Abbott. Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina. Molecular

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1 Abbott mtm Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina ABBOTT Max-Planck-Ring Wiesbaden Germany Abbott Molecular Inc E. Touhy Ave. Des Plaines, IL , 2007 Abbott/Printed in Germany B6L /R3 Novembre 2007 Molecular

2 ANNOTAZIONI Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina

3 Indice Introduzione Diritti di proprietà Marchi di fabbrica Descrizione Principi di funzionamento Tipi di campione Precauzioni per il trattamento Area per la preparazione dei reagenti Area per la preparazione dei campioni Area per l'amplificazione Contaminazione e inibizione Materiale ed attrezzatura necessari Materiale monouso Materiali supplementari Reagenti dell Abbott msample Preparation System DNA (n. di listino 06K12-24) Istruzioni per la conservazione Protocollo di estrazione Allestimento mlysis DNA mwash 1 DNA Primo lavaggio con mwash 2 DNA Secondo lavaggio con mwash 2 DNA melution DNA Pulizia Riassunto del protocollo Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina i

4 Indice ANNOTAZIONI ii Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina

5 Introduzione La Abbott Molecular ringrazia per aver scelto l Abbott m Sample Preparation System DNA per il proprio laboratorio molecolare e sarà lieta di assisterla in ogni modo possibile. Per ottenere l'assistenza, è sufficiente chiamare il personale Abbott. Nel presente manuale sono riportate le seguenti informazioni: Diritti di proprietà, pagina 2 Descrive le condizioni per l'uso delle informazioni, dei documenti e delle illustrazioni presenti in questo manuale. Marchi di fabbrica, pagina 2 Descrizione, pagina 3 Principi di funzionamento, pagina 3 Tipi di campione, pagina 3 Precauzioni per il trattamento, pagina 4 Materiale ed attrezzatura necessari, pagina 8 Istruzioni per la conservazione, pagina 10 Protocollo di estrazione, pagina 11 Pulizia, pagina 16 Riassunto del protocollo, pagina 17 Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina 1

6 Diritti di proprietà Marchi di fabbrica Copyright 2005, 2007, Abbott Laboratories, Abbott Park, Illinois. Tutti i diritti riservati. Nessuna parte di questo documento può essere riprodotta, registrata o trasmessa in qualsiasi forma o modo senza previa autorizzazione scritta di Abbott Laboratories. Tutti i nomi ed i marchi di fabbrica dei prodotti della Abbott Laboratories sono di proprietà o su licenza della Abbott Laboratories, delle sue società affiliate o consociate. Non è permesso l'uso di nessun marchio di fabbrica Abbott, della ragione sociale, della veste commerciale o della denominazione del prodotto senza previa autorizzazione scritta della Abbott Laboratories, eccezion fatta per l'identificazione del prodotto o dei servizi offerti dalla Abbott Laboratories. Tutti gli altri marchi di fabbrica, nomi dei prodotti e denominazioni commerciali sono proprietà delle rispettive società. Tutti i diritti riservati. Tranne nei casi summenzionati, non si fa concessione alcuna per quanto concerne licenze o diritti espressi o impliciti, protetti da brevetto, marchio di fabbrica o da un diritto di proprietà di Abbott Laboratories. Abbott è un marchio commerciale registrato di Abbott Laboratories. m, m1000, and m2000sp sono marchi commerciali di Abbott Laboratories. 2 Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina

7 Descrizione Lo scopo della preparazione del campione consiste nell'estrarre e concentrare le molecole di DNA bersaglio per rimuovere dall'estratto potenziali inibitori dell'amplificazione e renderlo in tal modo amplificabile. L msample Preparation System consiste in un set di reagenti per l'estrazione degli acidi nucleici. Tali reagenti vengono utilizzati con i sistemi automatizzati m1000 ed m2000sp, ma possono anche essere usati manualmente come descritto di seguito. Principi di funzionamento Durante la preparazione del campione si dispensano mmicroparticles DNA ed mlysis DNA nel numero necessario di cartucce di reazione. Quindi si aggiunge ciascun campione ad una cartuccia di reazione e si passa all'incubazione. Durante l'incubazione a 56 C, si verifica la lisi e gli acidi nucleici vengono assorbiti dalle microparticelle nella soluzione mlysis DNA. Ad incubazione terminata, per catturare le microparticelle, si applica un magnete alla cartuccia di reazione. Il sopranatante della lisi viene eliminato. Con una serie di fasi, si dispensano le soluzioni di lavaggio mwash 1 DNA ed mwash 2 DNA per lavare le microparticelle dalle impurità. Le soluzioni di lavaggio sono poi eliminate. A questo punto viene aggiunto il tampone melution Buffer DNA alle cartucce di reazione, le quali vengono poi tenute in incubazione a 75 C per permettere agli acidi nucleici di separarsi dalle microparticelle. Quindi si applica un magnete ed il campione eluito viene trasferito in una provetta o su di una piastra a 96 pozzetti per ulteriori trattamenti. Tipi di campione Il protocollo descritto si basa sui metodi automatizzati sviluppati per i target del DNA in tamponi o campioni di urina umani. L'operatore è responsabile della conferma dell'utilità di questi reagenti nei confronti di ciascun target specifico e/o tipo di campione di propria scelta. Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina 3

8 Precauzioni per il trattamento Area per la preparazione dei reagenti Quando si preparano i campioni è fondamentale attenersi alle buone pratiche di laboratorio, per ridurre al minimo il rischio di contaminazione crociata tra i campioni ed evitare l'introduzione involontaria di nucleasi (RNasi, DNasi) nei campioni prima, durante e dopo la procedura di estrazione. Quando si lavora con gli acidi nucleici, adottare sempre adeguate tecniche asettiche. Le reazioni di amplificazione, come la PCR, sono sensibili all'introduzione involontaria di prodotto da reazioni di amplificazione precedente. Una delle misure preventive per ridurre il rischio di contaminazione nel laboratorio è rappresentata dalla separazione fisica delle attività svolte durante la PCR, in accordo con le buone pratiche di laboratorio. Per l'analisi dei dosaggi basati sulla PCR, si raccomanda di usare aree distinte all'interno del laboratorio, come descritto qui di seguito. L'area per la preparazione dei reagenti è destinata alla preparazione dei componenti del reagente a base PCR per creare la miscela master di amplificazione e trasferirne le aliquote nella piastra a 96 pozzetti. I camici da laboratorio, le pipette, i puntali, gli agitatori e miscelatori usati nell'area per la preparazione dei reagenti devono rimanere in quest'area e non devono essere spostati dall'area per la preparazione dei campioni o dall'area per l'amplificazione. 4 Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina

9 Area per la preparazione dei campioni L'area per la preparazione dei campioni è destinata all'elaborazione dei campioni, dei calibratori e/o controlli e alla dispensazione dei campioni, controlli e calibratori elaborati nella piastra a 96 pozzetti. Tutti i reagenti utilizzati nell'area per la preparazione dei campioni devono rimanere sempre in quest'area. I camici da laboratorio, le pipette, i puntali, gli agitatori e miscelatori usati nell'area per la preparazione dei campioni devono rimanere in quest'area e non devono essere spostati nell'area per la preparazione dei reagenti o nell'area per l'amplificazione. Non portare prodotti di amplificazione nell'area per la preparazione dei campioni. ATTENZIONE: Potenziale rischio biologico. La presente procedura richiede il trattamento di campioni umani. Si raccomanda di considerare tutti i materiali di origine umana come potenzialmente infettivi e di trattarli attenendosi alle adeguate pratiche di biosicurezza. Eliminare tutti i campioni ed altri materiali potenzialmente contaminati in accordo con le norme locali, regionali e nazionali. Tutti i materiali devono essere trattati in modo da minimizzare la potenziale contaminazione delle aree di lavoro. Pulire e disinfettare schizzi dei campioni prevedendo l'uso di un disinfettante tubercolicida come ipoclorito di sodio all'1,0% o altri disinfettanti adeguati Quando si manipolano i prodotti chimici, osservare sostanzialmente le seguenti precauzioni: per istruzioni circa l'uso e le precauzioni, consultare le schede di sicurezza MSDS evitare il contatto con la pelle e gli occhi. Se il contatto con i materiali non può essere evitato, utilizzare guanti impermeabili, occhiali protettivi e indumenti appropriati mantenere sempre la postazione di lavoro in perfetto ordine. Non mangiare, bere o conservare alimenti e bevande nei luoghi in cui vengono utilizzati i prodotti chimici rivolgersi ad un medico, se si osservano irritazioni o segni di tossicità in seguito all'esposizione. Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina 5

10 Area per l'amplificazione L'area per l'amplificazione è destinata all'amplificazione PCR e alla rilevazione del prodotto amplificato. Le piastre a 96 pozzetti sigillate vengono trasferite dall'area per la preparazione dei campioni e caricate nel termociclatore. I camici da laboratorio e l'attrezzatura usati nell'area per l'amplificazione devono rimanere in quest'area e non devono essere spostati nell'area per la preparazione dei reagenti o nell'area per la preparazione dei campioni. 6 Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina

11 Contaminazione e inibizione Per minimizzare i rischi di contaminazione da nucleasi, di contaminazione crociata tra campioni, contaminazione con prodotto amplificato e inibizione, osservare le seguenti precauzioni: indossare sempre indumenti protettivi adatti usare guanti privi di talco cambiare i guanti dopo aver toccato potenziali contaminanti (campioni, eluiti e/o prodotto amplificato) per tutte le operazioni di dispensazione manuale, utilizzare sempre puntali con barriere anti aerosol sterili. I puntali delle pipette devono essere usati una sola volta. I reagenti dell Abbott msample Preparation System DNA sono esclusivamente monouso. Al termine di ciascun protocollo, eliminare tutti i reagenti rimanenti. mlysis DNA, mwash 1 DNA, mwash 2 DNA, melution Buffer DNA e mmicroparticles DNA possono essere eliminati in accordo con le linee guida del proprio laboratorio. NOTA: Disinfettare in autoclave il materiale PCR amplificato non degrada il prodotto amplificato, ma può contribuire al rilascio dello stesso provocando l'apertura della piastra sigillata o della provetta. L'area del laboratorio può essere contaminata con prodotto amplificato, se il materiale di rifiuto non viene attentamente maneggiato e contenuto prima e dopo l'elaborazione. Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina 7

12 Materiale ed attrezzatura necessari Materiale monouso Materiali supplementari puntali con barriera anti aerosol sterili da 1000 µl puntali con barriera anti aerosol sterili da 200 µl puntali per pipette a ripetizione sterili da in grado di dispensare volumi di 25 µl provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml e tappi (n. di listino 04J71-50 o equivalente) piastra in polipropilene a 96 pozzetti (facoltativa) supporti magnetici per provette da 1,5 ml supporti non magnetici per provette da 1,5 ml blocco riscaldatore regolabile per provette da 1,5 ml (in grado di raggiungere 56 C e 75 C) termometro timer vortex pipetta di precisione regolabile da 1000 µl pipetta di precisione regolabile da 200 µl pipetta a ripetizione in grado di dispensare volumi di 25 µl etanolo di grado di purezza USP (etanolo al %) AVVERTENZA: Non utilizzare etanolo contenente denaturanti. 8 Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina

13 contenitore del liquido di scarico (non è consentito che la candeggina entri in contatto con il liquido di scarico). Fare riferimento alla sezione Pulizia, pagina 16, per le avvertenze e le informazioni sulle precauzioni da adottare. contenitore per i rifiuti solidi camice da laboratorio guanti monouso privi di talco occhiali protettivi cabina di sicurezza biologica approvata per lavori con materiale infettivo, se richiesto Reagenti dell Abbott msample Preparation System DNA (n. di listino 06K12-24) Abbott Lysis Buffer DNA (mlysis DNA ) (MD201A) Abbott Wash Buffer 1 DNA (mwash 1 DNA ) (MD202A) Abbott Wash Buffer 2 DNA (mwash 2 DNA ) (MD203A) Abbott Elution Buffer DNA (melution Buffer DNA ) (MD204A) Abbott Microparticles DNA (mmicroparticles DNA ) (MD205A) Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina 9

14 Istruzioni per la conservazione Conservare l Abbott msample Preparation System DNA e i suoi componenti come indicato dalle istruzioni riportate sulle etichette. 10 Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina

15 Protocollo di estrazione Un Abbott msample Preparation System DNA comprende 4 X 48 preparazioni. Un vassoio di reagenti elabora 48 campioni. Togliere i flaconi dal vassoio e capovolgere gentilmente i flaconi dell Abbott msample Preparation System DNA per assicurare una soluzione omogenea. Se aprendo i flaconi dei reagenti si osservano cristalli in uno di essi, lasciar riequilibrare il reagente a temperatura ambiente fino a quando i cristalli scompaiono. Non utilizzare i reagenti senza aver atteso che i cristalli siano scomparsi. Per ottenere indicazioni su come svolgere questo protocollo, fare riferimento alla sezione Riassunto del protocollo, pagina 17. Portare a termine tutte le fasi per ogni campione, prima di procedere con la fase successiva. Allestimento 1. Accendere il blocco riscaldatore a temperatura controllata per provette da 1,5 ml a 56 C. 2. Etichettare tutte le provette necessarie. a. Una provetta "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml per campione per le fasi di mlysis DNA, mwash 1 DNA, mwash 2 DNA ed melution Buffer DNA. b. Una provetta "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml per campione o una piastra in polipropilene a 96 pozzetti per l'eluito. 3. Controllare la temperatura del blocco riscaldatore. Non procedere fino a quando il blocco riscaldatore è alla temperatura giusta. 4. Miscelare il controllo interno (se utilizzato) agitandolo al Vortex tre volte, per 2-3 secondi ognuna. 5. Dispensare il controllo interno nel flacone dell'mlysis DNA che contiene 70 ml. Per ogni estrazione vengono usati 0,4 ml. Per il volume adeguato di controllo interno, fare riferimento al foglietto illustrativo specifico del dosaggio. 6. Al termine della dispensazione del controllo interno nel flacone di mlysis DNA, tappare il flacone e farlo ruotare volte, minimizzando però la formazione di schiuma. Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina 11

16 7. Dispensare 70 ml di etanolo di grado di purezza (etanolo al %) nel flacone dell'mwash 2 DNA. Miscelare capovolgendo 5-10 volte. AVVERTENZA: Utilizzare esclusivamente etanolo di grado di purezza USP (etanolo al %). Non utilizzare etanolo contenente denaturanti. AVVERTENZA: Onde evitare lesioni personali, seguire le istruzioni del produttore per il blocco riscaldatore. Per evitare di bruciarsi, prima di maneggiarli, spegnere i blocchi e lasciarli raffreddare a 35 C o a temperatura inferiore. mlysis DNA 1. Risospendere le mmicroparticlesdna agitandole al vortex o vigorosamente fino a quando le particelle sono in sospensione e non si vedono più particelle sedimentate sul fondo del flacone. 2. Collocare le provette "microfuge" da 1,5 ml con estremità avvitabile in un rack non magnetico a temperatura ambiente. A risospensione ultimata, utilizzare un puntale per pipetta a ripetizione in grado di dispensare aliquote di 25 µl, aggiungere 25 µl di mmicroparticles DNA ad ogni provetta "microfuge" da 1,5 ml. 3. Servendosi di un puntale con barriera anti aerosol sterile da 1000 µl dispensare 0,4 ml di mlysis DNA in ciascuna provetta "microfuge" da 1,5 ml con estremità avvitabile nel rack non magnetico. 4. Con un puntale con barriera anti aerosol sterile da 1000 µl, dispensare 0,4 ml di campione (campione e/o controlli) nelle provette "microfuge" da 1,5 ml con estremità avvitabile e mescolare la miscela campione-lisi eseguendo aspirazione e dispensazione fino ad ottenere una sospensione uniforme (almeno 5 cicli di aspirazione e dispensazione). 5. Quando tutti i campioni sono stati aggiunti alla mlysis DNA e dopo averli miscelati, chiudere ogni provetta con un tappo a vite, trasferire sul blocco riscaldatore a 56 C, avviare il timer e incubare tutte le provette per 10 minuti. 6. Ad incubazione terminata, rimuovere ed eliminare i tappi a vite e collocare le provette "microfuge" da 1,5 ml con estremità avvitabile in un sostegno a cattura magnetica per 2 minuti, per permettere di catturare le particelle sul lato delle provette. 12 Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina

17 7. Con le provette nel sostegno a cattura magnetica, utilizzare un puntale di pipetta sterile nuova e pulita da 1000 ml per ogni campione, per rimuovere il lisato da ogni provetta ed eliminarlo in un contenitore del liquido di scarico. Eliminare tutto il fluido di cui si è capaci. NON disturbare o aspirare le particelle catturate magneticamente. 8. Togliere la provetta "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml dal rack magnetico e trasferirla in uno non magnetico. NOTA: Aspirare e dispensare il liquido lentamente per evitare di creare schiuma. NOTA: Regolare la temperatura del blocco riscaldatore a 75 C. 1. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl e dispensare 800 µl di mwash 1 DNA, quindi risospendere le particelle magnetiche nel fluido di lavaggio aspirando gentilmente e dispensando con il puntale. Lavare le particelle dal lato della provetta, se necessario. NOTA: Quando si aggiungono i tamponi di lavaggio, dispensare il liquido lentamente per evitare di schizzare. 2. Collocare le provette microfuge con estremità avvitabile da 1,5 ml in un supporto a cattura magnetica per un minuto, per permettere di catturare le particelle sul lato delle provette. 3. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl per togliere l'mwash 1 DNA dalle provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml ed eliminarlo in un contenitore del liquido di scarico. Eliminare il fluido il più completamente possibile. NON disturbare o aspirare le particelle catturate magneticamente. 4. Togliere le provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml dal rack magnetico e trasferirle in uno non magnetico. Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina 13

18 Primo lavaggio con mwash 2 DNA 1. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl e dispensare 800 µl di mwash 2 DNA, quindi risospendere le particelle magnetiche nel fluido di lavaggio aspirando gentilmente e dispensando con il puntale. Lavare le particelle dal lato della provetta, se necessario. 2. Collocare le provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml in un supporto a cattura magnetica per un minuto, per permettere di catturare le particelle sul lato delle provette. 3. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl per togliere l'mwash 2 DNA dalle provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml ed eliminarlo in un contenitore del liquido di scarico. Eliminare il fluido il più completamente possibile. NON disturbare o aspirare le particelle catturate magneticamente. 4. Togliere le provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml dal rack magnetico e trasferirle in uno non magnetico. Secondo lavaggio con mwash 2 DNA 1. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl e dispensare 800 µl di mwash 2 DNA, quindi risospendere le particelle magnetiche nel fluido di lavaggio aspirando gentilmente e dispensando con il puntale. Lavare le particelle dal lato della provetta, se necessario. 2. Collocare tali provette in un supporto a cattura magnetica per un minuto, per permettere di catturare le particelle sul lato delle provette. 3. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl per togliere l'mwash 2 DNA dalle provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml ed eliminarlo in un contenitore del liquido di scarico. Eliminare il fluido il più completamente possibile. NON disturbare o aspirare le particelle catturate magneticamente. 4. Togliere dal rack magnetico le provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml e trasferirle nel blocco riscaldatore a 75 C, quindi lasciare incubare per 12 minuti, per permettere l'evaporazione dell'etanolo. 14 Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina

19 1. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 200 µl e dispensare 100 µl di melution Buffer DNA, quindi risospendere le particelle magnetiche nel fluido di lavaggio aspirando gentilmente e dispensando con il puntale. Lavare le particelle dal lato della provetta, se necessario. 2. Tenere le singole provette nel blocco riscaldatore a 75 C e lasciare incubare per 12 minuti. 3. Togliere dal blocco riscaldatore a 75 C le provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml e collocarle in un supporto a cattura magnetica per un minuto, per permettere di catturare le particelle sul lato delle provette. 4. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 200 µl e togliere il campione eluito dalla provetta "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml. NON disturbare o aspirare le microparticelle catturate. 5. Il campione eluito può essere conservato in una provetta "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml nuova o in una piastra in polipropilene a 96 pozzetti. Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina 15

20 Pulizia 1. Eliminare le provette dei campioni e dei controlli secondo le linee guida del laboratorio. 2. I reagenti dell Abbott msample Preparation System DNA sono esclusivamente monouso. I reagenti rimanenti e il liquido di scarico devono essere eliminati secondo le linee guida del laboratorio. AVVERTENZA: Non miscelare agenti ossidanti, quali ipoclorito di sodio, con i reagenti mlysis DNA, mwash 1 DNA ed mmicroparticles DNA dell msample Preparation System DNA. Non miscelare agenti ossidanti, quali ipoclorito di sodio, con i liquidi di scarico, in quanto tale miscela potrebbe generare gas tossici. Se la miscela si trova in un contenitore chiuso, si può creare pressione all'interno del contenitore. È responsabilità di ciascun laboratorio separare il liquido di scarico e accertarsi che sia trattato ed eliminato nel rispetto delle leggi locali e nazionali vigenti in materia. 3. Rimuovere ed eliminare tutti i materiali monouso e i rifiuti solidi secondo le linee guida del proprio laboratorio. 4. Pulire i rack dei campioni, i blocchi riscaldatori e i rack magnetici immergendoli in una soluzione di ipoclorito di sodio allo 0,5% per circa 10 minuti, quindi sciacquare completamente con acqua e lasciare asciugare all'aria. 5. Decontaminare e pulire l'area di lavoro secondo le linee guida del proprio laboratorio. 16 Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina

21 Riassunto del protocollo 25 μl mmicroparticles DNA Dispensare controllo interno e ruotare 0,4 ml mlysis DNA 56 C, 10 min sep. mag. Cartuccia di reazione Miscelare 0,4 ml campione (volume elaborato) 0,8 ml mwash 1 DNA Miscelare Cartuccia di reazione Sep. mag. TA 0,8 ml mwash 2 DNA Miscelare Cartuccia di reazione Sep. mag. TA Ripetere per un totale di due lavaggi con mwash 2 DNA Cartuccia di reazione 75 C, 12 min evaporazione melution DNA (100 μl) Cartuccia di reazione 75 C, 12 min Legenda degli elementi del procedimento TA = temperatura ambiente Eluato (100 μl) Sep mag Sep mag = separazione magnetica delle microparticelle dalla maggior parte di sovranatante Miscelare = effettuare ripetute aspirazioni e dispensazioni Figura 1.0 Riassunto del protocollo Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina 17

22 ANNOTAZIONI 18 Preparazione manuale dei campioni con l Abbott m Sample Preparation System DNA per tamponi e campioni di urina