La qualità di un prodotto a base di derivati vegetali

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1 CARATTERIZZAZIONE FITOCHIMICA E FARMACOGNOSTICA DI INGREDIENTI E MANGIMI PER SUPPLEMENTAZIONE VETERINARIA DIPARTIMENTO DI BIOLOGIA APPLICATA Sezione di Biologia Vegetale e Geobotanica La qualità di un prodotto a base di derivati vegetali Caratterizzazione delle principali classi di metaboliti secondari Valutazione qualitativa e quantitativa di ingredienti e formulazioni Saggi farmacognostici di attività antiradicalica ed antiproliferativa Saggi in vitro

2 CASTAGNO Castanea sativa Miller - FAGACEAE DROGA Foglie, corteccia COMPOSIZIONE acido gallico 8-15% tannini 9% (ac. ellagico e gallico) PROPRIETA ED USI Astringenti, antispastiche, bechiche tossifughe Antidiarroiche Industria conciaria, estrazione tannini Aromatico astringente (enologia)

3 ORIGANO Origanum vulgare L. - LAMIACEAE DROGA Parti aeree COMPOSIZIONE OE ( %) a timolo e/o carvacrolo (in tot 1.5%) gommoresina infusione rossa Coltivato/spontanea PROPRIETA Aromatiche, tonico-eupeptiche, stomachiche, carminative, bechiche, espettoranti, sudorifere, antisettiche (timolo) INDICAZIONI Applicazione topica per arrossamenti, screpolature mucolitici deostruenti, affezioni del cavo orale e faringe, riniti, raffreddore Colluttori per l igiene orale, Digestione lenta, flatulenza

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5 IN MEDICINA VETERINARIA Origano Effetti locali ed organici, per aerodiffusione Antisettico e riequilibratore della flora enterica Antifermentativo Stimolatore della funzionalità digestiva Attività antiossidante correlata alla frazione polifenolica sulla perossidazione lipidica (studi in vivo e sui prodotti derivati) Castagno Modulatore della sintesi proteica batterica Modulatore della fermentazione per complessi ad altri substrati (le proteine non vengono degradate nelle prime vie digestive) Modulazione della fermentazione (incremento della frazione di acidi grassi, in particolare acido linoleico) Regolatore della flora batterica

6 MATERIALI -ORIGANO OR2: olio essenziale di origano adsorbito su calcio carbonato, alluminosilicati di calcio e potassio, D-glucosio -CASTAGNO: Estratto acquoso in polvere METODI FITOCHIMICA Dosaggio metaboliti secondari Indagini analitiche (HPLC) SAGGI CELLULARI Vitalità Stress ossidativo (ROS, PGE2, 8-iso-PGF 2α Estrazione -T ambiente, soxhlet; ultrasuoni. -H2O/T -EtOH -H2O/EtOH 5:5 (Solo per castagno) -H2O+2.5%NaOH/T -H2O+1%HCl

7 mmol/l mmol/l FITOCHIMICA castagno mmol/l mmol/l Castagno POLIFENOLI TOTALI (a.gallico) Castagno FLAVONOIDI (rutina) 1.2 C H 2 O/T C MeOH/T C H 2 O/EtOH 5:5 C H 2 O+2.5%NaOH/T.3. C H 2 O/T Castagno FLAVONOLI (epicatechina) C MeOH/T C H 2 O/EtOH 5:5 Castagno PROANTOCIANIDINE (cianidina coloridrato) C H 2 O+2.5%NaOH/T C H 2 O/T C MeOH/T C H 2 O/EtOH 5:5 C H 2 O+2.5%NaOH/T. C H 2 O/T C MeOH/T C H 2 O/EtOH 5:5 C H 2 O+2.5%NaOH/T

8 mmol/l mmol/l FITOCHIMICA origano mmol/l mmol/l Origano POLIFENOLI TOTALI (a.gallico).3.2 Origano FLAVONOIDI (rutina) O H 2 O O MeOH O EtOH/H 2 O 5:5 O H 2 O/HCl 1%.25. Origano FLAVONOLI (epicatechina) O H 2 O O MeOH O EtOH/H 2 O 5:5 Origano PROANTOCIANIDINE (cianidina coloridrato) O H 2 O/HCl 1% O H 2 O O MeOH O EtOH/H 2 O 5:5 O H 2 O/HCl 1%. O H 2 O O MeOH O EtOH/H 2 O 5:5 O H 2 O/HCl 1%

9 FITOCHIMICA Attività antiradicalica ABTS test mmol TEE/mL mmol TEE/mL INDAGINE FITOCHIMICA Castagno ABTS Origano ABTS C H 2 O/T C MeOH/T C H 2 O/EtOH 5:5 C H 2 O+2.5%NaOH/T O H 2 O O MeOH O EtOH/H 2 O 5:5 O H 2 O/HCl 1%

10 FITOCHIMICA Origano HPLC Carvacrolo,5mg/mL Origano OR 2 Mangime + OR2 Mangime standard Origano OR 2, titolo in timolo+carvacrolo = 72.42±.5 μg/g. Mangime + OR2 carvacrolo non sempre rilevabile.!!campionatura!!

11 FITOCHIMICA Castagno HPLC Castagno polvere 365nm Campione λ(nm) Tannini mg/g di rutina Castagno polvere 27nm Castagno , ,2683 Casatgno, contenuto in tannini totali idrosolubili: 73.4±2.1%

12 SAGGI CELLULARI MTT variazione % vs ctr variazione % vs ctr 2 Cell viability - HT29-48h -2 Cell viability - C2C12-48h CASTAGNO 1 µg/ml CASTAGNO 2 µg/ml ORIGANO 1 µg/ml ORIGANO 2 µg/ml -1 CASTAGNO 1 µg/ml CASTAGNO 2 µg/ml ORIGANO 1 µg/ml ORIGANO 2 µg/ml HT29 Adenocarcinoma umano di colon C2C12 Mioblasti murini

13 Linfopig - ROS % variation vs CTR H2O2 Linfopig - Nitriti NO % variation vs CTRH2O2 1 SAGGI CELLULARI Linfopig dieta e stress ossidativo 3 % variation vs H 2 O % variation vs H 2 O H2O2 Castagno IN Origano IN Castagno Origano IN Castagno OUT Origano OUT Castagno Origano OUT -1 Linfopig PGE2 % variation vs CTR H2O2 (medie) 1 H2O2 Castagno IN Origano IN Castagno Origano IN Castagno OUT Origano OUT Castagno Origano OUT 5 Linfopig - 8-iso-PGF2 % variation CTR H2O2 % variation vs H 2 O % variation vs H 2 O H2O2 Castagno IN Origano IN Castagno Origano IN Castagno OUT Origano OUT Castagno Origano OUT -1 H2O2 Castagno IN Origano IN Castagno Origano IN Castagno OUT Origano OUT Castagno Origano OUT

14 FITOCHIMICA CONCLUSIONI Importanza del campionamento Conformi degli standard qualitativi Indagini qualitative in accordo con la letteratura PROSPETTIVE FUTURE: Valutazione di nuove potenzialità applicative Effetto antiproliferativo Modulazioni del metabolismo ossidativo