Selezione di un rilevante in vitro di cellule modello per la prova e il confronto gli effetti di un Choukroun's fibrina ricco di piastrine (PRF)

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1 Selezione di un rilevante in vitro di cellule modello per la prova e il confronto gli effetti di un Choukroun's fibrina ricco di piastrine (PRF) membrana e un plasma ricco di piastrine (PRP) gel: trucchi e le trappole Al Direttore: Recentemente abbiamo letto con grande interesse un articolo pubblicato nel OOOOE, dove Egli et AL.1 provato a confrontare gli effetti in vitro sulla proliferazione e differenziazione degli osteoblasti ratto indotta da un plasma ricco di piastrine (PR) e un fibrina ricco di piastrine (PRF). Abbiamo un significativo esperienza con le colture cellulari usando PRF, 2,3 e il metodo e la terminologia utilizzata da Lui et al. elevare diverse domande che richiedono discussione. Nel loro studio, Lui et al. ha deciso di incubare e PRF PRP in condizioni di coltura per 28 giorni e per raccogliere loro essudati a 5 volte sperimentale: 1, 7, 14, 21, e 28 giorni. Gli autori hanno poi testato gli effetti di questi essudati su colture cellulari. Il vantaggio di questo approccio è quello di limitare le reazioni immunitarie interspecie tra PRP umano / PRF e colture cellulari di ratto. Il problema è che gli autori hanno verificato gli effetti del solo fattori di crescita e proteine in sospensione nella PRP /PRF essudato e non gli effetti veri della fibrina tutto prodotto. Questa è una limitazione importante, perché è PRF un denso a base di fibrina biomaterial4 solido con uno specifico architettura e il contenuto della matrice cellulare (aggregati piastrinici, leucociti attivati), 5 e il suo essudato è chiaramente non la parte più interessante del prodotto. Allo stesso modo, anche se la maggior parte PRPS sono omogenei piastrinica liquido sospensioni, i loro non sono gli essudati bioattivi unico componenti, perché si sono aggregati piastrinici e la loro gel di fibrina associata anche innescare molti biologico mechanisms.6, 7. Per quanto riguarda il PRP, gli autori hanno affermato di utilizzare il Curasan metodo (Kleinostheim, Germania), ma purtroppo essi non valutare il contenuto di leucociti il loro ultimo product.8-10 Curasan PRP è effettivamente classificato nei leucociti e plasma ricco di piastrine (L-PRP) di famiglia. 4 leucociti sono giradischi del fattore di crescita rilascio e svolgono un ruolo significativo nella biologia di queste products.11-14, inoltre, gli autori non hanno punto come e quando hanno attivato il PRP (utilizzando trombina o Batroxobina), e sembra che il PRP si in realtà non è mai attivato in un gel. Questo approccio è discutibile, perché il vero prodotto finale utilizzato in pazienti è un gel di L-PRP (nella maggior parte dei casi), non un piastrinica unactivated suspension.15, 16. Per quanto riguarda la PRF, ci sono questioni molto gravi sul protocollo descritto da Lui et al. Infatti, il autori ha affermato di utilizzare il "protocollo PCCS" (piastrine Concentrato Sistema di raccolta, 3I, Palm Beach Gardens, FL, USA) per la produzione di PRF, e di cui il nostro propri riferimenti circa la PRF technology.17, 18 I problema è che Choukroun la PRF non possono essere prodotti con il dispositivo PCCS, perché quella centrifuga e i tubi sono specificamente progettati per la produzione automatizzata di un L-PRP.8, 9 Inoltre, gli autori hanno sostenuto di aver quantificato le piastrine in PRF, ma questo è impossibile. In effetti, il concetto di produzione di PRF è basata sulla attivazione delle piastrine durante la centrifugazione costituire fibrina forte / e filoni piastrine un denso finale PRF clot19, pertanto, esiste solo in PRF una forma materiale solido, mai in forma liquida. Un accurato e la quantificazione diretta del contenuto delle piastrine è impossibile e abbiamo dimostrato solo di recente e indirettamente soustraction da che? il 95% delle piastrine del raccolta di sangue iniziale sono stati fusi in PRF clot.5 Di conseguenza, non abbiamo un'idea chiara sul "PRF" gli autori ha affermato di utilizzare nel loro studio. PRF è un libero e open-access

2 technique.20, tuttavia, il nome del PRF è un marchio registrato e fa riferimento ad uno specifico kit di preparazione (centrifuga PC02 e kit di raccolta; Processo, Nizza, Francia), processo di produzione, e finale prodotto. Questa protezione del marchio non è stato eseguito per motivi industriali, ma di identificare con chiarezza la tecnica e proteggerlo dalla confusione o malintesi scientifica. Perché non c'è nessun commerciale significativo interesse per la vendita di dispositivi PRF, l'unico modo per proteggere PRF è stato quello di costringere la gente a rispettare la definizione del prodotto e quindi a rispettare il marchio. In questo articolo, sembra che il prodotto è stato testato un liquido concentrato piastrinico prodotto con il PCCS e forse non è un originale Choukroun PRF. Particolare attenzione deve da adottare per rispettare una chiara e affidabile per terminology4 evitare fraintendimenti significativi in letteratura. Infine, la prova in vitro gli effetti della vita complessa biomateriale come coagulo PRF Choukroun o membrana richiede la massima attenzione per ottenere risultati affidabili. Qualunque sia il metodo, è importante per testare la PRF intero e non solo frammenti, 2 perché PRF presenta una specifica architettura 3-dimensionale e cellule distribution.5 Inoltre, occorre prestare attenzione alle sempre mantenere PRF in un mezzo osmotico (come il terreno di coltura) per preservare il contenuto della cella (leucociti in particolare) dal deterioramento. Nel loro studio, He et al. utilizzato un indiretto interessante metodo per testare l'effetto del essudati, ma no pensare che non prova veramente il materiale completo come quello usato nei pazienti. E 'quindi impossibile tracciare importanti conclusioni con questa metodologia specifica. Dalla nostra esperienza, 2,3 una completa e affidabile metodologia per testare in vitro gli effetti cella di un PRP o di un PRF richiede: Per usare le cellule umane in coltura primaria dal donatore stesso che per il concentrato di piastrine, per evitare immunitario reazioni Fig. 1. Cultura osteoblasti umani primari in contatto con un fibrina ricco di piastrine (PRF) membrana in una piastra di coltura di grandi dimensioni (60 mm di diametro) dopo 21 giorni di cultura. La targa è stata trattati con Von Kossa colorazione noduli di mineralizzazione mostra in nero. La membrana di PRF è stato rimosso dopo 7 giorni,ma la sua traccia è ancora visibile al centro del piatto (punteggiata cenni). incrociate e altri pregiudizi connessi. Perché non è possibile produrre PRF nei ratti, topi le cellule dovrebbero essere evitato. Per introdurre il prodotto nel suo complesso attivato, come un PRP attivato gel o il coagulo intero PRF o membrana, nella piastra di coltura, per osservare le reazioni complesse e l'equilibrio tra le cellule coltivate e la biomateriale. Come mostrato in fig. 1, la cultura piatto dovrebbe sempre essere grande abbastanza per ricevere una completa coagulo (e anche alcuni grumi quando per testare una dose-dipendente effetto) senza comprimere le cellule coltivate. In i nostri studi con PRF Choukroun, il 2,3 abbiamo sempre usato piastre di coltura con un diametro minimo di 60 mm, dando spazio ad una piena interazione tra le cellule e biomateriale e consentendo l'espressione di vari modelli di sviluppo delle cellule. A considerare il ruolo chiave dei leucociti, quando present.14, 22, infatti, Curasan PRP e Choukroun's PRF sono rispettivamente un PRP-L-L e un PRF4 e leucociti contengono. Tutte le colture cellulari con prodotti da queste famiglie sono necessariamente cocultures

3 con i leucociti, come è stato recentemente published.2, 3 L'analisi dei risultati ottenuti con PRP / PRF è quindi particolarmente complesso, ma anche veramente emozionante, perché le interazioni biologiche e dei meccanismi di questi prodotti del sangue devono ancora essere identificati e chiariti. modelli cellulari con PRF sono di interesse di particolare rilievo, perché Choukroun di PRF è un sangue ottimizzato clot5: tutti i modelli di cellulare con PRF sono anche indagini su il processo di guarigione dopo la coagulazione, con un potenziale interesse al di là del campo stretto concentrati piastrinici per uso chirurgico. Questo campo di ricerca, tuttavia, richiede a seguito di una rigorosa terminologia e metodologia per evitare le trappole molti scientifica e le relative malintesi. David M. Dohan Ehrenfest, DDS, PhD Dipartimento di Biomateriali Istituto di Scienze Cliniche Sahlgrenska Academy, Università di Göteborg Gothenburg, Svezia Il LoB5 Fondazione per la ricerca Parigi, Francia Marco Del Corso, DDS Private Practice, Torino, Italia Dipartimento di Odontostomatologiche e Maxillo-Facciale Scienze Università Federico II di Napoli Napoli, Italia Francesco Inchingolo, MD, DDS, PhD Dipartimento di Scienze chirurgiche e dentali Università degli Studi di Bari Bari, Italia Charrier, Jean-Baptiste, MD, PhD Dipartimento di Otorinolaringoiatria, Chirurgia del collo Università di Paris Sud AP-HP Ospedale Bicêtre Francia Le Kremlin Bicêtre, Il LoB5 Fondazione per la ricerca Parigi, Francia RIFERIMENTI 1. He L, Lin Y, Hu X, Y Zhang, Wu H. Uno studio comparativo di fibrina ricco di piastrine (PRF) e di plasma ricco di piastrine (PRP) del effetto della proliferazione e differenziazione degli osteoblasti ratto in vitro. Oral Surg Oral Med Radiol Pathol orale orale Endod 2009; 108: DM Ehrenfest Dohan, Diss A, G Odino, P Doglioli, MP Hippolyte, JB Charrier. In effetti in vitro di PRF Choukroun's (ricco di piastrine fibrina) su fibroblasti gengivali umani, prekeratinocytes cutanea, preadipocytes, osteoblasti e maxillo-facciale in colture primarie. Oral Surg Oral Med Radiol Pathol orale orale Endod 2009; 108: Dohan DM Ehrenfest, P Doglioli, GM de Peppo, M Del Corso, JB Charrier. fibrina ricco di piastrine Choukroun's (PRF) stimola in

4 vitro la proliferazione e la differenziazione delle ossa umane mesenchimali orale cellule staminali in modo dose-dipendente. Arch Oral Biol 2010; 55: Dohan DM Ehrenfest, L Rasmusson, Albrektsson T. Classificazione di concentrati piastrinici: dal puro plasma ricco di piastrine (PPRP) di leucociti e fibrina ricco di piastrine (L-PRF). Tendenze Biotechnol 2009; 27: DM Dohan Ehrenfest, M Del Corso, Diss A, Charrier Mouhyi J, JB. architettura tridimensionale e la composizione delle cellule di un coagulo di fibrina Choukroun ricco di piastrine e di membrana. J Periodontol 2010; 81: T Kawase, Okuda K, Y Saito, Yoshie H. evidenze in vitro che gli effetti biologici di plasma ricco di piastrine su legamento parodontale cellule non è mediato esclusivamente dal transforminggrowth costituente fattore-beta o fattore di crescita derivato dalle piastrine. J Periodontol 2005; 76: T Kawase, Okuda K, Wolff LF, Yoshie H. ricco di piastrine plasmaderived formazione di coaguli di fibrina stimola la sintesi del collagene legamento parodontale e cellule osteoblastiche in vitro. J Periodontol 2003; 74: Weibrich G, WK Kleis. Curasan kit PRP vs sistema PCCS PRP. conta piastrinica e l'efficienza di raccolta di due metodi differenti per la preparazione di plasma ricco di piastrine. Clin Oral Implants Res 2002; 13: Weibrich G, Kleis WK, Hafner G. La crescita dei livelli del fattore della plasma ricco di piastrine prodotte da due diversi metodi: curasantype kit PRP versus sistema PCCS PRP. Int J Oral Maxillofac Impianti 2002; 17: G Weibrich, WK Kleis, G Hafner, WE Hitzler, Wagner W. Confronto di piastrine, leucociti ed i livelli di fattore di crescita in point-of-care plasma arricchito di piastrine, preparati utilizzando una versione modificata Curasan kit, con preparazioni ricevuti da un locale del sangue banca. Protesi Orale Res Clin 2003; 14: Cieslik-Bielecka A, T Bielecki, TS Gazdzik, Arendt J, W Krol, Szczepanski T. piastrine e globuli bianchi autologhi possono migliorare guarigione delle lesioni ai tessuti infetti ad alta energia soft. Transfus Apher Sci 2009; 41: Cieslik-Bielecka A, TS Gazdzik, Bielecki TM, T. Perché Cieslik il gel ricco di piastrine è attività antimicrobica? [Lettera]. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 2007; 103:303-5; autore risposta PA Everts, Hoffmann J, Weibrich G, CB Mahoney, Schonberger JP, Van Zundert A, et al. Le differenze di fattori di crescita piastrinici rilascio e la cinetica dei leucociti durante il gel piastrinico autologo formazione. Transfus Med 2006; 16: PA Everts, Van Zundert A, JP Schonberger, Devilee RJ, Knape JT. Cosa si usa: plasma ricco di piastrine o di piastrine-leucociti gel? J Biomed Mater Res A 2008; 85: T Bielecki, Gazdzik TS, T. Szczepanski Re: Gli effetti del locale plasma ricco di piastrine consegna su diabetici frattura [lettera] guarigione ossa; 39:1388; autore risposta 1389.

5 16. Fernandez-Barbero JE, Galindo-P Moreno, Avila-Ortiz G, Caba O, Sanchez Fernandez-E, HL Wang. Citometria a flusso e morfologica caratterizzazione di gel di plasma ricco di piastrine. Clin Oral Impianti Res 2006; 17: DM Dohan, Choukroun J. PRP, cprp, PRF, PRG, PRGF, FC... Come trovare la tua strada nel groviglio di concentrati piastrinici? Orale Surg Oral Med Radiol Pathol orale orale Endod 2007; 103: DM Dohan, Choukroun J, Diss A, SL Dohan, Dohan AJ, Mouhyi J, et al. fibrina ricco di piastrine (PRF): una piastrina di seconda generazione concentrato. Parte II: le caratteristiche biologiche delle piastrine-related. Oral Surg Oral Med Radiol Pathol orale orale Endod 2006; 101: e DM Dohan, Choukroun J, Diss A, SL Dohan, Dohan AJ, Mouhyi J, et al. fibrina ricco di piastrine (PRF): una piastrina di seconda generazione concentrato. Parte I: concetti tecnologici ed evoluzione. Orale Surg Oral Med Radiol Pathol orale orale Endod 2006; 101: E Choukroun J, Adda F, Schoeffler C, Vervelle A. Une opportunité en paro-implantologie: le PRF. Implantodontie 2001; 42: Dohan DM Ehrenfest, de Peppo GM, P Doglioli, Sammartino G. lento rilascio di fattori di crescita e trombospondina-1 in Choukroun's fibrina ricco di piastrine (PRF): un gold standard da raggiungere per tutti concentrati piastrinici chirurgico tecnologie. Fattori di crescita 2009; 27: DM Dohan, Choukroun J, Diss A, SL Dohan, Dohan AJ, Mouhyi J, et al. fibrina ricco di piastrine (PRF): una piastrina di seconda generazione concentrato. Parte III: attivazione dei leucociti: una nuova funzionalità per concentrati piastrinici? Oral Surg Oral Med Oral Pathol orale Radiol Endod 2006; 101: E51-5. doi: /j.tripleo Selezione di un rilevante in cellulari in vitromodello per la prova e il confronto gli effetti di una plateletrich Choukroun fibrina (PRF) e di una membrana plasma ricco di piastrine (PRP) del gel: Trucchi e trappole In risposta: Abbiamo letto attentamente la lettera di David M. Dohan Ehrenfest et al. per quanto riguarda il nostro articolo "A comparative studio di fibrina ricco di piastrine (PRF) e ricco di piastrine plasma (PRP) sugli effetti della proliferazione e differenziazione degli osteoblasti ratto in vitro ". Noi rispettiamo il lavoro pionieristico Dr. Dohan Ehrenfest in PRF ricerca. Lo scopo del nostro articolo era quello di valutare il modello di rilascio di fattori di crescita nel PRP e PRF e dei loro effetti sulla proliferazione osteoblastica e differenziazione. Il nostro lavoro è basato su Dr. Dohan studio di Ehrenfest che i fattori di crescita in PRF potrebbe rilasciare progressivamente e che questo modello di rilascio è pensato per essere una delle principali differenze tra PRP e PRF in biologico activity.1 Vorremmo fornire i nostri materiali di studio dettagliato e rispondere al dottor Dohan Ehrenfest domande come segue. PERCHE 'NON essudati, PRF intero? Nel 2007, quando abbiamo provato a studiare il modello di rilascio di PRF, non abbiamo letto alcuno studio su fattore di crescita- rilasciando modelli di PRF con modelli essudato, né relazioni sugli effetti delle cellule, quindi, non abbiamo potuto seguire qualsiasi

6 protocollo riportato dalla letteratura precedente per progettare il nostro lavoro. Infatti, il nostro studio ha dimostrato i diversi modelli di rilascio di crescita derivato dalle piastrine factor (PDGF), AB e fattore di crescita trasformante (TGF)? 1 in essudati di PRF e PRP. Inoltre, abbiamo determinato i diversi effetti di essudato di PRP PRF e sulla proliferazione e la differenziazione osteoblastica. I risultati del nostro studio ha mostrato che essudato di OOOOE Volume 110, Numero 4 Lettere alla redazione 411 Errore. Riferimento a collegamento ipertestuale non valido. Errore. Riferimento a collegamento ipertestuale non valido.