Esame dirimente: Conta dei Reticolociti

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Eduardo Simoni
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1 Esame dirimente: Conta dei Reticolociti

2 Eritroblasti Ortocromatici Reticolociti Midollari Tempo di Permanenza 2-3 giorni Barriera EMATO- MIDOLLARE Reticolociti nel Sangue Periferico Tempo di permanenza giorni La determinazione dei Reticolociti permette una valutazione della eritropoiesi senza il ricorso a manovre invasive

3 I RETICOLOCITI I reticolociti sono globuli rossi in cui la colorazione sopravitale a fresco con alcuni coloranti basici mette in evidenza la sostanza granulo-filamentosa, sotto forma di granuli isolati o riuniti tra loro da una rete più o meno fitta di materiale basofilo.

in evidenza la sostanza granulo-filamentosa, sotto forma di granuli

4 Contengono RNA (colorazioni sopravitali con blu di metilene o blu di Cresile) Sono più grandi dei globuli rossi MCVr > MCVgbr Possono avere un diverso contenuto di RNA (cioè un diverso contenuto di granuli e filamenti) e un diverso volume in rapporto al loro grado di maturazione D Onofro e Zini Morfologia del Sangue

contenuto di RNA (cioè un diverso contenuto di granuli e filamenti) e un

5 Maturazione reticolocitaria Riduzione delle dimensioni Aumento della densità Perdita dei ribosomi, mitocondri e frammenti di membrana Riduzione di: RNA, mrna e attività enzimatica Cambio della forma (plurilobata - biconcava) Perdita dei recettori di membrana per transferrina (CD71) e fibronectina Perdita di motilità e adesività Aumento della deformabilità

enzimatica Cambio della forma (plurilobata - biconcava) Perdita dei recettori di membrana

6 L M H RMI = Reticulocyte Maturity Index Nei diversi studi è stato usato come: intensità media di tutta la popolazione reticolocitaria reticolociti ad elevata Fluorescenza o Assorbimento reticolociti a media ed elevata fluorescenza o assorbimento, che alla fine sono stati definiti come IRF = Immature Reticulocyte Fraction

Fluorescenza o Assorbimento reticolociti a media ed elevata fluorescenza o

7 Nuovi parametri in citometria Frazione dei reticolociti immaturi (IRF) Contenuto emoglobinico reticolocitario Volume reticolocitario

8 IRF: applicazioni cliniche Monitoraggio della ripresa midollare dopo trapianto o chemioterapia Monitoraggio della terapia delle anemie Monitoraggio della terapia con Epo Monitoraggio dell attecchimento del trapianto renale Rilevamento delle crisi aplastiche nelle anemie emolitiche

Monitoraggio della terapia con Epo Monitoraggio dell attecchimento del

9 Caratteristiche delle anemie emolitiche Anemie normocitiche-normocromiche Reticolociti Urobilinogeno Bilirubina indiretta Emoglobinemia ed Emoglobinuria LDH eritrocitaria

10 Caratteristiche delle anemie emolitiche Anemie emolitiche da cause intraglobulari Anemie emolitiche da cause extraglobulari Esame dirimente: Coomb s test

11 Anemie emolitiche da cause extraglobulare Anemie emolitiche da isoanticorpi Anemie emolitiche da autoanticorpi Anemie da farmaci e veleni

13 Anemie Emolitiche Cause intraglobulari (difetti di membrana) Sferocitosi, ellissocitosi Cause intraglobulari (difetti enzimatici) Deficit di G6PD o Favismo Deficit di Piruvato K Deficit di Glutatione reduttasi Cause intraglobulari (Emoglobinopatie) Talassemie Drepanocitosi

Deficit di G6PD o Favismo Deficit di Piruvato K Deficit di

14 Difetti di Membrana (sferocitosi) - Aumentata fragilità osmotica Prove di resistenza globulare Difetti di enzimi eritrocitari Emoglobinopatie (Falcemia) - Dosaggi enzimi eritrocitari (G6PD Piruvato Kinasi) nell emolisato - Elettroforesi Hb

eritrocitari Emoglobinopatie (Falcemia) - Dosaggi enzimi

15 Elementi diagnostici delle anemie emolitiche da difetto intraeritrocitario Segni di emolisi Bilirubinemia non coniugata Comuni Segni di iperfunzione midollare Reticolocitosi Specifici Dipendenti dalla causa Morfologia Emazie Urobilinogeno LDH isoenzima 2 Aptoglobinemia Iperplasia eritroblastica Turnover del Fe sideremia alla norma Emosiderosi - Aumentata fragilità osmo-tica - Dosaggi enzimi eritrocitari (G6PD) - Elettroforesi Hb

Morfologia Emazie Urobilinogeno LDH isoenzima 2 Aptoglobinemia Iperplasia eritroblastica Turnover del Fe

16 Leucocytes Lymphocytes Monocytes/Macrophages Granulocytes: Neutrophils Eosinophils Basophils

18 Alcuni citometri a flusso utilizzano laser a semiconduttori (633 nm) e coloranti fluorescenti per acidi nucleici che separano i leucociti utilizzando i segnali di: Forward Scatter (FSc) Side Fluorescence (SFl) Side Scatter (SSc);

acidi nucleici che separano i leucociti utilizzando i

19 I leucociti vengono anche differenziati sulla base della maggiore o minore quantità di mieloperosidasi (MPO) contenuta nei granuli citoplasmatici. Il sangue viene diluito, le emazie lisate e i leucociti colorati per la (MPO). Granulociti ed eosinofili = massima quantità di MPO Monociti = quantità medio -piccola di MPO Linfociti e Blasti = piccola quantità di MPO I GB: entrano in una cella di flusso in cui per ciascuna cellula vengono determinate le proprietà bi-dimensionali di dispersione e di assorbimento della luce. Le cellule colorate assorbono più luce e la disperdono con un angolo diverso rispetto alle cellule non colorate. Il risultato finale e' un citogramma leucocitario bi-o tridimensionale.

Granulociti ed eosinofili = massima quantità di MPO Monociti = quantità medio -piccola di MPO Linfociti e Blasti = piccola quantità di MPO I GB: entrano in una cella di flusso

21 LINEE GUIDA F. LEUCOCITARIA La refertazione delle popolazioni leucocitarie deve essere espressa in numero assoluto. La quantificazione percentuale, che da sola può fornire informazioni equivoche, può talvolta integrare efficacemente il numero assoluto; pertanto, la doppia refertazione mantiene un valore informativo.

22 Lymphocytes x 10 9 /l Count varies with age Adaptive immune response T cells cell mediated immunity B cells antibody mediated immunity NK cells

23 Linfocitosi Linfociti 4500 cellule/µl negli adulti Linfociti 9000 cellule/µl nei bambini fino ai 10 anni Infezioni virali, tubercolosi,brucellosi e tifo Infezione da Bordetella pertussis Linfomi

24 Linfocitopenia Linfociti<1500 cellule/µl negli adulti Linfociti <3000 cellule/µl nei bambini Immunodeficit congeniti ed acquisiti Stress da aumentata increzione di glucocorticoidi Aplasia midollare Alcune forme di LLA Immunosoppressione da farmaci

25 Monocytes x 10 9 /l Antigen presentation Cytokine production Phagocytosis

26 Monocitosi Monociti 800 cellule/µl Tubercolosi Endocarditi batteriche acute Brucellosi Malaria Morbo di Chron Sarcoidosi LES ed artrite reumatoide Linfoma di Hodgkin

27 Monocitopenia Monociti <150 cel/µl Stress da glucocorticoidi Aplasia midollare Leucemia a cellule capellute Farmaci immunosoppressivi

28 Neutrophils x 10 9 /l Large reserve pool 3-5 lobes Granular cytoplasm Transient in blood Major phagocytic role Bacterial killing

29 Neutrofilia Neutrofilia 7500cellule/µL Infezioni batteriche germi piogeni (ma anche fungine, parassitarie ed alcune virali) Flogosi immuni e non immuni (ustioni,emorragie,tumori metastatici, infarto,embolia polmonare) Stress, Adrenalina e Glucocorticoidi Sindromi mieloproliferative ( Leucemia mieloide cronica,mielodisplasia e policitemia vera) Farmaci (glucocorticoidi)

30 Neutropenia Neutropenia grave:neutrofili<500 cellule/µl Neutropenia moderata: cellule/ µl Neutropenia lieve: cellule/ µl Neutropenia da farmaci (immunosoppressori e antiblastici) Aplasia midollare, leucemie e linfomi Neutropenia isoimmune neonatale (aumentata distruzione da IgG materne verso Antigeni paterni) Neutropenia autoimmune (LES) Neutropenia da aumentata marginazione (setticemia da Gram -, malaria, tifo, rickettiosi) Neutropenia da sequestro splenico (cirrosi)

31 Hypersegmentation Shift to the right More mature cells kept on Infective and inflammatory sites Severe burns TB, post chemo, pregnancy Shift to the left

32 Eosinophils x 10 9 /l Bilobed nucleus Red granules Weakly phagocytic Anti-parasitic action Modulation of hypersensitivity and allergic reactions

33 Eosinofilia Eosinofili 800 cellule/µl Allergie Infestazioni da metazoi Farmaci Malattie autoimmuni sistemiche Neoplasie Sindromi ipereosinofile

34 Eosinopenia Eosinofili <70 cellule/µl Aumentata increzione di glucocorticoidi Infezioni batteriche acute

35 Basophils x 10 9 /l Bilobed nucleus Large black granules Inflammatory response Hypersensitivity /allergy

36 Basofilia Basofili 20 cellule/ µl Ipersensibilità immediata Colite ulcerosa Leucemia mieloide cronica (basofila) Policitemia vera

37 Basopenia Stress Infection Steroids Cushing s syndrome

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