Paola Selva Laboratorio Unico Metropolitano Azienda USL di Bologna
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- Demetrio Perini
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1 Il nuovo Servizio UK NEQAS per la ricerca dell emoglobina su sangue neonatale Paola Selva Laboratorio Unico Metropolitano Azienda USL di Bologna
2 Servizio UK NEQAS H EQA/PT per la ricerca dell emoglobina S (drepanocitosi) su sangue neonatale allo stato fluido Schema pilota partecipanti : 38 laboratori 29 in UK 3 in Irlanda 3 in Italia 1 in Belgio, Francia e Australia I tre laboratori italiani LUM- Laboratorio Unico Metropolitano- Azienda Usl di Bologna Azienda Ospedaliero Universitaria Careggi - Ospedale Careggi (FIRENZE) Azienda AUSL Romagna - Centro Servizi Pievesestina (PIEVESESTINA - CESENA FC)
3 Servizio UK NEQAS H EQA/PT per la ricerca dell emoglobina S (drepanocitosi) su sangue neonatale allo stato fluido - Il servizio propone sei invii annuali di due campioni di sangue neonatale allo stato fluido - HPLC, IEF (focalizzazione isoelettrica), CE (elettroforesi capillare) e MS (spettrometria di massa). - Viene richiesto di identificare ed eventualmente frazionare e quantificare la variante patologica dell emoglobina, in rapporto ai propri valori locali di riferimento. - Test di falcizzazione
4 Servizio UK NEQAS H EQA/PT per la ricerca dell emoglobina S (drepanocitosi) su sangue neonatale allo stato fluido HbF HbA HPLC
5 Servizio UK NEQAS H EQA/PT per la ricerca dell emoglobina S (drepanocitosi) su sangue neonatale allo stato fluido HbF HbA HPLC
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9 Servizio UK NEQAS H EQA/PT per la ricerca dell emoglobina S (drepanocitosi) su sangue neonatale allo stato fluido
10 Servizio UK NEQAS H EQA/PT per la ricerca dell emoglobina S (drepanocitosi) su sangue neonatale allo stato fluido Test di falcizzazione positivo HbS HbS HPLC CE
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12 Servizio UK NEQAS H EQA/PT per la ricerca dell emoglobina S (drepanocitosi) su sangue neonatale allo stato fluido HbF HbA HPLC
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14 La partecipazione a un sistema di VEQ nel settore delle emoglobinopatie è non solo raccomandabile, ma doverosa dato l alto significato diagnostico degli esami e l alto valore predittivo. La VEQ informa sull accuratezza e offre la possibilità di un confronto utile tra i vari laboratori VEQ e verifica dell appropriatezza degli intervalli di riferimento adottati
15 LUM (Laboratorio Unico Metropolitano) Azienda USL di Bologna rappresenta il laboratorio di riferimento per lo screening delle emoglobinopatie per la provincia di Bologna La Banca del Sangue Cordonale dell Emilia Romagna (ERBC) opera all'interno dell'uo di Immunoematologia e Trasfusionale dell'azienda Ospedaliero-Universitaria S.Orsola-Malpighi Al LUM afferiscono : - 2 neonatologie - 1 onco-ematologia pediatrica - 30 percorsi nascita Attività del 2015: assetti emoglobinici di cui: - 12 eseguiti sui neonati con anamnesi positiva unità di sangue cordonale percorsi nascita
16 Esame su sangue destinato alla conservazione nelle banche di sangue cordonale La donazione autologa (dedicata) o allogenica (solidale) del sangue cordonale e la sua crioconservazione nelle banche pubbliche, deve rispondere a una serie di condizioni tra cui l assenza di difetti genetici importanti dell emoglobina Pertanto: le unità di sangue cordonale nel percorso di idoneità per il bancaggio devono possedere requisiti minimi stabiliti da diverse istituzioni nazionali e internazionali: IBMDR (Italian bone Marrow Done Registry) NetCord-FACT (Foundation for the Accreditation of Cellular Therapy) ITCBN (Italian Cord Blood Network)
17 Esame su sangue destinato alla conservazione nelle banche di sangue cordonale Per il test di screening deve essere utilizzato un metodo che riesca a distinguere HbA, HbF, e le varianti più comuni: HbS, HbC, HbE, HbD Metodi quali/quantitativi dedicati: - HPLC - Elettroforesi capillare No metodi non dedicati : isoelettrofocusing, elettroforesi su agaroso, spettrometria di massa, cromatografia a bassa pressione (LPC) Test di sickling (falcizzazione in vitro )
18 Condizioni più frequenti che rendono il sangue cordonale non idoneo
19 Condizioni che consentono il bancaggio del sangue cordonale che tuttavia devono essere segnalate (da NETCORD- FACT D10.3, Fifth Edition, July 2013) Presenza di un difetto Beta Talassemico eterozigote Concomitanza di un difetto alfa e di un difetto beta talassemico Presenza di varianti Hb allo stato eterozigote
20 RICHIESTA ASSETTO EMOGLOBINICO SU SANGUE CORDONALE INFORMAZIONI ANAMNESTICHE Data: Identificativo campione: Tipo campione: SANGUE CORDONALE Data Nascita: Provenienza (indicare l etnia dei genitori) Data di congelamento: Nascita gemellare? (se si indicare se eterozigoti) Settimane di gravidanza alla nascita: Eventuali terapie della madre negli ultimi 3 mesi Eventuali patologie materne (tiroide, anemia, ): Anamnesi familiare (eventuali emoglobinopatie dei familiari, anemie note o presunte)
21 Emoglobine fisiologiche alla nascita Emoglobine fisiologiche alla nascita
22 Principali cause di variabilità nella quantificazione dell HbA alla nascita Età gestazionale Eterogeneità dei difetti dei geni globinici Modalità di conservazione e invecchiamento del campione Metodo analitico utilizzato Contaminazione materna
23 1817 campioni di sangue cordonale da Giugno 2010 a Dicembre 2015 Valori medi di HbF e HbA divisi per settimana di gestazione Tabella aggiornata a marzo 2015 Pediatr Blood Cancer Dec 1;57(6): doi: /pbc Epub 2011 May 16. Increased prevalence of false positive hemoglobinopathy newborn screening in premature infants. Hustace T1, Fleisher JM, Sanchez Varela AM, Podda A, Alvarez O. Blood Aug 15;78(4): Sex, gestational age, and weight dependancy of adult hemoglobin concentration in normal newborns. Galacteros F1, Guilloud-Bataille M, Feingold J.
24 Basandoci sui dati riportati in letteratura e sulla precedente esperienza del nostro laboratorio, abbiamo deciso di considerare come presunti positivi : HbA 10% Conferma molecolare Per escludere o confermare una beta talassemia eterozigote o un doppio difetto beta talassemico Hb Bart s >1% Conferma molecolare Analisi dei geni alfa globinici Variante Hb diversa da HbS o composti con HbS Conferma molecolare Per la caratterizzazione della variante osservata J Med Screen Sep;19(3): doi: /jms Screening for haemoglobinopathies on cord blood: laboratory and clinical experience. Wolff F 1, Cotton F, Gulbis B.
25 1817 cordoni 176 (9.7%) inviati a conferma molecolare NEGATIVI 100 ( 57%) POSITIVI 34 (20%) RIMANENTI 42 (23%) SCARTATI 4 RACCOLTA DEDICATA 12 ANALISI IN CORSO 26 Eterozigoti α- Τhal Eterozigoti β- Thal 1 HbS omozigote 1 omozigote α-thal 3 HbS eterozigoti 2 doppi eterozigoti (1 α-β; 1 α+variante)
26 MUTAZIONI RISCONTRATE
27 Eterozigote composto per le varianti emoglobiniche HbC/HbS Genotipo eterozigote composto per le varianti emoglobiniche HbC/HbS HbS HbC HbS HbC HPLC CE
28 Hb Bart s Genotipo omozigote per la mutazione per delezione alfa 3.7 Hb Barts s Hb Barts s HPLC CE
ITALIAN Cord Blood Network
INTRODUZIONE La donazione del sangue cordonale del neonato, e quindi la sua crioconservazione nelle banche pubbliche, deve rispondere a una serie di condizioni tra cui l assenza di difetti genetici importanti
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