TIPI DI CROMATOGRAFIE
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- Silvano Pinto
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1 Corso di Chimica Analitica TIPI DI CROMATOGRAFIE Prof. Paola Gramatica
2 Fasi in successione: 2) Separazione dei componenti la miscela Dopo l isolamento della miscela da analizzare, se ne devono separare i singoli componenti applicando alcuni dei più comuni metodi di separazione cromatografica: Cromatografia su strato sottile (TLC) Cromatografia su colonna gravitazionale (varie fasi stazionarie) Cromatografia su colonna ad alta efficienza (HPLC) Gas-Cromatografia (GC)
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4 METODI CROMATOGRAFICI Si distinguono in base alla fase mobile eluente liquida (LC) o gassosa (GC). CROMATOGRAFIA LIQUIDA (LC) Adsorbimento Liquido-Solido (TLC, Colonne) Ripartizione Liquido-Liquido (HPLC) Scambio Ionico Esclusione molecolare (Gel permeation) Affinità GAS-CROMATOGRAFIA (GC) Adsorbimento Gas-Solido Ripartizione Gas-Solido
5 TIPI di CROMATOGRAFIE 1
6 TIPI di CROMATOGRAFIE 2
7 PRINCIPI di BASE delle SEPARAZIONI CROMATOGRAFICHE Il più comune principio alla base delle tecniche cromatografiche è la competizione tra forze che tendono a legare alla fase stazionaria (fase fissa) i singoli componenti della miscela da analizzare e forze che tendono a staccare ed eluire questi componenti con la fase mobile (eluente). I diversi componenti della miscela saranno trattenuti ed eluiti in modo diverso e quindi separati lungo il sistema cromatografico prescelto.
8 CROMATOGRAFIE LIQUIDE Fasi mobili (liquidi organici) sia per Cromatografia su strato sottile (TLC) Cromatografia su colonna Cromatografia su colonna ad alta prestazione (HPLC) La polarità della fase mobile determina la forza e quindi la velocità con cui un singolo componente, della miscela da separare, viene eluito dal sistema cromatografico (viene cioè staccato dalla fase stazionaria e trascinato con la fase mobile). E quindi determinante per differenziare dagli altri il movimento di ogni singolo prodotto da separare nel sistema cromatografico utilizzato.
9 SERIE ELUOTROPICA Singoli solventi o miscele a varie composizioni.
10 TECNICHE CROMATOGRAFICHE Cromatografia piana Su Carta LC Liquido Crom Su Strato Sottile (TLC) Cromatografia su colonna Liquido Crom (LC) a Pressione Atmosferica (colonne gravitazionali) a Pressione Elevata (HPLC) Gas Crom (GC) Colonne Impaccate Colonne Capillari
11 TIPI di CROMATOGRAFIE : Cromatografia piana La cromatografia piana su strato sottile (TLC), o su carta, è una cromatografia liquida di adsorbimento liquido-solido sistema ascensionale: l eluente liquido (la fase mobile) sale per capillarità sulla fase fissa solida (carta, silice o allumina supportata su vetro o alluminio), nel suo movimento ascensionale scioglie, e quindi stacca dall interazione con la fase fissa, preferenzialmente le sostanze più solubili in esso, spostandole più in alto nella lastrina. Comunemente, sostanze meno polari corrono verso il fronte dell eluente, mentre le più polari restano assorbite in basso. R f = retention factor R f è diverso per uno stesso prodotto a seconda dell eluente utilizzato. Per caratterizzare in TLC un prodotto bisogna indicare accanto al suo R f il sistema eluente con cui questa separazione è stata ottenuta.
12 Cromatografia su strato sottile (TLC) Piana, Liquido Crom., Adsorbimento Solido-liquido R f = retention factor è il parametro che misura la corsa di ogni singolo prodotto rispetto alla corsa dell eluente.
13 TIPI di CROMATOGRAFIE : Cromatografie su Colonna La cromatografia su colonna è un sistema analogo alla TLC, ma gravitazionale per cui le sostanze che corrono di più si trovano nel basso della colonna e vengono eluite per prime. Vari tipi: gravitazionale, HPLC, GC. Caratteristica principale della GC è la fase mobile inerte: gas di trasporto, e della HPLC la pressione di esercizio.
14 Cromatografia su colonna Gravitazionale Liquido Crom., Adsorbimento Solido-liquido
15 Cromatografia su colonna e TLC
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