Citodiagnostica dei versamenti: Aspetti tecnico-metodologici e ruolo dell immunoistochimica

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1 Citodiagnostica dei versamenti: Aspetti tecnico-metodologici e ruolo dell immunoistochimica Anna Maria Chiaravalli Dirigente Sanitario Biologo S.C. Anatomia e Istologia Patologica - A.O. Ospedale di Circolo e Fond. Macchi Varese

2 Cavità corporee Cavità cranica Cavità vertebrale Cavità toracica Cavità pleurica Cavità pericardica Cavità addominale Cavità Pelvica Cavità addominale Cavità pelvica

3 Sierosa Cellule epiteliali di derivazione mesodermica Normalmente singolo strato di cellule piatte ck vim

4 Le Sierose

5 Accumulo di fluidi nelle cavità sierose Versamento Accumulo di fluidi nelle cavità corporee è una condizione patologica

6 Versamenti Trasudato: Basso peso specifico, basso contenuto proteico e cellulare (c. mesoteliali e leucociti) filtrazione di siero attraverso la parete vascolare intatta per aumento pressione idrostatica o diminuita pressione oncotica Essudato: Alto peso specifico, alta concentrazione proteica e ipercellulati Aumentata permeabilità vascolare, danno vascolare e blocco dei vasi linfatici

7 Versamenti Trasudato: Fluido chiaro (<10 % sono ematici o torbidi) Cirrosi, sindrome nefrosica,, insufficienza cardiaca, malnutrizione Simili nelle diverse cavità Essudato: Fluidi opachi, torbidi o ematici Condizioni infiammatorie, infezioni d organo, d tumori I e II

8 Essudati V. Pleurico: polmoniti, ascessi, infarti, traumi pleuriti, malattie autoimmuni NEOPLASIE V. ascitico: : danno viscerale, peritoniti, TBC PID, pancreatite NEOPLASIE V. pericardico: : farmaci, malattie autoimmuni,, RT TBC, uremia, pericarditi NEOPLASIE

9 Colorazioni COLORAZIONE DI PAPANICOLAOU Vetrini fissati con spray Colorazione con Ematossilina Nuclei blu Orange G (OG6) EA50 (Eosina Y e Verde luce) Citoplasmi acidofili: rosa arancio Citoplasmi basofili: azzurro chiaro/verde Azzurro scuro COLORAZIONE DI MAY-GRUNWALD-GIEMSA Vetrini asciugati all aria Colorazione con MAY-GRUNWALD Blu di metilene Eosina GIEMSA Eosina Azur II Nuclei in viola, citoplasmi in azzurro-blu

10 Cell block utile per colorazioni speciali e IIC

11 Tecniche di allestimento Solo striscio + Citocentrifuga Filtrazione Cell block Identificano 67% dei versamenti maligni Identificano 83-85% 85% dei versamenti maligni

12 Accuratezza diagnostica citologica Sensibilità: : 58-71% (vs 45% biopsia in cieco) Cancer detection rate: 2% a 38% se campioni multipli Toracoscopia Specificità abbastanza alta Falsi positivo <1% Atipie mesoteliali elevate Cell. linfoidi benigne con Linfomi (nei bambini) Cibas and Ducatman, 2009

13 Proliferazioni reattive delle cellule mesoteliali In seguito a danno o stimolo irritativo cronico proliferano, possono disporsi in papille o in multistrato Le cellule diventano più voluminose e cuboidali e i nuclei presentano segni di attivazione Tali cellule reattive devono essere differenziate da cellule neoplastiche

14 Cause di cellule mesoteliali reattive/atipiche Versamenti di lunga durata Asbestosi IRC uremia Dialisi peritoneale Tromboembolia con infarto RT o CHT Cirrosi/epatite Sierosite acuta Neoplasia

15 Versamenti benigni Cellule mesoteliali Istiociti Linfociti Granulociti

16 Cellule mesoteliali Numerose Cellule isolate Cellule tondeggianti Nuclei tondeggianti Nucleolo singolo Piccoli cluster con fenestrazioni Citoplasma denso con alone chiaro attorno

17 Mesoteli reattivi Aspetti degenerativi CTM In parte da: DeMay 2012

18 Immunoistochimica aggiunta essenziale alla citomorfologia per migliorare l accuratezza diagnostica

19 Quando usare immunoistochimica nei versamenti Per confermare la malignità quando la morfologia da sola è equivoca Per sospetto di metastasi da carcinoma lobulare Per distinguere un ADC da un Mesotelioma Per definire la primitività di un versamento maligno Paziente con tumore primitivo ignoto Paziente con tumori multipli

20 Versamenti neoplastici Poche/discreta quantità di cell : blocco linfatici impianti o estensione diretta Numerose cell :carcinosi con libera crescita di cellule nel liquido Fondo : sangue, linfociti, istiociti Cellule: gruppi grandi, forme bizzarre inusuali, nuclei con cromatina anomala e membrane irregolari Cellule estranee con aspetto estraneo Doppia popolazione cellulare

21 Tumori più frequenti che causano versamenti maligni per sede, sesso ed età Maschio adulto Femmina adulta Bambino Pleurico Peritoneale Pericardico Polmone Linfoma/leucemia Tratto GI Pancreas Mesotelioma* Mammella Polmone Ovaio Linfoma/leucemia Tratto GI Endometrio Pancreas Mesotelioma* Linfoma/leucemia Altri tumori a piccole cellule blu Gastroenterico Linfoma/leucemia Pancreas Genito-urinario Ovaio Utero Mammella Tratto GI Linfoma/leucemia Pancreas Mesotelioma* Linfoma/leucemia Altri tumori a piccole cellule blu Polmone Linfoma/leucemia Tratto GI Mammella Polmone Linfoma/leucemia Tratto GI Linfoma/leucemia Altri tumori a piccole cellule blu Davidson, Firat and Michael 2012

22 Cellule epiteliali atipiche sospette Iperplasia mesoteliale reattiva MESOTELIOMA MALIGNO NEOPLASIE METASTATICHE Informazioni cliniche sono importanti

23 Mesotelioma maligno Due pattern Larghi cluster tridimensionali Cellule isolate Citomegalia Nuclei tondi, centrali, pleomorfi Binucleazione e multinucleazione Nucleoli prominenti Citoplasmi: densi (a due toni) a confini caratteristici, vacuolati

24 Mesotelioma M vs mesoteli reattivi EMA Des Davidson, Firat and Michael 2012

25 MESOTELIOMA CD68

26 Mesotelioma vs Adenocarcinoma Davidson, Firat and Michael 2012

27 Adenocarcinoma Gruppi morulari,papille, acini Cellule a anello con castone, con lumi intracitoplasmatici Catenelle di cellule o file indiane Cellule singole

28 Cibas and Ducatman 2009

29 Citocheratina Calretinina CEA WT1 Podoplanina (D2-40)

30 CK Calretinina CEA WT1 D2-40

31 Citcheratina Calretinina CEA

32 Liquido peritoneale F 69a MTS Carcinoma Ovarico

33 CK7 Versamento pleurico F 87a Calretinina CEA + CK7, CK20 TTF1, CDX2 TTF1 MTS ca polmone

34 Liquido ascitico M 39a CEA Carcinoma gastrico

35 CEA ER Versamento pleurico F 85a MTS Carcinoma della mammella

36 F 50 a Versamento peritoneale MTS Carcinoma ovarico MOC-31 CEA

37 CK Versamento pleurico F 78a MTS Ca piccole cellule Crom A

38 p63 MTS Carcinoma Squamoso PAX8 MTS Carcinoma Renale a cell. chiare

39 Liquido pleurico M 86a Effusional Linfoma CD45+ HHV8+

40 CD20 Liquido pericardico M 15a Linfoma di Hodgkin CD30

41 Cibas and Ducatman,2009

42 Grazie!