Abbott. Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II B2N /R1

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1 Abbott mtm Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II Abbott Molecular Inc E. Touhy Ave. Des Plaines, IL ABBOTT Max-Planck-Ring Wiesbaden Germany Abbott Laboratories/Printed in Germany B2N /R1 Gennaio 2007

2 ANNOTAZIONI Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II

3 Indice Introduzione Diritti di proprietà Marchi commerciali Descrizione Principi di funzionamento Tipi di campione Precauzioni per il trattamento Area per la preparazione dei reagenti Area per la preparazione dei campioni Area per l'amplificazione Contaminazione e inibizione Materiale ed attrezzatura necessari Materiale monouso Materiali supplementari Reagenti del sistema Abbott msample Preparation (n. di listino 4J70-24) Istruzioni per la conservazione Protocollo di estrazione Allestimento Lisi Primo lavaggio con mwash Secondo lavaggio con mwash Primo lavaggio con mwash Secondo lavaggio con mwash Prima fase con melution Seconda fase con melution Pulizia Riassunto del protocollo Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II i

4 ANNOTAZIONI ii Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II

5 Introduzione La Abbott Molecular ringrazia per aver scelto il sistema Abbott msample Preparation per il proprio laboratorio molecolare e sarà lieta di assisterla in ogni modo possibile. Per ottenere l'assistenza, è sufficiente chiamare il personale Abbott. Nel presente manuale sono riportate le seguenti informazioni: Diritti di proprietà, pagina 2 Descrive le condizioni per l'uso delle informazioni, dei documenti e delle illustrazioni presenti in questo manuale. Marchi commerciali, pagina 2 Descrizione, pagina 3 Principi di funzionamento, pagina 3 Tipi di campione, pagina 3 Precauzioni per il trattamento, pagina 4 Materiale ed attrezzatura necessari, pagina 8 Istruzioni per la conservazione, pagina 10 Protocollo di estrazione, pagina 10 Pulizia, pagina 16 Riassunto del protocollo, pagina 17 Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II 1

6 Diritti di proprietà Marchi commerciali Copyright 2007, Abbott Laboratories, Abbott Park, Illinois. Tutti i diritti riservati. Tutti i nomi ed i marchi commerciali dei prodotti della Abbott Laboratories sono di proprietà o su licenza della Abbott Laboratories, delle sue società affiliate o consociate. Non è permesso l'uso di nessun marchio commerciale Abbott, della ragione sociale, della veste commerciale o della denominazione del prodotto senza previa autorizzazione scritta della Abbott Laboratories, eccezion fatta per l'identificazione del prodotto o dei servizi offerti dalla Abbott Laboratories. Tutti gli altri marchi commerciali, nomi dei prodotti e denominazioni commerciali sono proprietà delle rispettive società. Tutti i diritti riservati. Tranne nei casi summenzionati, non si fa concessione alcuna per quanto concerne licenze o diritti espressi o impliciti, protetti da brevetto, marchio commerciale o da un diritto di proprietà di Abbott Laboratories. Abbott è un marchio commerciale registrato di Abbott Laboratories. m, m2000sp e RealTime sono marchi commerciali di Abbott Laboratories. 2 Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II

7 Descrizione Lo scopo della preparazione del campione consiste nell'estrarre e concentrare le molecole di RNA bersaglio, rimuovendo dall'estratto potenziali inibitori dell'amplificazione e rendendolo in tal modo amplificabile. Il sistema msample Preparation consiste in un set di reagenti per l'estrazione degli acidi nucleici. Tali reagenti vengono utilizzati con i sistemi automatizzati m2000sp, ma possono anche essere usati manualmente come descritto qui sotto. Principi di funzionamento Durante la preparazione del campione si dispensano mmicroparticles ed mlysis nel numero necessario di cartucce di reazione. Quindi si aggiunge ciascun campione ad una cartuccia di reazione e si passa all'incubazione. Durante l'incubazione a 50 C, si verifica la lisi e gli acidi nucleici vengono assorbiti dalle microparticelle della soluzione mlysis. Ad incubazione terminata, per catturare le microparticelle, si applica un magnete alla cartuccia di reazione. Il sopranatante della lisi viene eliminato. Con una serie di fasi, si dispensano le soluzioni di lavaggio mwash 1 ed mwash 2 per lavare le microparticelle e liberarle dalle impurità. Le soluzioni di lavaggio vengono poi eliminate. Si aggiunge quindi l'melution Buffer (tampone di eluizione) alle cartucce di reazione, che vengono poi incubate a 75 C per permettere agli acidi nucleici di venire separati dalle microparticelle. In seguito si dispensa la soluzione di lavaggio mwash 2, si applica un magnete e il campione eluito viene trasferito in una provetta o nella piastra a 96 pozzetti per ulteriori procedimenti. Tipi di campione Il protocollo descritto si basa sui metodi automatizzati sviluppati per i target dell'rna virale in plasma o siero umani. Per informazioni sul tipo di campione corretto, fare riferimento al foglietto illustrativo del dosaggio Abbott RealTime HCV Gentoype II. Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II 3

8 Precauzioni per il trattamento Area per la preparazione dei reagenti Quando si preparano i campioni è fondamentale attenersi alle buone pratiche di laboratorio, per ridurre al minimo il rischio di contaminazione crociata tra i campioni ed evitare l'introduzione involontaria di nucleasi (RNasi, DNasi) nei campioni prima, durante e dopo la procedura di estrazione. Quando si lavora con gli acidi nucleici, adottare sempre adeguate tecniche asettiche. Le reazioni di amplificazione, come la PCR, sono sensibili all'introduzione involontaria di prodotto da reazioni di amplificazione precedenti. Per informazioni sulla separazione delle attività e sulle aree dedicate fare riferimento al foglietto illustrativo del dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II. L'area per la preparazione dei reagenti è destinata alla preparazione dei componenti del reagente a base PCR per creare la miscela master di amplificazione e trasferirne le aliquote nella piastra a 96 pozzetti. I camici da laboratorio, le pipette, i puntali, gli agitatori e miscelatori usati nell'area per la preparazione dei reagenti devono rimanere in quest'area e non devono essere spostati dall'area per la preparazione dei campioni o dall'area per l'amplificazione. 4 Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II

9 Area per la preparazione dei campioni L'area per la preparazione dei campioni è riservata all'analisi di campioni e controlli e alla dispensazione di campioni e controlli analizzati nella piastra a 96 pozzetti. Tutti i reagenti utilizzati nell'area per la preparazione dei campioni devono rimanere sempre in quest'area. I camici da laboratorio, le pipette, i puntali, gli agitatori e miscelatori usati nell'area per la preparazione dei campioni devono rimanere in quest'area e non devono essere spostati nell'area per la preparazione dei reagenti o nell'area per l'amplificazione. Non portare prodotti di amplificazione nell'area per la preparazione dei campioni. AVVERTENZA: Potenziale rischio biologico. Nessuno dei metodi analitici conosciuti può garantire in modo assoluto che prodotti di origine umana o derivati da microrganismi inattivati non possano trasmettere infezioni. Pertanto, tutti i materiali di origine umana devono essere considerati potenzialmente infettivi. Si raccomanda che questi reagenti e i campioni umani vengano trattati in accordo con quanto descritto nella pubblicazione "OSHA Standard" relativa agli agenti patogeni di origine ematica. I materiali contenenti o sospettati di contenere agenti infettivi devono essere trattati secondo quanto descritto nella pubblicazione "Biosafety Level 2" o linee guida equivalenti. Osservare, tra l'altro, le seguenti misure precauzionali: indossare guanti quando si maneggiano campioni o reagenti non pipettare con la bocca non mangiare, bere, fumare, truccarsi o maneggiare lenti a contatto nelle aree dove vengono trattati questi materiali pulire e disinfettare schizzi dei campioni prevedendo l'uso di un disinfettante tubercolicida come ipoclorito di sodio all'1,0% o altri disinfettanti adeguati decontaminare ed eliminare tutti i campioni, i reagenti ed altro materiale a potenziale rischio biologico in accordo con le norme vigenti. Tutti i materiali devono essere trattati in modo da minimizzare la potenziale contaminazione delle aree di lavoro. Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II 5

10 Quando si manipolano i prodotti chimici, osservare sostanzialmente le seguenti precauzioni: per istruzioni circa l'uso e precauzioni, consultare le schede di sicurezza MSDS evitare il contatto con la pelle e gli occhi. Se il contatto con i materiali non può essere evitato, utilizzare guanti impermeabili, occhiali protettivi e indumenti appropriati mantenere sempre la postazione di lavoro in perfetto ordine. Non mangiare, bere o conservare alimenti e bevande nei luoghi in cui vengono utilizzati i prodotti chimici rivolgersi ad un medico, se si osservano irritazioni o segni di tossicità in seguito all'esposizione. Area per l'amplificazione L'area per l'amplificazione è destinata all'amplificazione PCR e alla rilevazione del prodotto amplificato. Le piastre a 96 pozzetti sigillate vengono trasferite dall'area per la preparazione dei campioni e caricate nel termociclatore. I camici da laboratorio e l'attrezzatura usati nell'area per l'amplificazione devono rimanere in quest'area e non devono essere spostati nell'area per la preparazione dei reagenti o nell'area per la preparazione dei campioni. 6 Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II

11 Contaminazione e inibizione Per minimizzare i rischi di contaminazione da nucleasi, di contaminazione crociata tra campioni, contaminazione con prodotto amplificato e inibizione, osservare le seguenti precauzioni: Indossare sempre indumenti protettivi adatti. Usare guanti privi di talco. Cambiare i guanti dopo aver toccato potenziali contaminanti (campioni, eluiti e/o prodotto amplificato). Per tutte le operazioni di dispensazione manuale, utilizzare sempre puntali con barriere anti aerosol sterili. I puntali delle pipette devono essere usati una sola volta. I reagenti del sistema Abbott msample Preparation sono esclusivamente monouso. Al termine di ciascun protocollo, eliminare tutti i reagenti rimanenti. L'mLysis, le soluzioni di lavaggio mwash 1 ed mwash 2, l'melution Buffer e l'mmicroparticles rimanenti possono essere eliminati in accordo con le linee guida del proprio laboratorio. NOTA: Disinfettare in autoclave il materiale PCR amplificato non degrada il prodotto amplificato, ma può contribuire al rilascio dello stesso provocando l'apertura della piastra sigillata o della provetta. L'area del laboratorio può essere contaminata con prodotto amplificato, se il materiale di rifiuto non viene attentamente maneggiato e contenuto prima e dopo l'elaborazione. Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II 7

12 Materiale ed attrezzatura necessari Materiale monouso Materiali supplementari puntali con barriera anti aerosol sterili da 1000 µl puntali con barriera anti aerosol sterili da 200 µl puntali per pipette a ripetizione sterili da 5 ml in grado di dispensare volumi di 100 µl cartucce di reazione in polipropilene da 12 x 75 mm (n. di listino 04J71-20 o equivalente) provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml e tappi (n. di listino 04J71-50 o equivalente) pipette monouso sterili da 5 ml piastra in polipropilene a 96 pozzetti (facoltativa) supporti magnetici per provette da 12 x 75 mm supporti magnetici per provette da 1,5 ml supporti non magnetici per provette da 12 x 75 mm supporti non magnetici per provette da 1,5 ml blocco riscaldatore per provette da 12 x 75 mm (in grado di raggiungere i 50 C) blocco riscaldatore per provette da 1,5 ml (in grado di raggiungere i 75 C) termometro timer riempipipette o dispositivo simile pipetta di precisione regolabile da 1000 µl pipetta di precisione regolabile da 200 µl pipetta a ripetizione in grado di dispensare volumi di 100 µl Centrifuga da g 8 Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II

13 contenitore del liquido di scarico (non è consentito che la candeggina entri in contatto con il liquido di scarico). Fare riferimento alla sezione Pulizia, pagina 16, per le avvertenze e le informazioni sulle precauzioni da adottare. contenitore per i rifiuti solidi camice da laboratorio guanti monouso privi di talco occhiali protettivi cabina di sicurezza biologica approvata per lavori con materiale infettivo, se richiesto Reagenti del sistema Abbott msample Preparation (n. di listino 4J70-24) Abbott Lysis Buffer (mlysis - tampone di lisi) (MD130A) Abbott Wash Buffer 1 (mwash 1 - tampone di lavaggio 1) (MD131A) Abbott Wash Buffer 2 (mwash 2 - tampone di lavaggio 2) (MD132A) Abbott Elution Buffer (melution - tampone di eluizione) (MD133A) Abbott Microparticles (mmicroparticles - microparticelle) (MD134A) Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II 9

14 Istruzioni per la conservazione Protocollo di estrazione Conservare il sistema Abbott msample Preparation e i suoi componenti come indicato sulle relative etichette. Un sistema Abbott msample Preparation comprende 4 x 24 preparazioni Un vassoio di reagenti elabora 24 campioni. Togliere i flaconi dal vassoio e capovolgere gentilmente i flaconi Abbott msample Preparation per assicurare una soluzione omogenea. Se aprendo uno dei flaconi dei reagenti si osservano cristalli, lasciar riequilibrare il reagente a temperatura ambiente fino a quando i cristalli scompaiono. Non utilizzare i reagenti senza aver atteso che i cristalli siano scomparsi. Per ottenere indicazioni su come svolgere questo protocollo, fare riferimento alla sezione Riassunto del protocollo, pagina 17. Portare a termine tutte le fasi per ogni campione, prima di procedere con la fase successiva. Allestimento 1. Accendere i blocchi riscaldatori a temperatura controllata. a. Impostare il blocco delle cartucce di reazione da 12 X 75 mm a 50 C. b. Impostare i blocchi delle provette da 1,5 ml a 75 C. 2. Etichettare tutte le provette necessarie. a. Una cartuccia di reazione da 12 X 75 mm per campione per la fase 1 di mlysis. b. Una provetta "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml per campione per le fasi delle soluzioni di lavaggio mwash 1 ed mwash 2, nonché per il tampone melution. c. Una provetta "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml per campione o una piastra in polipropilene a 96 pozzetti per l'eluito. 3. Controllare la temperatura dei blocchi riscaldatori. Non procedere fino a quando i blocchi riscaldatori sono alla temperatura giusta. 4. Dispensare 2,0 ml di controllo interno nel falcone di mlysis. che contiene 70 ml. Per ogni estrazione vengono usati 2,4 ml. 10 Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II

15 ! 5. Al termine della dispensazione del controllo interno nel flacone di mlysis, tappare il flacone e miscelare capovolgendo gentilmente 5-10 volte. AVVERTENZA: Onde evitare lesioni personali, seguire le istruzioni del produttore per il blocco riscaldatore. Per evitare di bruciarsi, prima di maneggiarli, spegnere i blocchi e lasciarli raffreddare a 35 C o a temperatura inferiore. Lisi 1. Risospendere le mmicroparticles, agitando gentilmente fino a che le particelle sono in sospensione e non si vedono più particelle sedimentate sul fondo del flacone. 2. Collocare le cartucce di reazione da 12 x 75 mm in un rack non magnetico a temperatura ambiente. A risospensione ultimata, utilizzare un puntale per pipetta a ripetizione da 5 ml in grado di dispensare aliquote di 100 µl; aggiungere 100 µl di mmicroparticles ad ogni cartuccia di reazione da 12 X 75 mm. 3. Con una pipetta monouso sterile da 5 ml, dispensare 2,4 ml di mlysis in ciascuna cartuccia di reazione da 12 X 75 mm nel rack non magnetico. 4. Con la pipetta di precisione e i puntali con barriera anti aerosol, dispensare la quantità desiderata di campione (campioni e controlli) nelle cartucce di reazione da 12 X 75 mm e mescolare la miscela campione-lisi eseguendo aspirazione e dispensazione con la pipetta di trasferimento del campione fino ad ottenere una sospensione uniforme. NOTA: Per informazioni sulla preparazione dei campioni fare riferimento al foglietto illustrativo HCV Genotype II. Per il dosaggio RealTime HCV Genotype II centrifugare i campioni a g per 5 minuti se i campioni presentano sostanze particolate o torbidità. NOTA: Come indicato nel foglietto illustrativo del dosaggio, il volume del campione può essere di 0,2 ml o 0,5 ml. Analizzare allo stesso modo i campioni e i controlli. 5. Quando a tutti i campioni è stato aggiunto l'mlysis e sono stati miscelati, collocare le provette nel blocco riscaldatore a 50 C. Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II 11

16 6. Avviare il timer e incubare tutte le provette per 20 minuti a 50 C. 7. Ad incubazione terminata, collocare le cartucce di reazione da 12 X 75 mm in un sostegno a cattura magnetica per 2 minuti, per permettere di catturare le particelle sul lato delle provette. 8. Con le provette nel sostegno a cattura magnetica, utilizzare una pipetta nuova e pulita da 5 ml per ogni campione, per rimuovere il lisato da ogni provetta ed eliminarlo in un contenitore del liquido di scarico. Eliminare il fluido il più completamente possibile. NON disturbare o aspirare le particelle catturate magneticamente. 9. Togliere le cartucce di reazione da 12 X 75 mm dal rack magnetico e trasferirle in uno non magnetico. Primo lavaggio con mwash 1 1. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl e dispensare 700 µl di mwash 1, quindi risospendere le particelle magnetiche nel fluido di lavaggio aspirando e dispensando delicatamente con il puntale. Lavare le particelle dal lato della provetta, se necessario. NOTA: Quando si aggiungono i tamponi di lavaggio, dispensare il liquido lentamente per evitare di schizzare. 2. Trasferire il liquido di lavaggio e le particelle in una provetta "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml dotata di etichetta. 3. Collocare tali provette in un supporto a cattura magnetica per un minuto, per permettere di catturare le particelle sul lato delle provette. 4. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl per togliere l'mwash 1 dalle provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml ed eliminarlo in un contenitore del liquido di scarico. Eliminare il fluido il più completamente possibile. NON disturbare o aspirare le particelle catturate magneticamente. 5. Togliere le provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml dal rack magnetico e trasferirle in uno non magnetico. 12 Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II

17 Secondo lavaggio con mwash 1 1. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl e dispensare 700 µl di mwash 1, quindi risospendere le particelle magnetiche nel fluido di lavaggio aspirando e dispensando delicatamente con il puntale. Lavare le particelle dal lato della provetta, se necessario. 2. Collocare tali provette in un supporto a cattura magnetica per un minuto, per permettere di catturare le particelle sul lato delle provette. 3. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl per togliere l'mwash 1 dalle provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml ed eliminarlo in un contenitore del liquido di scarico. Eliminare il fluido il più completamente possibile. NON disturbare o aspirare le particelle catturate magneticamente. 4. Togliere le provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml dal rack magnetico e trasferirle in uno non magnetico. Primo lavaggio con mwash 2 1. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl e dispensare 700 µl di mwash 2, quindi risospendere le particelle magnetiche nel fluido di lavaggio aspirando e dispensando delicatamente con il puntale. Lavare le particelle dal lato della provetta, se necessario. 2. Collocare tali provette in un supporto a cattura magnetica per un minuto, per permettere di catturare le particelle sul lato delle provette. 3. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl per togliere l'mwash 2 dalle provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml ed eliminarlo in un contenitore del liquido di scarico. Eliminare il fluido il più completamente possibile. NON disturbare o aspirare le particelle catturate magneticamente. 4. Togliere le provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml dal rack magnetico e trasferirle in uno non magnetico. Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II 13

18 Secondo lavaggio con mwash 2 1. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl e dispensare 700 µl di mwash 2, quindi risospendere le particelle magnetiche nel fluido di lavaggio aspirando e dispensando delicatamente con il puntale. Lavare le particelle dal lato della provetta, se necessario. 2. Collocare tali provette in un supporto a cattura magnetica per un minuto, per permettere di catturare le particelle sul lato delle provette. 3. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl per togliere l'mwash 2 dalle provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml ed eliminarlo in un contenitore del liquido di scarico. Eliminare il fluido il più completamente possibile. NON disturbare o aspirare le particelle catturate magneticamente. 4. Togliere le provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml dal rack magnetico e trasferirle in uno non magnetico. Prima fase con melution 1. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 200 µl e dispensare 34 µl di melution Buffer, quindi risospendere le particelle magnetiche nel fluido aspirando e dispensando con il puntale. Lavare le particelle dal lato della provetta, se necessario. 2. Tenere le singole provette nel rack non magnetico fino a quando il tampone melution è stato dispensato in tutti i campioni. 3. Collocare le provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml nel blocco riscaldatore a 75 C e incubare per 20 minuti. 4. Togliere le provette dal blocco riscaldatore a 75 C e rimetterle nel rack non magnetico. 14 Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II

19 Seconda fase con melution 1. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 200 µl e dispensare 85 µl di mwash 2, quindi risospendere le particelle magnetiche nel fluido aspirando e dispensando con il puntale. Lavare le particelle dal lato della provetta, se necessario. 2. Tenere le singole provette in un rack non magnetico fino a quando la soluzione di lavaggio mwash 2 è stata dispensata in tutti i campioni. 3. Collocare tali provette in un supporto a cattura magnetica per un minuto, per permettere di catturare le particelle sul lato delle provette. 4. Per ogni campione usare un untale nuovo e pulito da 200 µl e togliere il campione eluito dalla provetta "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml. NON disturbare o aspirare le microparticelle catturate. 5. Il campione eluito può essere conservato in una provetta "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml nuova o in una piastra in polipropilene a 96 pozzetti. 6. Fare riferimento alla sezione Protocollo del dosaggio del foglietto HCV Genotype II e continuare seguendo le istruzioni nella sezione Area per l'amplificazione per avviare la strumentazione di amplificazione e rilevazione. Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II 15

20 Pulizia 1. Eliminare le provette dei campioni e dei controlli secondo le linee guida del laboratorio. 2. I reagenti del sistema Abbott msample Preparation sono esclusivamente monouso. I reagenti rimanenti e il liquido di scarico devono essere eliminati secondo le linee guida del laboratorio. AVVERTENZA: Non miscelare agenti ossidanti,! quali ipoclorito di sodio, con i reagenti mlysis, mwash 1 ed mmicroparticles della confezione di reagenti msample Preparation o con i liquidi di scarico, in quanto tale miscela potrebbe generare gas tossici. Se la miscela si trova in un contenitore chiuso, si può creare pressione all'interno del contenitore. È responsabilità di ciascun laboratorio separare il liquido di scarico e accertarsi che sia trattato ed eliminato nel rispetto delle leggi locali e nazionali vigenti in materia. 3. Rimuovere ed eliminare tutti i materiali monouso e i rifiuti solidi secondo le linee guida del proprio laboratorio. 4. Pulire i rack dei campioni, i blocchi riscaldatori e i rack magnetici immergendoli in una soluzione di ipoclorito di sodio allo 0,5% per circa 10 minuti, quindi sciacquare completamente con acqua e lasciare asciugare all'aria. 5. Decontaminare e pulire l'area di lavoro secondo le linee guida del proprio laboratorio. 16 Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II

21 Riassunto del protocollo Dispensare controllo interno e miscelare 2,4 ml mlysis 0,7 ml mwash µl mmicroparticles 50 C, 20 min. sep. mag. Cartuccia di reazione Cartuccia di reazione Miscelare Sep. mag. TA * Campione da 0,2 ml o 0,5 ml (volume elaborato) * Per il dosaggio RealTime HCV Genotype II centrifugare i campioni a 2000 giri per 5 minuti se sono torbidi o contengono sostanze particolate. Ripetere per un totale di due lavaggi con mwash 1 0,7 ml mwash 2 Cartuccia di reazione Sep. mag. TA Ripetere per un totale di due lavaggi con mwash 2 melution (34 µl) Cartuccia di reazione mwash 2 (85 µl) Cartuccia di reazione 75 C, 20 min Legenda degli elementi del procedimento TA = temperatura ambiente Eluito (119 µl) Sep mag Sep mag = separazione magnetica delle microparticelle dalla maggior parte di sovranatante Miscelare = effettuando ripetute aspirazioni e dispensazioni Figura 1.0: Riassunto del protocollo Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II 17

22 ANNOTAZIONI 18 Procedura di preparazione manuale dei campioni per il dosaggio Abbott RealTime HCV Genotype II