 16/05/2005) Legge 219 del 21 Ottobre 2005 - (Gazzetta Ufficiale 251 del 27/10/05) 95 (15), accomandazioni europee edizione 2008,decreti applicativi Normativa CE:Decreto Legislativo 208 del 9.11.07 - (GU n. 261 del 9-11-2007 - Suppl. Ordinario n.228) Legislativo 207 del 9.11.07 - (GU n. 261 del 9-11-2007 - Suppl. Ordinario n.228) Standard di MEDICINA Trasfusionale SIMTI ed 2010 4 INDICATOI CONGELAMENTO -SCONGELAMENTO INDICATOI VALOI DI IFEIMENTO Volume > 185 ml Tutte le unità Hb del supernatante della <0,2gr./unità soluzione finale di sospensione FEQUENZA DEI CONTOLLI Tutte le unità post deglicerolizzazione Hct 0,65-0,75 Tutte le unità post deglicerolizzazione Emoglobina >36gr/unità Tutte le unità post deglicerolizzazione Leucociti <0,1x10 e 9 cell/unità Tutte le unità post glicerolizzazione Sterilità sterile Tutte le unità postglicerolizzazione 6