Conoscenze propedeutiche

Transcript

1 21 se&embre 2016

2 Conoscenze propedeutiche I legami chimici; Le proteine: stru&ura e funzioni; gli enzimi e la cine=ca enzima=ca; il sistema immunitario: l immunità innata e ada&a=va (vedi allegato) ; conce&o di gene, mutazione e ricombinazione.

3 Cos è il Test Elisa? ELISA: Enzyme-Linked Immunosorbent Assay E un metodo d'analisi immunologico utilizzato per rilevare la presenza di un antigene usando uno o più anticorpi ad uno dei quali è legato un enzima.

4 ANTICORPI: Forma e funzioni Rappresentazione della struttura base a Y degli anticorpi. E formato da due catene pesanti H (in azzurro) e due catene leggere L (in verde). CDR è la zona specifica di legame con l antigene. Nelle parte basale della Y abbiamo la Fc region necessaria per le diverse funzioni effettrici dell anticorpo. C rappresentano i domini costanti delle catene e V i domini variabili. Trasformazione dei linfociti dopo contatto con l antigene. Le cellule prolificano poi maturano trasformandosi in plasmacellule che producono grosse quantità di anticorpi specifici contro l antigene. Alcune cellule diventano cellule memoria

5 Classi di immunoglobuline IgG Sono le immunoglobuline più numerose presen= nel siero umano (70-75% circa delle Ig totali) e hanno stru&ura monomerica. Rappresentano la classe an=corpale più importante nella risposta immunitaria secondaria favorendo l eliminazione dei microrganismi patogeni, a cui si a&accano, grazie alla capacità di legarsi, a&raverso il frammento Fc, a rece&ori specifici dei macrofagi che possono quindi ingerire e distruggere i patogeni.

6 Come vengono prodotti gli anticorpi In che modo un singolo organismo può produrre miliardi di an=corpi differen=? I loci delle immunoglobuline sono dispos= su 3 cromosomi diversi. La soluzione del quesito sta nel meccanismo di ricombinazione gene=ca dei geni delle immunoglobuline che avvengono solo nei linfoci= B e T durante la loro maturazione.

7 Legame antigeni-anticorpi Gli anticorpi si legano solo a specifiche parti di un antigene denominate determinanti antigenici o epitopi. Un antigene di grosse dimensioni può avere molti epitopi diversi e ogni anticorpo è specifico per uno solo Anticorpi policlonali Tipi possibili di legami deboli che si possono formare tra antigene e anticorpo: - ponti idrogeno, - legami ionici, - interazioni idrofobiche - interazioni d Van der Waals.

8 Saggio diretto o a "sandwich e saggio indiretto Nel test dire)o viene determinata la presenza dell'an-gene (ELISA dire&o o a "sandwich"), in quello indire)o, la presenza di an-corpi specifici contro un determinato an=gene. Dire)o o sandwich Indire)o

9 Substrati enzimatici Perossidasi: per gli an=corpi coniuga= alla perossidasi si possono scegliere diversi substra=, tra i più u=lizza=: TMB (3,3',5,5'- tetramethylbenzidine) che sviluppa un colore blu che ha un assorbanza massima tra 370 nm and 652 nm.

10 PRINCIPALI APPLICAZIONI Mala:e infe:ve Micotossine Droghe Allergeni DEL TEST ELISA Marcatori serologici tumorali Mala:e autoimmuni OGM Test di gravidanza

11 TEST ELISA SCENARI TEST HIV "L untore con l HIV ne ha contagiate 33"( Il tempo 27/04/2016) È incredibilmente ampio il bilancio delle vi1me di Valen3no T Il 30enne romano accusato di «aver cagionato volontariamente lesioni personali gravissime», avrebbe contagiato con il virus HIV 33 persone In seguito alla diffusione della no=zia si recano in ospedale 2 persone che hanno avuto rappor= sessuali non prote] con le vi]me dell untore per verificare la loro condizione. In ospedale viene fa&o un prelievo di sangue e voi dovete, tramite test ELISA, verificare la sieroposi=vità o nega=vità dei paziente.

12 TEST ELISA SCENARI GUIDA SOTTO L EFFETTO DI STUPEFACENTI Due giovani, uno su una automobile e uno su uno scooter, sono rimas3 coinvol3 in un incidente stradale in cui sono rimas3 lievemente feri3. La polizia stradale intervenuta ha trovato i due giovani in stato alterato. U=lizzando il Test An=droga hanno rilevato la posi=vità dei due giovani. I giovani sono sta= condo] presso il locale Pronto Soccorso per eseguire le medicazioni necessarie e per compiere esami approfondi= in grado di verificare la posi=vità alle droghe. Dovete verificare mediante test ELISA se i due giovani sono so&o l effe&o di cocaina.

13 TEST ELISA SCENARI MICOTOSSINE NEL LATTE La vicenda inizia il 12 dicembre 2013 quando la La6eria Soligo di Treviso (l unica tra dieci acquiren> del medesimo lo6o) res>tuisce alle La6erie Friulane, una par>ta di confezioni di la6e perché non conforme. Il sistema di autocontrollo dell azienda trevigiana ha rilevato la presenza di aflatossine in quan>tà cinque volte superiori ai limi> di legge Fai parte dei NAS e devi verificare due par=te sospe&e di la&e per verificare la presenza di aflatossina B1 con il test ELISA e stabilire se il la&e è innocuo oppure contaminato.

14 TEST ELISA SCENARI ALLERGENI Carmelo, 57 anni, si presenta in Pronto soccorso con dolore toracico, nausea, eritema e prurito diffusi. La sintomatologia è comparsa circa 15 minu3 dopo l assunzione di una compressa di amoxicillina/acido clavulanico 1 g per una odontalgia. Viene svolto il test ELISA sul siero dei paziente per individuare la presenza di IgE specifiche verso l allergene (amoxicillina o acido clavulanico) e verificare se ha avuto una reazione anafila]ca da an=bio=co.