I RETICOLOCITI M. BUTTARELLO ULSS 19 ADRIA (RO)

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1 I RETICOLOCITI M. BUTTARELLO ULSS 19 ADRIA (RO)

2 RETICOLOCITI: DEFINIZIONE (CLSI H44-A2) - CELLULE ERITROIDI DI TRANSIZIONE FRA IL PRECURSORE NUCLEATO E L ERITROCITA MATURO - DEFINIZIONE MICROSCOPICA: CELLULE CHE CONTENGONO ALMENO 2 GRANULI COLORABILI CON NMB, VISIBILI SENZA AGGIUSTAMENTO DEL FUOCO E LONTANI DAL MARGINE CELLULARE

3 RETICOLOCITI: COLORAZIONE NMB

4 MATURAZIONE E CARATTERISTICHE MORFOLOGICO-STRUTTURALI

5 L ILOT ERYTHROBLASTIQUE (M. Bessis 1958) (unitè functionelle de la moelle osseuse)

6 ISOLOTTO ERITROBLASTICO: IMMAGINE TRIDIMENSIONALE

7 MATURAZIONE DEI PRECURSORI ERITROIDI

8 VARIAZIONI STRUTTURALI DURANTE LA MATURAZIONE RETICOLOCITARIA Chasis et al, Blood 1989

9 NASCITA DELL ERITROCITA Lee et al Griffiths et al. Blood 2012

10 ENDOCITOSI ED ESOCITOSI SUI RETICOLOCITI IN MATURAZIONE Griffiths et al. Blood 2012

11 FORMAZIONE DI UN VACUOLO INTRARETICOLOCITARIO Koury et al, Blood 2005

12 DIMOSTRAZIONE IN VITRO DELLA RIELABORAZIONE STRUTTURALE DELLA MEMBRANA CITOPLASMATICA RETICOLOCITARIA Chasis et al, Blood 1989

13 RETICOLOCITI ED RNA

14 RNA RETICOLOCITARIO E STABILITÀ DI MEMBRANA Lee et al. 2014

15 VARIAZIONI STRUTTURALI NEL PASSAGGIO DA RETICOLOCITA AD ERITROCITA MATURO (soggetti normali) - RIDUZIONE DEL VOLUME (~ 19%) - PERDITA DEL CONTENUTO EMOGLOBINICO (~ 3%) - AUMENTO DELLA CONCENTRAZIONE EMOGLOBINICA (~ 14%)

16 RETICOLOCITI: CONTEGGIO

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19 RETICOLOCITI: TEMPO DI MATURAZIONE Finch, Blood 1982

20 CORRELAZIONE FRA EMATOCRITO E TEMPI DI MATURAZIONE MIDOLLARI ED EMATICI EMATOCRITO 45 NORMOBLASTI E RETICOLOCITI 3.5 RETICOLOCITI CIRCOLANTI

21 MISURA DEL TURNOVER ERITROCITARIO PER MEZZO DEL CONTEGGIO RETICOLOCITARIO - UTILIZZARE IL CONTEGGIO ASSOLUTO (x 10 9 /L) - CORREGGERE PER IL TEMPO DI MATURAZIONE (RETICOLOCITI DA SHIFT) - IN ALTERNATIVA AL PRECEDENTE UTILIZZARE L IRF

22 TEMPO DI MATURAZIONE DEI RETICOLOCITI IN VARIE CONDIZIONI PATOLOGICHE From Baldini and Pannaciulli 1960

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24 Conteggio reticolocitario con Sysmex XE 2100/5000

25 ABX VEGA / PENTRA: MODULO PER IL CONTEGGIO RETICOLOCITARIO INSERITO NELL ANALIZZATORE

26 Conteggio reticolocitario con Coulter UniCel DxH 800

27 CONTEGGIO RETICOLOCITARIO CON CELL-DYN SAPPHIRE

28 Conteggio reticolocitario con Sysmex XN

29 CONTEGGIO RETICOLOCITARIO CON MINDRAY BC6800

30 HEALTHY HEMOLITIC ANEMIA/MDS IRON DEFICIENCY

31 Advia 120: mappa RBC/RET

32 Advia 120: mappa RBC/RET dopo terapia

33 RETICOLOCITI: INTERVALLI DI RIFERIMENTO x10 9 /L AD ASS Advia CD ASS CD ASS LH PE NASS Pentra XE ASS XE RE FASS Riferimento

34 PARAMETRI MATURATIVI

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36 IRF: FRAZIONE IMMATURA DEI RETICOLOCITI - CORRISPONDE AI RETICOLOCITI AD ELEVATO CONTENUTO IN RNA - VARIABILE DA 0.0 A ESPRIME L ATTIVITA ERITROPOIETICA MIDOLLARE PRECOCE

37 APPLICAZIONI CLINICHE CONSOLIDATE (Reticolociti: IRF) 1) Controllo precoce della ripresa eritropoietica dopo trapianto di midollo o aplasia comunque indotta 2) Classificazione delle anemie ( ret, IRF: emolitiche o da perdita; ret, IRF: ridotta attività midollare; ret, IRF: infezione o MDS) 3) Controllo dell efficacia della terapia (forme carenziali, EPO) 4) Diagnosi di anemia aplastica

38 IRF Reticolociti (x10 9 /L)

39 IRF: INTERVALLI DI RIFERIMENTO IR FAD2 Advia CD CD IRF LH IRF LH Pentra PE NIRF XE XE2100 IRF Simel- emat Bulian, Doretto 2004

40 INDICI RETICOLOCITARI

41 INDICI RETICOLOCITARI -ABBOTT SAPPHIRE -ABX HORIBA PENTRA 120 Retic MCVr, MCHr MCVr - SIEMENS ADVIA 2120 MCVr, CHr - BECKMAN COULTER LH 750 MSRV - SYSMEX XE 5000 RET-He MCVr: volume reticolocitario medio; CHr: contenuto emoglobinico reticolocitario medio; MRSV: volume cellulare medio dei reticolociti sfericizzati; RET-He: equivalente emoglobinico espresso in pg

42 APPLICAZIONI CLINICHE CONSOLIDATE (reticolociti: CHr/Ret He) 1) Diagnosi di eritropoiesi ferrocarente 2) Diagnosi di deficit funzionale di ferro (dializzati o altre condizioni di trattamento con EPO) 3) Controllo della risposta alla somministrazione di ferro (ev o os)

43 APPLICAZIONI CLINICHE CONSOLIDATE (reticolociti: MCVr) 1) Diagnosi di eritropoiesi ferrocarente 2) Verifica precoce della risposta alla somministrazione di ferro 3) Controllo precoce della risposta alla somministrazione di acido folico e cianocobalamina 4) Controllo dell abuso di eritropoietina nello sport (Ht-ret)

44 CHret/Ret He/MCHr: INTERVALLI DI RIFERIMENTO NELLA POPOLAZIONE ADULTA Parametro mediana CHret (pg) Ret He (pg) MCHr (pg) Buttarello 2009/Hoffmann 2012

45 MCVr: INTERVALLI DI RIFERIMENTO NELLA POPOLAZIONE ADULTA Parametro mediana MCVr (fl) Pentra MCVr (fl) ADVIA 120 MSRV (fl) LH 750 SAPPHIRE (fl)

46 CHr (pg) MCVr (fl) RETICOLOCITI (%) VALUTAZIONE DELLA RISPOSTA TERAPEUTICA CON I MODERNI INDICI RETICOLOCITARI MCVr CHr RET % GIORNI INIZIO TERAPIA CON B12 INIZIO TERAPIA CON FERRO

47 CHr (pg) MCVr (fl) RETICOLOCITI (x 10 9 /L) MCVr CHr RET GIORNI INIZIO TERAPIA CON FERRO M.Buttarello

48 CHr (pg) MCVr (fl) RETICOLOCITI (x 10 9 /L) MCVr 300 CHr 120 RET INIZIO TERAPIA CON FERRO GIORNI M.Buttarello