KIT$ Le$analisi$cromosomiche
MATERIALE$NEL$KIT 9#un#fascicolo#con#schede#e#foto#di#cromosomi#metafisici#per#gli# esercizi#(da#scaricare#dal#sito#internet#del#cusmibio)# 9#2#provette#da#1,5#ml#contenenti#preparati#cromosomici#fissati#in# metafase#da#conservare#in#freezer# 9#una#scatola#contenente#vetrini#porta#oggetti# 9#una#scatola#contenente#vetrini#copri#oggetti# 9#reagente#per#la#colorazione#(blu#di#metilene#0,05%)# 1$2$micropipette$da$20$microlitri$ 1$2$scatole$di$puntali$per$micropipette Il# materiale# scritto# in# grassetto# va# riconsegnato# al# CusMiBio.# Il# materiale# restituito# verrà# controllato# alla# consegna.# I# costi# di# eventuali# rotture,# manomissioni#o#strumentazione#mancante#saranno#a#carico#della#scuola.
MATERIALE$NECESSARIO$A$SCUOLA 9#laboratorio#o#aula#con#tavoli/banconi### 9#microscopi#ottici#con#obiettivi#4x,#10x#e#40x# 9#videoproiettore# 9contenitori#per#rifiuti## 9matite#e#pennarelli# TEMPO$RICHIESTO$ circa#1,592#ore
Allestimento$del$materiale Disporre#sul#banco#da#lavoro#il#materiale#in#modo#che#gli#studenti#lavorino#in#due# gruppi.# Ogni#postazione#deve#essere#così#costituita:# 1#vetrino#coprioggetti#e#portaoggetti#per#studente# 1#micropipetta#da#20#microlitri# 1#provette#contenente#la#sospensione#cellulare# 1#falcon#contenente#blu#di#metilene# microscopi#ottici# inoltre#sul#banco#di#lavoro#dovranno#essere#presenti#un#contenitore#dei#rifiuti,# una#scatola#di#puntali,#matite#e#pennarelli
Procedimento Uso$micropipetta Illustrare#la#portata#massima#di#20#e#minima#di#2#microlitri;#oltre#questi#valori#la# micropipetta#si#rompe# Mostrare#ai#ragazzi#come#si#imposta#il#volume#girando#la#rotella#in#alto,#se#si#ruota# verso#sinistra#il#volume#aumenta,#al#contrario#se#si#ruota#a#destra#il#volume#diminuisce.# Impostare#lo#strumento#su#5#microlitri,#stando#molto#attenti#al#decimale#dopo#la# virgola# Mostrare#ai#ragazzi#come#si#inserisce#il#puntale#sulla#punta#della#micropipetta## semplicemente#appoggiando#lo#strumento#sul#puntale#e#facendo#una#leggera# pressione# Spiegare#come#si#preleva#un#volume.#Fare#una#leggera#pressione#sulla#rotella#usata#per# l impostazione#del#volume#fino#a#quando#non#si#percepisce#una#resistenza,# mantenendo#abbassata#la#rotella#inserire#la#punta#del#puntale#dentro#il#volume#da# prelevare#(#per#esempio#si#può#usare#la#provetta#contenente#acqua)#e#a#questo#punto# lasciare#andare#il#dito#accompagnando#la#rotella#verso#l alto.## Espellere#il#puntale#nel#contenitore#dei#rifiuti#usando#l apposito#pulsante############### situato#in#alto#sullo#strumento
LE$FASI$DELLA$ATTIVITA 9 Consegnare#ad#ogni#ragazzo#un#vetrino#sul#quale#scriverà#con#la#matita#il# proprio#nome#sulla#banda#sabbiata# 9 Prendere#dal#freezer#la#sospensione#cellulare#e#risospendere##accuratamente#il# contenuto#picchiettando#sul#fondo#della#provetta## 9 Prelevare#5#microlitri#della#sospensione#cellulare#e#metterli#al#centro#del# vetrino#portaoggetti;#eliminare#il#puntale#nel#contenitore#per#i#rifiuti# 9 Fare#evaporare#il#fissativo#lasciando#il#vetrino#all aria#per#pochi#minuti# 9 Prelevare#10#microlitri#di#blu#di#metilene#e#metterli#al#centro#del#vetrino# portaoggetti;#eliminare#il#puntale#nel#contenitore#per#i#rifiuti# 9 Coprire#con#il#coprioggetti#cercando#di#evitare#la#formazione#di#bolle#di#aria# 9 Osservare#le#metafasi#al#microscopio#fino#ad#un#ingrandimento#40x
Ingrandimento$40x
Cariotipo$normale$o$patologico? Alla#fine#della#attività#pratica#consegnare#le#immagini#dei#cariotipi#da# analizzare $ Come#interpretare#le#immagini:$ Femmina$normale# $46#cromosomi#(XX)$ # Cromosomi#acrocentrici#corti:# 4$ $^#^# ##^#^# # # # # # # ##21# ##22# Maschio$normale# ##46#cromosomi#(XY)$ # Cromosomi#acrocentrici#corti:# 5# #^#^# ##^#^# ^# # # # # # # ##21# ##22# Y#
Cariotipi$patologici Down$$ $ 47#cromosomi#(XX)$ # Cromosomi#acrocentrici#corti:#5$ $$^#^#^## ####^#^# # # # # # ####21##### ####22# Down$ #$$ 47#cromosomi#(XY)$ $ Cromosomi#acrocentrici#corti:#6# ##^#^#^###########^#^# #^$ # # # # # ####21# #####22# #Y# Klinefelter# $$ 47#cromosomi#(XXY)$ $ Cromosomi#acrocentrici#corti:#5$ $$$^#^$$$ $$$$^#^# #^$ # # # # # ####21# #####22# #Y# XYY# # # 47#cromosomi#(XYY)$ # Cromosomi#acrocentrici#corti:#6# ###^#^$$$ $$$^#^# #^^# # # # # # ####21# ####22# #YY
Le$analisi$cromosomiche Ogni$specie$è$caratterizzata$da$un$$ un$insieme$di$cromosomi,$il$cui$numero$$ e$struttura$si$mantengono$costanti$ attraverso$le$generazioni Lo$studio$dei$cromosomi$costituisce$$ una$branca$della$genetica$chiamata$ citogenetica
Perché$studiare$i$cromosomi? $Patologia$cromosomica #Nelle#cellule$tumorali#sono#presenti#anomalie#$ cromosomiche $Studio#della$struttura$e$funzione$dei#cromosomi
Analisi$del$cariotipo$umano$in$laboratorio Seminare le cellule Coltura in un terreno di crescita Aggiungere una sostanza che stimoli la mitosi (PHA) Incubare per 2-3 giorni Aggiungere una sostanza che blocchi le mitosi in metafase (colchicina) Trasferire le cellule in provetta e centrifugare per concentrare le cellule sul fondo Strisciare le cellule sul vetrino portaoggetti Trasferire nella provetta che contiene il Ritagliare i cromosomi e ordinarli ricostruendo il cariotipo Identificare e fotografare i cromosomi Aggiungere il colorante (Giemsa) fissativo
Patologia$cromosomica 1.$ANOMALIE$DEL$NUMERO# ANEUPLOIDIE$e$ POLIPLOIDIE 2.$ANOMALIE$DELLA$STRUTTURA$ MUTAZIONI$$ CROMOSOMICHE ALTERAZIONI$DEL$DOSAGGIO$GENICO$ LETALITA #PRE9#o#POST9NATALE# ANOMALIE#FENOTIPICHE
ANEUPLOIDIE$VITALI$NELL UOMO$e PATOLOGIE$ASSOCIATE AUTOSOMI CROMOSOMI$DEL$SESSO CARIOTIPO SINDROME TIPO$DI$ANEUPLOIDIA$ CARIOTIPO$ SINDROME TIPO$DI$ ANEUPLOIDIA$ 47,XX$o$XY$ Patau trisomia 45,X0$ Turner monosomia 47,XX$o$XY Edwards trisomia 47,XXX$ 48,XXXX$ trisomia$ tetrasomia 47,XX$o$XY$ Down trisomia 47,XXY$ 48,XXXY Klinefelter trisomia$ tetrasomia 47,XYY Doppio$Y trisomia