Roma, 30 novembre 2 dicembre 2010

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1 Roma, 30 novembre 2 dicembre 2010

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5 FIT FOR PURPOSE SAMPLING T R A C E A B I L I T Y along Food and Feed Chain Whys and Wherefores of a reliable sampling Official control Legal disputes Coexistence Compliance with Legislation

6 La tracciabilità non è richiesta per contaminazioni accidentali (< 0.9%) Si deve pertanto stabilire una procedura per verificare la adventitious presence

7 Campionamento ed analisi

8 Un campionamento non corretto vanifica il lavoro e gli sforzi degli analisti e rende dubbie le conclusioni del risultato di analisi, con conseguenze di natura sia legale (labelling-consumatore) sia sanitaria (non rivelazione di eventi non autorizzati) L attuazione di opportuni piani di campionamento deve risultare prioritario da parte di tutti gli operatori del settore

9 Il principale obiettivo di un buon campionamento è quello di raccogliere dati che consentano di generalizzare all'intera popolazione i risultati ottenuti dal campione. Questo processo di generalizzazione è detto «inferenza» Popolazione campionamento Analisi del campione campione Estensione del risultato a tutta la popolazione = INFERENZA (Estratto da:

10 Errate procedure di campionamento rappresentano la fonte di errore principale per analiti distribuiti in modo eterogeneo all interno di un lotto. L ampiezza dell errore di campionamento è di gran lunga più significativa di quella derivante dall analisi quantitativa

11 ERRORE TOTALE Errore di campionamento Errore di sottocampionamento Errore di analisi LOTTO CAMPIONE SOTTOCAMPIONE ANALISI TIPI DI ERRORI CONNESSI CON LA FILIERA ANALITICA DIPARTIMENTO DI SANITA PUBBLICA VETERINARIA E SICUREZZA ALIMENTARE

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14 Stive di nave (materiale sfuso o in sacchi) Camion Container Vagoni ferroviari Autotreni Silos Cisterne Impianti di lavorazione Depositi, magazzini Aziende agricole/zootecniche Dettaglio

15 Campionamento Da evitare il controllo nei silos Da preferire quello sui camion in condizioni dinamiche piuttosto che statiche Campionatori automatici Qualora si proceda a campionamento di tipo dinamico, gli intervalli temporali tra un campione elementare e il successivo sono determinati secondo la formula intervallo di campionamento (minuti) = Durata dello scarico (in minuti) /N. di CI In caso di campionamento di tipo statico, i campioni elementari vanno prelevati in specifici punti di campionamento (distribuiti uniformemente sul volume totale del lotto)- vedi norma ISO 24333:2009.

16 Il principio generale di un buon campionamento prevede che ciascuna unità della popolazione abbia la stessa probabilità di essere scelta. In tal caso il campione viene detto «randomizzato» o «casuale» (assenza di errori sistematici (bias)).

17 Nel caso delle sostanze eterogeneamente distribuite in una partita (micotossine, OGM, etc.), il campionamento casuale non è quello più appropriato in quanto porterebbe a stime non accurate (distribuzione non normale). Infatti, in molti casi non è attuabile, perché ogni unità non avrebbe la stessa probabilità di essere prelevata in quanto alcune unità in particolari siti sono impossibili da raggiungere a differenza di altre unità facilmente prelevabili (silos, magazzini, camion, stive [statico])

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19 Campo di applicazione Sementi Alimenti preconfezionati Mangimi Prodotti agricoli sfusi

20 Raccomandazione della Commissione (2004/787/CE) del 4 ottobre 2004 D.M. 22/12/1992: Metodi ufficiali di analisi per le sementi. G.U. del 4/1/1993 Suppl. n. 2

21 Protocolli di campionamento LOTTI DI SEMENTI e di altri materiali di propagazione vegetale I campioni dovrebbero essere prelevati secondo i metodi internazionali in uso e da lotti aventi le dimensioni stabilite dalle direttive europee (66/401/CEE, 66/402/CEE, 68/193/CEE, 92/34/CEE, 98/56/CEE, 1999/105/CEE, 2002/54/CEE, 2002/55/CEE, 2002/56/CEE, 2002/57/CEE DEL Consiglio. I principi generali e i metodi di campionamento dovrebbero essere conformi alle norme ISTA e alle istruzioni del manuale ISTA Il livello di qualità dei lotti di sementi o di altri materiali di propagazione e l incertezza statistica ad esso associata sono definiti in relazione alle soglie stabilite per gli OGM (percentuale delle copie di DNA GM rispetto alle copie di DNA specifico del taxon bersaglio, calcolata in termini di genomi aploidi)

22 D.M. 27/11/2003: Campagna di semina Modalità di controllo delle sementi di mais e soia per la presenza di OGM G.U. del 3/12/2003 Serie Generale n. 281

23 Disposizioni Attuazione di un programma annuale di controllo delle sementi finalizzato all accertamento dell assenza di sementi OGM nelle sementi prodotte in Italia, in quelle provenienti dai Paesi dell Unione Europea e dai Paesi Terzi Il programma si realizza attraverso il campionamento fino al 20% dei lotti di sementi di mais e soia destinati ad essere commercializzati Enti coinvolti: ICRF, Agenzia delle Dogane, ENSE, Istituto Sperimentale per la Cerealicoltura di Bergamo (revisione) I lotti campionati possono essere immessi sul mercato solo dopo la comunicazione da parte dell Ente sulla base del riscontro analitico.

24 D.M. 22/12/1992: Metodi ufficiali di analisi per le sementi. G.U. del 4/1/1993 Suppl. n. 2 CAMPIONE DI ANALISI Il campione di analisi deve contenere almeno semi Il peso di semi può essere utilizzato per stabilire le dimensioni dei campioni in termini di peso Peso di semi Peso di semi Soia gr gr. Mais gr gr.

25 Ente nazionale delle sementi elette (ENSE) PROCEDURA PER L'ESECUZIONE DELLE ANALISI 1. Macinazione del campione di analisi costituito da semi. 2. Due estrazioni indipendenti di DNA per campione (ciascuna da 100 mg di farina). 3. Analisi di 3 repliche per ogni estrazione, utilizzando la metodologia PCR Real Time (Screening iniziale con promotore 35 S, seguito, se necessario, da saggio specifico appropriato). 4. Inserimento di tutti i campioni di controllo necessari per verificare l'affidabilita' dei risultati (campioni standard per la costruzione della curva di quantificazione - Certified Reference Materials IRMM, controlli negativi, geni endogeni). 5. Espressione del risultato. Il risultato dell'analisi viene espresso, per approssimazione alla prima cifra decimale, come media delle 6 repliche (3 per ogni estrazione) e viene ritenuto valido se il coefficente di variazione non supera il 30%. Nel caso in cui il coefficiente di variazione superi il 30% o i risultati fra le repliche siano discordanti, si procede ad una riestrazione di DNA dal campione. Qualora l'esito dell'analisi sia ancora incerto, e' necessario analizzare un secondo campione di 3000 semi. D.M. 3/12/2003: Campagna di semina Modalità di controllo delle sementi di mais e soia per la presenza di OGM G.U. del 3/12/2003 Serie Generale n. 281

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27 REGOLAMENTO (CE) N. 152/2009 DELLA COMMISSIONE del 27 gennaio 2009 che fissa i metodi di campionamento e di analisi per i controlli ufficiali degli alimenti per gli animali L 54/1 - Gazzetta ufficiale dell Unione europea

28 Partita da campionare: quantità di prodotto costituente un'unità e avente caratteristiche presunte uniformi. Per le micotossine - Sottopartita: porzione di una partita designata per essere sottoposta a campionamento; ciascuna sottopartita deve essere fisicamente separata e identificabile (riferimento: Regolamento CE 401/2006). Campione elementare: quantità prelevata da un punto della partita campionata. Campione globale: insieme di campioni elementari prelevati da una stessa partita campionata. Per le micotossine e OGM: nel caso di prodotti in confezione inferiori a 1 kg è necessario aprire le singole confezioni e riunire tutti i campioni elementari formanti il campione globale dopo aver preso le precauzioni necessarie per evitare possibili contaminazioni crociate. Campione ridotto: parte rappresentativa del campione globale, ottenuta mediante riduzione di quest'ultimo. Per le micotossine e OGM: per le sostanze o i prodotti ripartiti in modo non uniforme è necessario ottenere il campione ridotto previa macinazione del campione globale. Campione finale (questa definizione sostituisce quella di aliquota): parte del campione ridotto o del campione globale omogeneizzato. Per le micotossine e OGM: per le sostanze o i prodotti ripartiti in modo non uniforme il campione finale deve essere formato o dal campione ridotto o previa macinazione del campione globale

29 Cosa c è di nuovo L espressione del risultato corretto per il recupero e con la indicazione della Non necessari se il risultato di analisi incertezza estesa è di molto inferiore al limite massimo tollerabile e se il recupero è compreso Introduzione tra del il 90% criterio ed il 110% di accettazione identico a quello del Regolamento 401/2006

30 Nuovo criterio di conformità

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35 ALIMENTI ALLA RINFUSA - PESO di 1500 tonnellate La partita sarà suddivisa in 3 sottopartite da 500 t ciascuna se divisibile Per ciascuna delle 3 sottopartite 1 40 Ciascuna sottopartita deve essere oggetto di campionamento separato. In funzione delle risorse disponibili si può scegliere di campionare una sola delle sottopartite CAMPIONI ELEMENTARI (CE) Da ogni sottopartita: prelevare N. 40 CE di MINIMO 400 g ciascuno CAMPIONE GLOBALE (CG) Per ogni sottopartita: sono richiesti 4 CG (ciascuno avente peso non inferiore a 4 Kg), costituiti dalla somma dei campioni elementari CG 1 CG Verbale 2 Verbale CAMPIONE FINALE (CF) Costituito dalla riduzione di ciascuno dei 4 campioni globali Peso del campione finale destinato all analisi non inferiore a 500 g E prevista la formazione di 4 CF per ciascun CG CF1 prima istanza CF1 revisione CF1 Autorità giudiziaria CF1 Importatore/ Produttore CF 2 CF 3 CF1 Allevatore CF4 prima istanza CF4 revisione CF4 Autorità giudiziaria CF4 CF4 Importatore/ Allevatore Produttore DIPARTIMENTO DI SANITA PUBBLICA VETERINARIA E SICUREZZA ALIMENTARE

36 Campioni finali Da ogni campione globale si ottengono campioni finali da destinare all analisi il cui peso non deve essere inferiore a 500 grammi

37 Campionamento al dettaglio

38 DPR 26 marzo 1980, n. 327 Art. 6, 3. NORME GENERALI DA SEGUIRE PER IL PRELIEVO DEI CAMPIONI DA ANALIZZARE c) Nel caso di sostanze o prodotti non omogenei contenuti in un unico recipiente e conservati alla rinfusa, se ne prelevano quantità parziali nella parte superiore centrale e inferiore della massa, l insieme delle quantità parziali rappresentative della partita vengono riunite e mescolate per ricavare il campione per l analisi. d) Nel caso di sostanze o prodotti non omogenei contenuti in più recipienti, se ne prelevano quantità parziali da diversi recipienti scelti a caso e rappresentativi della partita; le quantità parziali prelevate vengono riunite e mescolate per ricavare il campione per l analisi. e) Nel caso di sostanze o prodotti contenuti in confezioni originali chiuse e quando la natura di tale sostanza o prodotto, e il tipo di controllo analitico da effettuare ne consentano l apertura si prelevano a caso, da un numero di confezioni rappresentative della partita, aliquote campione per l analisi. di sostanza o prodotto dalle quali, riunite e mescolate, si ricava il f) Nel caso di sostanze o prodotti contenuti in confezioni originali chiuse e quando la natura delle sostanze o prodotti, e il tipo di controllo analitico da effettuare non ne consentano l apertura si preleva a caso, dalla partita, un numero rappresentativo di confezioni per formare il campione per l analisi.

39 Come prelevare l aliquota? CF

40 All importazione (grandi partite), prima della trasformazione, centri di stoccaggio, dettaglio

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42 Dai 4 campioni finali si ottengono quattro risultati,ciascuno dei quali media di due determinazioni CF1 = C, CF2=C, CF3=C, CF4=NC Il risultato finale lo esprimiamo come media dei 4 risultati (RISCHIO ALTO DI DILUIRE FORTI CONTAMINAZIONI) o adottiamo un criterio per cui se almeno uno dei 4 o 5 risultati è non conforme tenuto conto del recupero e dell incertezza, la partita è NC? (Regolamento 401/2006)

43 ISS SAMPLING TEAM Carlo Brera Roberta Onori Barbara De Santis Francesca Debegnach Emanuela Gregori Marzia De Giacomo Elisabetta Prantera Elena Pannunzi