Procedure per analisi indicatori

Procedure per analisi indicatori

Conta enterobacteriaceae Conta coliformi totali Conta coliformi fecali e E. coli ricerca Shigella- Salmonella

Enterobatteriacee Cristal violetto e sali biliari + indicatore ph + glucosio (ISO: VRBGA) Coliformi E. coli Cristal violetto e sali biliari + indicatore ph + lattosio (ISO: VRBLA o MacConkey) Omogenato: 25g prodotto + 225ml diluente Diluizioni Semina per spatolamento in superficie (o inclusione in agar) Incubazione 37 C per 24h Conta colonie rosa con alone chiaro

Sali biliari + rosso fenolo + lattosio

Lettura di coliformi con differenziazione di E. coli: Lattosio e substrato per glucuronidasi

MPN presuntivo coliformi omogenato 10 ml mezzo a doppia concentrazione + 10 ml campione 10 ml mezzo a concentrazione regolare + 1 ml campione 10 ml mezzo a concentrazione regolare + 0.1 ml campione

MPN presuntivo coliformi Fermentazione lattosio Viraggio rosso fenolo Produzione gas Tubo positivo - - - + -

MPN presuntivo coliformi

microrganismi aerobi mesofili Mezzo non selettivo (ISO: PCA) Semina per spatolamento in superficie Funghi totali/funghi e lieviti Mezzo non selettivo (ISO: OGYE) Semina per spatolamento in superficie Omogenato: 25g prodotto + 225ml diluente Diluizioni Semina per spatolamento in superficie Incubazione 28/25 C per 24h Conta colonie totali

Alimenti suscettibili alla contaminazione da Staphylococcus aureus Carne Prodotti derivati dalla carne Insalate miste Prodotti di pasticceria Prodotti lattiero-caseari Vie di disseminazione di Staphylococcus aureus Contatto diretto o indiretto con alimenti infetti Uso di strumenti per il taglio o di utensili infetti Refrigerazione inadeguata Cottura o riscaldamento inadeguato dell alimento

Stafilococchi coagulasi positivi Mezzo con lecitina e tellurito di potassio (ISO: BPA) Incubazione 37 C per 24h Conta colonie nere con alone opaco Omogenato: 25g prodotto + 225ml diluente Diluizioni Semina per spatolamento in superficie

Bacillus subtilis - coagulans - licheniformis: alteranti termotrattati in scatola polymixa - termophilus: alteranti conserve sotto vuoto thuringiensis: patogeno artropodi cereus - anthracis patogeni uomo - 10 6 ufc/g

Bacillus cereus (gruppo) Mezzo con mannitolo, indicatore di ph, polimixina e lecitina (ISO: MYP) Incubazione 30 C per 24h Conta colonie rosa (rosso fenolo) o azzurre (blu bromotimolo) con aspetto ceroso, contorno irregolare Omogenato: 25g prodotto + 225ml diluente Diluizioni Semina per spatolamento in superficie

Salmonella spp. Preparazione dei campioni Inoculo in acqua peptonata per rivitalizzazione 24 ore a 37 C Inoculo in mezzo Rappaport-Vassiliadis 24 ore a 42 C Inoculo in piastra su terreno selettivo (brilliant green-rosso fenolo o salmonella-shigella agar) o cromogenico 24 ore a 37 C Colonie sospette strisciate su agar nutriente per conferme 24 ore a 37 C Test di conferma su colonie sospette: TSI, idrolisi urea(-), decarbossilaz. Lisina, ß-galattosidasi(+), MR(+)VP(-), indolo(-), gelatina(-), fer. Gluc(AG), cat(+) Test sierologici

Ceppi patogeni di Escherichia coli enterotossigeni (ETEC), enteroinvasivi (EIEC), enteroemorragici (EHEC), enteropatogeni (EPEC), enteroaggregativi (EAggEC). categorie alimentari per le quali rappresentano un pericolo per la salute pubblica: carne di manzo cruda o poco cotta o carne di altri ruminanti carne macinata carne di manzo fermentata e prodotti derivati latte crudo e prodotti a base di latte crudo prodotti freschi, in particolare semi germogliati succhi di frutta e di ortaggi non pastorizzati

Escherichia coli enteropatogeno O157:H7 Preparazione dei campioni Inoculo in mezzo di arricchimento selettivo (modified Tryptone Soya Broth + novobiocina o acriflavina) 24 ore a 37 C Inoculo in mezzo selettivo: MacConkey s agar contenente sorbitolo 0.1% invece di lattosio 24 ore a 37 C Test di conferma: indolo(+), MR(+)VP(-), ferm. Gluc(AG) e lattosio(ag), ureasi(-), citrato(-), TSI, cat(+)

colonie sorbitolo -: sospette O157:H7 falsi positivi: ceppi di E. coli e altri generi non fermentanti colonie sorbitolo + (colorazione rosso porpora) falsi negativi: eventuali ceppi di O157:H7 sorbitolo fermentanti

Listeria: anaerobi facoltativi psicrofili, resistenti congelamento inibiti ph 5 tollerano a w 0.8 latte - carne - vegetali - acqua - foraggi forma biofilm Bassa dose minima infettante (10-??cell/g) produce emolisine listeriosi invasiva: attacca sistema nervoso centrale e placenta - individui a rischio - dose infettiva bassa - incubazione 2-3w listeriosi gastroenterica: attacca tratto gastrointestinale - popolazione non predisposta - incubazione 12-24h

Listeria monocytogenes Preparazione dei campioni Inoculo in mezzo unico di arricchimento selettivo 4 ore a 30 C + 24 ore a 37 C Inoculo in piastra su terreno selettivo o cromogenico 24-48 ore a 30-35 C Colonie sospette strisciate su terreno triptone-soia-estr.lievito o cromogenico 24-48 ore a 30 C Test di conferma su colonie sospette: ß-emolisi - CAMP test, ferm. Mannitolo(-), xilosio(-), ramnosio(+), cat(+).

Cronobacter (Enterobacter sakazakii) spp. Preparazione dei campioni Inoculo in acqua peptonata per rivitalizzazione 18 ore a 37 C Inoculo in mezzo di arricchimento selettivo (modified lauryl sulfate tryptose (mlst) broth base) 24 ore a 44 C Striscio in mezzo cromogenico (Enterobacter Sakazakii Isolation Agar - ESIA) 24 ore a 44 C Test di conferma: ferm. X-metil glucoside, prod. pigmento giallo

Clostridium perfringens Intossicazioni alimentari Ingestione di cibi in cui sia presente la tossina (p.i. 8 a 24 ore, mediamente 12 ore) Sintomatologia: diarrea e vomito Alcuni stipiti di perfrigens sono in grado di elaborare una tossina enterotossica che si produce solo in condizioni in cui sia possibile la sporificazione. Questa tossina è infatti associata alla tunica sporale con caratteristica di super antigene. 20

Clostridium perfringens Preparazione dei campioni Se carica particolarmente bassa fare conta in tubi MPN Inoculo su mezzo selettivo (solfito.ferrocitrato-cicloserina o solfito-kanamicina) 24 ore a 37 C Colonie sospette (nere) strisciate su agar nitrato e agar sangue 24 ore a 37 C nitrato in anaerobiosi, sangue in aerobiosi Conferma se riducono e sono mobili in nitrato e non crescono su sangue in aerobiosi. Colorazione di Gram per conferma bastoncelli G+