VARIANT II HbA 2 Dual Program. /HbA 1c

Transcript

1 VARIANT II HbA 2 Dual Program Istruzioni per l uso L IT00 VARIANT II HbA 2 Reorder Pack 500 per HbA 2 /F/A 1c o 800 per HbA 1c Germany, Bio-Rad Laboratories GmbH, Postfach München, Heidemannstraße München

2 CD multilingue Questo kit comprende un CD-ROM multilingue nelle seguenti lingue: inglese, tedesco, francese, spagnolo, italiano, portoghese, svedese, danese e greco. Simboli della Direttiva sui dispositivi medico-diagnostici in vitro (IVDD, 98/79/CE) European Conformity EG-Konformität Conformité européenne Conforme a la normativa europea Conformità Europea Conformidade com as normas europeias Uppfyller EU-direktiv CE-mærkning Συμμόρφωση με τα ευρωπαϊκά πρότυπα Manufacturer Hersteller Fabricant Fabricante Produttore Fabricante Tillverkare Producent Κατασκευαστής Manufactured For Hergestellt für Fabriqué pour Fabricado para Prodotto per Fabricado para Tillverkas för Produceret for Κατασκευάστηκε για See Instructions for use Siehe Gebrauchsanweisung Voir les instructions d utilisation Consulte las instrucciones de uso Vedere le istruzioni per l uso Ver Instruções de utilização Se användarinstruktionerna Se brugsvejledningen Βλ. Οδηγίες χρήσης EXP Expiry date YYYY-MM-DD Verwendbar bis JJJJ-MM-TT Date d expiration AAAA-MM-JJ Fecha de caducidad AAAA-MM-DD Data di scadenza AAAA-MM-GG Data de validade DD-MM-AAAA Bäst-före-datum ÅÅÅÅ-MM-DD Udløbsdato ÅÅÅÅ-MM-DD Ημερομηνία λήξης ΕΕΕΕ-ΜΜ-ΗΗ For In Vitro Diagnostic Use In-vitro-Diagnostikum Utilisation comme test de diagnostic in vitro Para uso en diagnóstico in vitro Per uso diagnostico in vitro Para uso em diagnóstico in vitro För in vitro-diagnostiskt bruk Til in vitro-diagnostisk brug Για in vitro διαγνωστική χρήση Storage temperature limitation Lagertemperatur Limite de température de conservation Temperatura límite para el almacenamiento Temperatura di conservazione Temperatura limite de armazenamento Begränsningar gällande förvaringstemperatur Opbevaringstemperatur Περιορισμοί θερμοκρασίας αποθήκευσης Catalog Number Katalognummer Référence Número de catálogo Numero di catalogo Número de catálogo Katalognummer Katalognummer Αριθμός καταλόγου Batch code Chargen-Bezeichnung Code de lot Código de barras Numero di lotto Código de lote Gruppkod Lotnummer Κωδικός παρτίδας For use with Zur Verwendung mit À utiliser avec Uso con Da usarsi con Para utilizar com För användning med Til anvendelse sammen med Για χρήση με Number of Tests Anzahl der Tests Nombre de tests Número de pruebas Numero di analisi Número de testes Antal tester Antal test Αριθμός δοκιμασιών ii Istruzioni per l uso L IT00

3 VARIANT II HbA 2 Simboli della Direttiva sui dispositivi medico-diagnostici in vitro (IVDD, 98/79/CE) <0.05% <0,05 % <0,05 % <0,05% <0,05% <0,05% <0,05 % <0,05 % <0,05% b1 Buffer 1 Puffer 1 Tampon 1 Tampón 1 Tampone 1 Tampão 1 Buffert 1 Buffer 1 Ρυθμιστικό διάλυμα 1 c Calibrator Kalibrator Étalon Calibrador Calibratore Calibrador Kalibrator Kalibrator Βαθμονομητής xc Calibrator Diluent Kalibratorverdünnungslösung Diluant des étalons Diluyente del calibrador Diluente del calibratore Diluente Calibrador Spädningsvätska för kalibrator Kalibratorfortynder Αραιωτικό μέσο βαθμονομητή Analytical Cartridge Analytische Kartusche Cartouche analytique Cartucho de análisis Cartuccia analitica Coluna analítica Analyskolonn Analysekolonne Αναλυτική μικροστήλη b2 Buffer 2 Puffer 2 Tampon 2 Tampón 2 Tampone 2 Tampão 2 Buffert 2 Buffer 2 Ρυθμιστικό διάλυμα 2 c1 Calibrator Level 1 Kalibrator Level 1 Étalon de niveau 1 Calibrador Nivel 1 Calibratore livello 1 Calibrador Nível 1 Kalibrator, nivå 1 Kalibrator niveau 1 Βαθμονομητής επιπέδου 1 Calibrator Set Kalibratorset Gamme étalon Juego de calibradores Set del calibratore Conjunto calibrador Kalibratorset Kalibratorsæt Σετ βαθμονομητών Analytical Cartridge Set Set mit analytischer Kartusche Jeu de cartouches analytiques Juego de cartuchos de análisis Set di cartucce analitiche Conjunto de colunas analíticas Analyskolonnset Analysekolonnesæt Σετ αναλυτικής μικροστήλης b Buffer Puffer Tampon Tampón Tampone Tampão Buffert Buffer Ρυθμιστικό διάλυμα c2 Calibrator Level 2 Kalibrator Level 2 Étalon de niveau 2 Calibrador Nivel 2 Calibratore livello 2 Calibrador Nível 2 Kalibrator, nivå 2 Kalibrator niveau 2 Βαθμονομητής επιπέδου 2 CD-ROM CD-ROM CD-ROM CD-ROM CD-ROM CD-ROM CD-ROM CD-ROM CD-ROM Deionized Water Deionisiertes Wasser Eau déionisée Agua desionizada Acqua deionizzata Água desionizada Avjoniserat vatten Deioniseret vand Απιονισμένο νερό Reconstitute with Rekonstitution mit Reconstituer avec Reconstituir con Ricostituire con Reconstituir com Rekonstituera med Rekonstitueres med Ανασύσταση με Sample Vials Probengefäße Microtubes échantillons Viales Microprovette per campione Frascos de amostras Provrör Prøvekopper Σωληνάρια δείγματος L IT00 Istruzioni per l uso iii

4 Simboli della Direttiva sui dispositivi medico-diagnostici in vitro (IVDD, 98/79/CE) Sodium Azide Natriumazid Azide de sodium Azida sódica Sodio azide Azida de sódio Natriumazid Natriumazid Αζίδιο του νατρίου Mx Wash/Diluent Waschlösung/Verdünnungsreagenz Solution de lavage/dilution Solución de lavado/diluyente Soluzione di lavaggio/diluente Solução de Lavagem /Diluente Tvätt-/spädningslösning Vaske-/fortyndingsreagens Διάλυμα έκπλυσης/αραίωσης Whole Blood Primer Vollblut-Primer Sang total de conditionnement Cebador de sangre total Primer di sangue intero Iniciador de sangue total Helblodsprimer Fuldblodsprimer Εκκινητής ολικού αίματος iv Istruzioni per l uso L IT00

5 VARIANT II HbA 2 Indice Uso previsto...3 Sommario e spiegazione del test...3 Principio della procedura...4 Componenti del test...5 Ulteriori articoli, forniti da Bio-Rad...6 Articoli forniti separatamente da Bio-Rad...6 Ulteriori articoli richiesti, non forniti da Bio-Rad...6 Precauzioni/Avvertenze...6 Procedura...7 Raccolta dei campioni...8 Controllo di qualità...8 Ricostituzione del primer di sangue intero, ww...8 Ricostituzione dei calibratori, c...8 Tamponi (b, Mx) e cartuccia analitica (aa)...8 Controlli HbA 2 /HbF e HbA 1c...8 Preparazione dei campioni...9 Aggiornamento del metodo...9 Scelta del metodo...9 Installazione di una nuova cartuccia...10 Impostazione dell analisi...10 Ottimizzazione dell analisi...12 Interpretazione dei risultati...13 Determinazione delle emoglobine HbA 2, HbF e anomale...13 Intervallo dei valori previsti per HbA Intervallo dei valori previsti per HbF...13 Finestre di identificazione degli analiti - Metodo β-thal...14 Determinazione dell HbA 1c...14 Intervallo refertabile per l HbA 1c...14 Intervalli dell emoglobina A 1c...15 Intervallo di riferimento non diabetico...15 Finestre di identificazione degli analiti - Metodo HbA 1c...15 Formato del referto del campione...16 L IT00 Istruzioni per l uso 1

6 Caratteristiche delle prestazioni...25 Precisione...25 Precisione del metodo β-thal...25 Precisione del metodo HbA 1c...25 Linearità e recupero...26 Linearità e recupero per HbA Linearità e recupero per HbF...27 Linearità e recupero per HbA 1c...28 Interferenza dell A 1c labile...30 Campioni lipemici...31 Campioni itterici...32 Emoglobina carbamilata...32 Certificazione/tracciabilità per il materiale ed il metodo di riferimento...33 Limiti della procedura...34 Sopravvivenza eritrocitaria anormale...34 Diluizione dei campioni...34 HbA HbF...37 Varianti emoglobiniche...37 Informazioni sui marchi di fabbrica...38 Bibliografia Istruzioni per l uso L IT00

7 VARIANT II HbA 2 USO PREVISTO Il Bio-Rad VARIANT II HbA 2 è previsto per la determinazione delle emoglobine A 2, F ed A 1c in sangue umano intero, utilizzando il metodo della cromatografi a liquida ad alta prestazione (HPLC) a scambio ionico. Il Bio-Rad VARIANT II HbA 2 è previsto per l uso con il Bio-Rad VARIANT II Hemoglobin Testing System. Solo per uso diagnostico in vitro. SOMMARIO E SPIEGAZIONE DEL TEST Il VARIANT II HbA 2 esegue 500 test per la determinazione delle emoglobine A 2 ed F, e per l identifi cazione di emoglobine anomale, oppure 800 test per la determinazione dell emoglobina A 1c. Il VARIANT II HbA 2 comprende due diversi metodi. Metodo HbA 1c : un metodo da 3,5 minuti che permette la determinazione dell area percentuale della HbA 1c soltanto. Metodo β-thal : un metodo esteso da 6,5 minuti che permette la determinazione dell area percentuale delle emoglobine A 2, F ed A 1c. L utente può passare da un metodo all altro senza cambiare tamponi o cartucce e senza ricondizionare il sistema. Determinazione dell emoglobina glicata (HbA 1c ) - ll diabete mellito è una condizione caratterizzata da iperglicemia derivante dall incapacità dell organismo di utilizzare il glucosio ematico come fonte di energia. Nel diabete di tipo I, il pancreas non produce più insulina e pertanto il glucosio ematico non riesce ad entrare nelle cellule per essere utilizzato come fonte energetica. Nel diabete di tipo II, il pancreas non produce abbastanza insulina oppure il corpo non è in grado di usare correttamente l insulina. 1 Gli effetti diretti e indiretti dell iperglicemia sul sistema vascolare sono la fonte principale di morbilità e mortalità nel diabete sia di tipo I che di tipo II. Questi effetti includono complicazioni macrovascolari (coronaropatia, arteriopatia periferica e ictus) e complicazioni microvascolari (nefropatia, neuropatia e retinopatia da diabete). 2 Il diabete mellito colpisce all incirca il 7% della popolazione mondiale. 3 La terapia del diabete richiede il mantenimento a lungo termine di livelli di glicemia che siano il più possibile vicini alla normalità, al fi ne di ridurre al minimo il rischio di conseguenze vascolari sul lungo periodo. 4,5 Una singola misurazione a digiuno della glicemia è un indicatore delle condizioni appena trascorse (ore) del paziente, ma potrebbe non rispecchiare la condizione reale del controllo glicemico. 6,7 La misurazione dell emoglobina A 1c (HbA 1c ) ogni due o tre mesi è stata accettata come una misurazione del controllo glicemico nella cura e nel trattamento dei pazienti affetti da diabete mellito. L HbA 1c, la glicoemoglobina di interesse, viene formata in due fasi dalla glicazione non enzimatica dell HbA. La prima fase è rappresentata dalla formazione di una aldimina instabile (emoglobina A 1c labile o pre-a 1c ), una reazione reversibile fra il gruppo carbonilico del glucosio e la valina del terminale N sulla catena β dell emoglobina. La formazione dell emoglobina A 1c labile è direttamente L IT00 Istruzioni per l uso 3

8 proporzionale alla glicemia. Durante la circolazione dei globuli rossi, parte dell emoglobina A 1c labile è convertita chimicamente (riarrangiamento di Amadori) in modo da dare origine ad una chetoammina stabile, la HbA 1c. 8 La determinazione della HbA 1c con il VARIANT II HbA 2 è stata ottimizzata per ridurre al minimo le interferenze causate da varianti emoglobiniche, emoglobina A 1c labile ed emoglobina carbamilata. Determinazione di HbA 2 ed HbF, e identificazione di emoglobine anomale - Il sangue degli individui adulti contiene primariamente emoglobina A (HbA), una piccola percentuale di emoglobina A 2 (HbA 2 ) e tracce di emoglobina fetale (HbF). Le emoglobine anomale fanno parte di un gruppo di disturbi ereditari che vengono chiamati collettivamente le emoglobinopatie. Le emoglobinopatie sono il risultato di una sintesi difettosa delle catene globiniche che formano la molecola emoglobinica. Si può verifi care un difetto in due modi: sebbene le emoglobine anomale derivino dalla produzione di una catena globinica strutturalmente differente, le emoglobinopatie possono anche essere create dalla diminuita produzione di una catena globinica strutturalmente normale. In questa situazione, le catene α-globiniche e β-globiniche vengono sintetizzate in quantità diverse. La produzione non equilibrata di catene che ne risulta causa una produzione inadeguata di emoglobina normale e determina un eccesso della catena globinica prodotta normalmente, che forma un tetramero instabile. Le condizioni che insorgono da tale produzione non equilibrata della catena vengono chiamate sindromi talassemiche. I portatori di β-talassemia presentano di solito livelli di HbA 2 pari a 4 9% e livelli di HbF pari a 1 5%. 9 La determinazione di livelli di emoglobine A 2 ed F contemporaneamente elevati è diventata il mezzo più pratico per diagnosticare i portatori del gene della β-talassemia. 10 I metodi per la determinazione quantitativa dell emoglobina A 2 comprendono l elettroforesi e la cromatografi a di colonna a scambio anionico. 11,12 I metodi per la determinazione quantitativa dell emoglobina F comprendono l elettroforesi, la denaturazione degli alcali e l immunodiffusione radiale (RID). La cromatografi a liquida ad alta prestazione (HPLC), che può essere un metodo relativamente veloce e riproducibile, è stata utilizzata per la determinazione di varie emoglobine, compresa le emoglobine A 2 ed F PRINCIPIO DELLA PROCEDURA Il VARIANT II HbA 2 utilizza i principi della cromatografi a liquida ad alta prestazione (HPLC) a scambio ionico per la separazione automatica delle emoglobine normali e anomale e per la determinazione accurata delle emoglobine A 2, F ed A 1c in campioni di sangue intero, senza interferenza da parte di emoglobina A 1c labile, lipemia o variazioni di temperatura. I campioni vengono miscelati e diluiti automaticamente nella Stazione di campionamento VARIANT II Sampling Station (VSS) e quindi iniettati nella cartuccia analitica. Le pompe doppie della Stazione cromatografi ca VARIANT II Chromatographic Station (VCS) erogano nella cartuccia un gradiente di soluzione tampone programmato di forza ionica crescente: le emoglobine vengono separate sulla base delle rispettive interazioni ioniche con il materiale della cartuccia. 4 Istruzioni per l uso L IT00

9 VARIANT II HbA 2 Le emoglobine separate passano quindi attraverso la cella di fl usso del fotometro del fi ltro, dove vengono misurati i cambiamenti nei valori di assorbanza (415 nm); le variazioni di fondo vengono corrette da un ulteriore fi ltro a 690 nm. Il software VARIANT II Clinical Data Management (CDM ) consente di eseguire l elaborazione dei dati grezzi raccolti da ogni analisi. Per la taratura dei valori di HbA 2, HbF o HbA 1c calcolati viene usata una calibrazione a due livelli. Per ogni campione vengono generati dal CDM un referto del campione ed un cromatogramma. I picchi A2, F e A1c appaiono ombreggiati. L area A1c viene calcolata usando un algoritmo che usa una funzione gaussiana esponenzialmente modifi cata (EMG). COMPONENTI DEL TEST VARIANT II Dual Kit Reorder Pack (# ) (500 test HbA 2 /HbF oppure 800 test HbA 1c ) # Descrizione b1, Tampone 1, ml, tampone bis-tris/fosfato di sodio, contiene sodio azide (<0,05%) b2, Tampone 2, ml, tampone bis-tris/fosfato di sodio, contiene sodio azide (<0,05%) Mx, Soluzione di lavaggio/diluizione, ml, contiene sodio azide (<0,05%) β-thal cs, Set del calibratore β-thal, liofi lizzato, 2 livelli, 3 10 ml c1, 3 5,0 ml c2, emolisato di eritrociti umani liofi lizzati, contiene gentamicina, tobramicina ed EDTA come conservanti. Conservare a 2 8 C HbA 1c cs, Set del calibratore HbA 1c, liofi lizzato, 2 livelli, 3 5,0 ml c1, 3 5,0 ml c2, emolisato di eritrociti umani liofi lizzati, contiene gentamicina, trobramicina ed EDTA come conservanti. Conservare a 2 8 C xc, Diluente del calibratore, ml, contiene sodio azide come conservante. Conservare a 2 8 C aas, Set di cartucce analitiche, 2 set cad., contenente 1 aa a scambio cationico, 4,6 mm DI 30 mm ww, Primer di sangue intero, liofi lizzato, 1 1,0 ml, emolisato di eritrociti umani liofi lizzati, contiene gentamicina, tobramicina ed EDTA come conservanti. Conservare a 2 8 C. 2 prefi ltri, 0,5 µm 4 mm, per 400 iniezioni cad sv, Microprovette per campioni 1,5 ml, 1 100, con tappi perforabili , CD-ROM, contenente il completo VARIANT II Dual kit Method Software (V2_A1C_DUAL e V2_B-THAL_DU Method) NOTA: i reattivi sono stabili fi no alla data di scadenza quando vengono conservati alla temperatura indicata. A meno che non venga specifi cato altrimenti, conservare a temperatura ambiente (15 30 C). Non usare i reattivi dopo la data di scadenza, né miscelare lotti diversi di reattivi. L IT00 Istruzioni per l uso 5

10 ULTERIORI ARTICOLI, FORNITI DA BIO-RAD # Descrizione VARIANT II Hemoglobin Testing System, 220 V 553 Lyphochek Hemoglobin A 2 Control, 2 2 0,5 ml 740 Lyphochek Diabetes Control, 3 2 0,5 ml 171 Liquichek Diabetes Control, Level 1, 6 1,0 ml 172 Liquichek Diabetes Control, Level 2, 6 1,0 ml 173 Liquichek Diabetes Control, Level 3, 6 1,0 ml 172X Liquichek Diabetes Control, Trilevel MiniPak, 3 1,0 ml filtri sostitutivi in polimero Adattatori per microprovette, 1 10 ARTICOLI FORNITI SEPARATAMENTE DA BIO-RAD # Descrizione aas, Serie di cartucce analitiche, contenente ciascuna: 1 aa a scambio cationico, 4,6 mm DI 30 mm ww, Primer di sangue intero, liofi lizzato, 1 1,0 ml, emolisato di eritrociti umani liofi lizzati, contiene gentamicina, tobramicina ed EDTA come conservanti. Conservare a 2 8 C. 2 prefi ltri, 0,5 µm 4 mm, per 400 iniezioni cad sv, Microprovette per campioni 1,5 ml, 1 100, con tappi perforabili ULTERIORI ARTICOLI RICHIESTI, NON FORNITI DA BIO-RAD Pipette, 5 µl, 0,5 ml, 1 ml, 5 ml, 10 ml Acqua deionizzata Guanti monouso PRECAUZIONI/AVVERTENZE 1. Leggere bene e familiarizzarsi con il contenuto delle Istruzioni per l uso prima di utilizzare il test per la prima volta. 2. Tutto il personale che esegue il test deve indossare le protezioni di sicurezza standard di laboratorio (occhiali protettivi, camice, guanti ecc.). 3. Tutti i materiali di riferimento (per esempio calibratori e controlli) ed i campioni dei pazienti vanno considerati come materiale potenzialmente a rischio biologico e devono essere manipolati secondo le istruzioni delle normative sulla sicurezza locali. Dopo l uso, strumenti e apparecchiature potrebbero essere contaminati. Aderire alle direttive sulla sicurezza delle normative locali. 6 Istruzioni per l uso L IT00

11 VARIANT II HbA 2 4. Alcuni dei reattivi sopra indicati contengono sodio azide che potrebbe interagire con le tubature in rame o piombo e dare origine ad azidi metalliche potenzialmente esplosive. Aderire alle direttive sulla sicurezza delle normative locali. Non mescolare con acidi! 5. Per dettagli completi sulla manipolazione sicura dei reattivi, consultare la scheda di sicurezza sul prodotto (Material Safety Data Sheet, MSDS). 6. I materiali di scarto contengono campioni e materiali di riferimento (per esempio calibratori e controlli) potenzialmente infettivi, e sostanze potenzialmente pericolose derivanti dai reattivi. Manipolare e smaltire i materiali di scarto secondo le istruzioni delle direttive sulla sicurezza delle normative locali. 7. Il materiale usato nella fabbricazione di calibratore e controlli è stato testato mediante metodi approvati ed è risultato non reattivo per l antigene di superfi cie dell epatite B (HBsAg), per gli anticorpi contro l epatite C (HCV), e per il virus HIV-1, HIV-2 e l antigene HIV (p24). Nessun metodo di analisi può offrire una garanzia assoluta che i prodotti contenenti materiali di origine umana siano privi di questi e di altri agenti infettivi. Questo prodotto potrebbe contenere anche altro materiale di origine umana per il quale non vi sono test approvati. Secondo le buone pratiche di laboratorio, tutti i materiali di origine umana devono essere considerati potenzialmente infettivi per il virus dell epatite B (HBV), epatite C (HCV), HIV-1, HIV-2, HTLV-I, HTLV-II e tutti gli altri agenti infettivi, perciò si raccomanda di trattare i calibratori e i controlli con le medesime precauzioni adottate per i campioni dei pazienti. 8. I tappi del fl acone di calibratore contengono gomma naturale secca. 9. Nessuno degli articoli disponibili presso Bio-Rad va riciclato dopo aver eseguito il test, a meno che non venga specifi cato espressamente. PROCEDURA Si prega di leggere attentamente e nella loro interezza le Istruzioni per l uso prima di eseguire il test per la prima volta. Per garantire delle prestazioni adeguate per questo prodotto, attenersi al protocollo qui specifi cato. Prima dell esecuzione del dosaggio riportare a temperatura ambiente (15 30 C) tutti i reattivi, i calibratori, i controlli ed i campioni dei pazienti eccetto il diluente del calibratore. A meno che non venga indicato altrimenti in queste Istruzioni per l uso, i reattivi non aperti sono stabili per un massimo di 12 settimane alle temperature di conservazione indicate. Questa stabilità può essere assicurata solo se si evita la contaminazione dei reattivi. Per l assegnazione dei valori e per gli intervalli, fare riferimento agli inserti acclusi nel lotto del calibratore e controllo in uso. Indossare guanti durante le procedure di preparazione dei reattivi e dei campioni. Non usare i reattivi dopo la data di scadenza, né miscelare lotti diversi di reattivi. Non usare controlli o calibratori se il pellet liofi lizzato ha un colore marrone o se il fl acone è rotto. Se vengono ottenuti risultati anomali, rivolgersi all assistenza tecnica Bio-Rad. Aprire i fl aconi con cautela. I reattivi liofi lizzati vengono imbottigliati a pressione ridotta. Si raccomanda un analisi simultanea dei controlli (per esempio Lyphochek Diabetes Control e Lyphochek Hemoglobin A 2 Control). L IT00 Istruzioni per l uso 7

12 Raccolta dei campioni Il campione di sangue intero va raccolto in una provetta di raccolta a vuoto contenente EDTA come anticoagulante. I campioni del paziente sono stabili per 7 giorni se conservati a 2 8 C. Controllo di qualità In conformità alle buone pratiche di laboratorio, includere in ogni analisi campioni di controllo basso e alto. Se non si ottengono i valori di controllo attesi, è necessario ripetere l analisi. Ricostituzione del primer di sangue intero, ww 1. Quando si installa una nuova cartuccia analitica, usare un aliquota nuova di primer di sangue intero. NOTA: per assicurare la corretta durata della cartuccia analitica, usare il primer solo prima dell uso iniziale della cartuccia stessa. 2. Aprire il fl acone con cautela e preparare il primer di sangue intero dispensando 1,0 ml di acqua deionizzata nel fl acone. 3. Lasciare riposare per 10 minuti a temperatura ambiente (15 30 C); agitare delicatamente con movimento rotatorio per sciogliere la miscela e verifi care che risulti omogenea. 4. Il primer di sangue intero ricostituito è stabile per 1 giorno se conservato a 2 8 C, ed è pronto all uso. 5. Trasferire 1,0 ml di primer di sangue intero in una microprovetta per campioni da 1,5 ml etichettata. Ricostituzione dei calibratori, c Ricostituire e conservare il calibratore HbA 1c e il calibratore β-thal come indicato nell inserto del VARIANT II HbA 2 Calibrator Set. Tamponi (b, Mx) e cartuccia analitica (aa) Per installare o cambiare tampone 1, tampone 2, soluzione di lavaggio/diluizione, prefi ltro e/o cartuccia analitica, attenersi alle procedure descritte nel Manuale operativo del VARIANT II, Sezione 3. Controlli HbA 2 /HbF e HbA 1c In conformità alle buone pratiche di laboratorio, includere in ogni analisi campioni di controllo basso e alto. Usare un controllo diabete per il metodo HbA 1c e un controllo emoglobina A 2 per il metodo β-thal. Ricostituire e conservare i controlli in base alle indicazioni dell inserto della confezione del produttore. I controlli Bio-Rad Lyphochek vanno diluiti 1:200 prima dell analisi. In una microprovetta da 1,5 ml contrassegnata, pipettare 1,0 ml di soluzione di lavaggio/diluizione e poi 5 µl del controllo ricostituito. Tappare ogni fl acone dei controlli e mescolare bene. I controlli Bio-Rad Liquichek Diabetes vanno diluiti 1:200 prima dell analisi. In una microprovetta da 1,5 ml contrassegnata, pipettare 1,0 ml di soluzione di lavaggio/diluizione e poi 5 µl del controllo. Tappare ogni fl acone dei controlli e mescolare bene. 8 Istruzioni per l uso L IT00

13 VARIANT II HbA 2 NOTA: i controlli diluiti non devono restare a temperatura ambiente (15 30 C, per es. nella Stazione di campionamento VARIANT II) per più di un ora. Preparazione dei campioni 1. Non è richiesta alcuna preparazione del campione. Le provette dei campioni da 16 mm vengono caricate in ordine casuale nei rack portacampioni del VARIANT II e quindi sul nastro trasportatore della Stazione di campionamento VARIANT II. Utilizzare gli speciali inserti dei rack per provette da 13 mm e gli speciali adattatori per le provette pediatriche da 10 mm. 2. Se il campione è in una provetta di dimensione/tipo anormale o se la provetta contiene meno di 500 µl di campione, sarà necessario prediluire il campione. Prima di pipettare, miscelare accuratamente il campione invertendo delicatamente la provetta. Per la prediluizione pipettare, in una microprovetta per campioni da 1,5 ml contrassegnata, 1,0 ml di soluzione di lavaggio/diluizione e poi 5 µl del campione di sangue intero. Tappare la microprovetta del campione e mescolare bene. Per i campioni prediluiti, utilizzare un adattatore per microprovette. Aggiornamento del metodo 1. Quando si cambiano i lotti di reattivi, aggiornare i parametri specifi ci del lotto del VARIANT II HbA Inserire il CD-ROM dell attuale pacchetto di riordinazione nell unità CD-ROM. 3. Selezionare <Setup> (Impostazione) <Update Kit> (Kit di aggiornamento) <Unità CD-ROM>. 4. Selezionare il fi le V2_A1c_DUAL.TSS per caricare il metodo V2_A1c_DUAL (metodo HbA 1c ). Fare clic su <OK> per avviare l aggiornamento. 5. Selezionare il fi le V2_B-THAL_DU.TSS per caricare il metodo V2_B-THAL_DU (metodo β-thal). Fare clic su <OK> per avviare l aggiornamento. Scelta del metodo 1. Sono 2 i metodi disponibili sull HbA 2 : V2_A1c_DUAL per l analisi della HbA 1c V2_B-THAL_DU per l analisi di HbA 2, HbF, emoglobine anomale e HbA 1c in presenza di varianti emoglobiniche. L utente può passare da un metodo all altro senza cambiare tamponi o cartucce e senza ricondizionare il sistema. 2. Per caricare un metodo, selezionare <Setup> Select New Test: <nome metodo>. NOTA: quando si passa ad un metodo differente che richiede un cambio di reattivi, il CDM chiede all utente di installare nuovi reattivi e una nuova cartuccia analitica ed esegue un lavaggio automatico del sistema di 20 minuti. L IT00 Istruzioni per l uso 9

14 Installazione di una nuova cartuccia Prima dell analisi iniziale, occorre condizionare le nuove cartucce analitiche. Assicurarsi di usare la cartuccia analitica solo nella direzione di fl usso indicata dalla freccia sulla cartuccia stessa. 1. Avviare il software CDM. 2. Disporre una microprovetta per campioni con primer di sangue intero ricostituito (1,0 ml) in un adattatore per microprovette con etichetta PRIMER. 3. Disporre due microprovette per campioni con tampone 2 (1,0 ml) in adattatori per microprovetta etichettati BLANK (Vuoto). Disporre gli adattatori per microprovetta in un rack per campioni nell ordine seguente: Pos. N. 1 Primer di sangue intero Pos. N. 2 Tampone 2 Pos. N. 3 Tampone 2 Pos. N. 4 Provetta STOP 4. Selezionare <RUN> (Esegui) <WORKLIST> (Lista di lavoro) <START/STOP> (Avvia/Stop). 5. Fare clic su <START> per dare avvio alla seduta analitica. 6. Una volta terminata la seduta, la cartuccia analitica è pronta ad iniziare le sedute analitiche. NOTA: a partire dalla versione 5.1 del software CDM, è disponibile un opzione di riempimento automatico (Automatic Priming). Questa opzione permette di eseguire l analisi di rastrelliere contenenti calibratori, controlli e campioni pazienti nella stessa seduta della rastrelliera di riempimento senza l intervento dell operatore. Per usare questa opzione, impostare le rastrelliere di riempimento e calibrazione esattamente come specifi cato in questo manuale di istruzioni (inclusi adattatori per microprovette adeguatamente etichettati BLANK e STOP). Selezionare la casella di spunta Automatic Priming (Riempimento automatico) nella fi nestra di dialogo Worklist Control (Controllo della lista di lavoro) prima di avviare la seduta. Impostazione dell analisi La calibrazione va eseguita: dopo che si passa da un metodo all altro; dopo che si installa una nuova cartuccia analitica; dopo ciascuna 100esima 150esima iniezione od ogni settimana (quando si esegue il programma β-thal). NOTA: la frequenza di calibrazione dipende dal singolo laboratorio. 1. Preparare i campioni come descritto nella sezione Preparazione dei campioni. 10 Istruzioni per l uso L IT00

15 VARIANT II HbA 2 2. Inserire una microprovetta vuota, i calibratori ed i controlli sulla Stazione di campionamento VARIANT II. Usare gli speciali adattatori per microprovette da 1,5 ml con calibratori e controlli. Gli adattatori devono avere i codici a barre che identifi cano il tipo di campione: BLANK (Vuoto) CALIBRATOR Level 1 (Calibratore Livello 1) CALIBRATOR Level 2 (Calibratore Livello 2) CONTROL Level 1 (Controllo Livello 1) CONTROL Level 2 (Controllo Livello 2) NOTA: assicurarsi sempre di usare gli appropriati calibratori (calibratore β-thal e calibratore HbA 1c, rispettivamente). Per un vuoto, disporre una microprovetta per campioni con 1,0 ml di calibratore oppure un campione del paziente prediluito in un adattatore per microprovetta con un etichetta con codice a barre BLANK. Ordine dei campioni per la calibrazione: Campione N. Reattivo 1 Vuoto 2 Calibratore Livello 1 3 Calibratore Livello 2 4 Controllo, Livello 1 5 Controllo, Livello 2 da 6 a N Campioni paziente N + 1 Controllo, Livello 1 N + 2 Controllo, Livello 2 N + 3 Provetta STOP NOTA: Se il sistema non è stato usato per più di un giorno, eseguire il vuoto tre volte quando si usa il metodo β-thal. N si riferisce all ultimo numero del paziente incluso nell analisi. I controlli diluiti non devono restare a temperatura ambiente (15 30 C, per es. nella Stazione di campionamento VARIANT II) per più di un ora. L IT00 Istruzioni per l uso 11

16 Ordine dei campioni senza calibrazione: Campione N. Reattivo 1 Vuoto 2 Controllo, Livello 1 3 Controllo, Livello 2 da 4 a N Campioni paziente N + 1 Controllo, Livello 1 N + 2 Controllo, Livello 2 N + 3 Provetta STOP 3. Avviare la seduta selezionando <RUN> <WORKLIST> <START/STOP>. 4. Fare clic su <START> per dare avvio alla seduta analitica. 5. Fare riferimento alla Sezione 4 del Manuale operativo del VARIANT II per ulteriori informazioni. 6. Dopo l analisi dei calibratori, vengono calcolate automaticamente la pendenza e l intercetta della curva di calibrazione per le emoglobine A 2, F e A 1c. La pendenza e l intercetta sono utilizzate nel calcolo della percentuale di area delle emoglobine A 2, F ed A 1c per tutte le successive analisi nella seduta. Se i parametri della calibrazione non rientrano negli intervalli determinati, il sistema stampa un messaggio di errore. 7. Dopo aver analizzato l ultimo campione, il sistema esegue automaticamente un gradiente di fi ne seduta ed entra nello stato READY (Pronto), che permette di avviare immediatamente un altra seduta analitica. Se non viene avviata un altra seduta entro 30 minuti, il sistema entra nello stato INACTIVE (Inattivo). OTTIMIZZAZIONE DELL ANALISI Per garantire risultati accettabili attenersi alle seguenti linee guida. 1. I picchi sono defi niti correttamente. 2. Riempire le nuove cartucce analitiche con primer di sangue intero. Riempire ogni cartuccia analitica solo prima dell uso iniziale. La seduta di analisi che segue la procedura di condizionamento deve includere almeno campioni pazienti. Non riempire di nuovo la cartuccia analitica dopo questa procedura. 3. Se il sistema non è stato usato per più di un giorno, eseguire il vuoto tre volte quando si usa il metodo β-thal. Raccomandazione: quando non si è usato il sistema per un lungo periodo, iniziare con il metodo HbA 1c. 4. Per garantire un adeguato ciclo di vita della cartuccia analitica, sostituire il prefi ltro dopo 400 iniezioni. Il prefi ltro va sostituito se il suo alloggiamento è stato aperto. Assicurarsi di usare la cartuccia analitica solo nella direzione di fl usso indicata dalla freccia sulla cartuccia stessa. Dopo aver cambiato il prefi ltro, iniziare con il metodo HbA 1c. 12 Istruzioni per l uso L IT00

17 VARIANT II HbA 2 5. L area totale di ogni analisi dovrebbe oscillare fra 1,5 e 3,5 milioni di µvolt secondo. I risultati non vanno riportati se l area è al di fuori di questo intervallo. 6. Qualsiasi campione con >15% o >140 mmol/mol di HbA 1c va sospettato di presentare una variante emoglobinica Qualsiasi campione con un area complessiva di 60% nelle fi nestre E (solo metodo HbA 1c ), S e C va sospettato di presentare una variante omozigotica o una variante in combinazione con un fenotipo β-talassemia. Per questi campioni non refertare il risultato HbA 1c. 18 INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI Determinazione delle emoglobine HbA 2, HbF e anomale Ogni laboratorio dovrà determinare i valori normali per conformarsi alle caratteristiche della popolazione analizzata. I seguenti dati potranno essere usati come punto di riferimento fi no a quando il laboratorio non avrà analizzato un numero di campioni suffi ciente per poter determinare i propri intervalli per i valori normali. Intervallo dei valori previsti per HbA 2 L intervallo normale per l HbA 2 in genere è compreso fra l 1,7% e il 3,2% dell emoglobina totale mentre le condizioni di β-talassemia in eterozigosi presentano livelli di HbA 2 fra il 4,0% e il 9,0%. Il VARIANT II HbA 2 è lineare entro valori compresi fra 1,2% e 16% di HbA 2, e può misurare in modo costante e riproducibile livelli di HbA 2 compresi fra l 1,4% e il 13% circa (intervallo refertabile). Per poter essere coerenti con gli intervalli refertabili stabiliti, i valori di HbA 2 che sono inferiori all intervallo refertabile vanno refertati come inferiori a 1,4%. Intervallo dei valori previsti per HbF L intervallo normale per l HbF in genere è inferiore all 1% dell emoglobina totale. Le condizioni di eterozigosi e omozigosi della β-talassemia generano intervalli di HbF rispettivamente compresi fra 1% e 5% e fra 80% e 100%. Il VARIANT II HbA 2 è lineare entro valori compresi fra 0,7% e 65% di HbF, e può misurare in modo costante e riproducibile livelli di HbF compresi fra l 1% e il 40% circa (intervallo refertabile). Per poter essere coerenti con gli intervalli refertabili stabiliti, i valori di HbF che sono inferiori all intervallo refertabile vanno refertati come inferiori a 1,0%. I valori che superano l intervallo refertabile per l HbF vanno refertati come superiori al 40%. HbA 2 HbF n Media 2,8% 0,53% Intervallo di sicurezza del 95% 2,4 3,2% 0,1 1,8% Intervallo 2,4 3,2% 0,1 2,1% Tabella 1. Intervalli normali per HbA 2 e HbF L IT00 Istruzioni per l uso 13

18 Finestre di identificazione degli analiti - Metodo β-thal Le fi nestre di identifi cazione degli analiti hanno lo scopo di assistere il laboratorio nell interpre ta zione delle emoglobine normali e anomale rilevate nei campioni del paziente. Le fi nestre rappresentano intervalli di tempo stabiliti nei quali è stata osservata l eluizione di varianti comuni mediante il metodo β-thal del VARIANT II HbA 2. Il tempo di ritenzione è il centro della fi nestra, e viene misurato dal momento dell iniezione del campione al punto massimo di ciascun picco. La banda è pari a metà ampiezza della fi nestra. Tempo (min.) Nome del picco Banda (minuti) Finestra (min.) 0,22 A1a 0,10 0,12 0,32 0,26 A1b 0,09 0,17 0,35 0,48 F 0,10 0,38 0,58 0,77 LA1c 0,07 0,70 0,84 0,93 A1c 0,10 0,83 1,03 1,49 P3 0,10 1,39 1,59 1,73 A0 0,15 1,58 1,88 2,91 A2 0,10 2,81 3,01 3,45 S-WINDOW 0,10 3,35 3,55 4,45 C-WINDOW 0,10 4,35 4,55 Tabella 2. Finestre di identifi cazione degli analiti con il metodo β-thal NOTA: la tabella viene presentata come esempio. Fare riferimento ai parametri del metodo attuale per informazioni specifi che sul lotto. Si può creare un adattamento del tempo di ritenzione (per esempio per picchi molto elevati) modifi cando la tabella di identifi cazione dei picchi nel software CDM. Procedere come segue. 1. Selezionare <SETUP> <TEST> <PEAK TABLE> (Tabella dei picchi) <ALLOW TABLE EDITING> (Consenti modifi ca tabella). 2. Digitare Password e confermare con <OK>. 3. Regolare i valori nella colonna Time (min.) [Tempo (min.)]. I tempi di ritenzione per le fi nestre A2 e quelle S e C possono essere cambiati fi no a 0,1 min.; tutti gli altri picchi possono essere modifi cati fi no a 0,05 min. I tempi di ritenzione per LA1c e A1c sono collegati e devono essere modifi cati contemporaneamente con valori identici. 4. Selezionare <Lock Tables> (Blocca tabelle). Il VARIANT II è ora pronto per l analisi. Determinazione dell HbA 1c Intervallo refertabile per l HbA 1c I seguenti intervalli refertabili sono stati stabiliti in base ai dati presentati in Linearità e recupero per HbA 1c. Se il risultato HbA 1c non rientra nell intervallo refertabile, non va refertato. 14 Istruzioni per l uso L IT00

19 VARIANT II HbA 2 Intervallo refertabile per il metodo HbA 1c Intervallo refertabile per il metodo β-thal NGSP - % di HbA 1c 1,6 19,3 3,1 19,1 IFCC - mmol/mol di HbA 1c Intervalli dell emoglobina A 1c I seguenti intervalli di HbA 1c possono essere usati per l interpretazione dei risultati; tuttavia, per poter valutare il grado di controllo della glicemia, vanno presi in consi de ra zione fattori quali la durata del diabete, l ade renza alla terapia e l età del paziente. Questi valori si riferiscono a soggetti non in gravi danza. L azione consigliata dipende dalla cir co stanze del singolo paziente. Tali azioni possono com pren dere un educa zione di livello avan zato nell auto controllo del diabete, una gestione congiunta con l equipe diabe to lo gica, una visita specia lis tica da un endocrino logo, un cam bia mento nella terapia farma cologica, l inizio o l aumento dell auto moni toraggio della glicemia o un contatto più frequente con il paziente. Emoglobina A 1c (%) Grado di controllo del glucosio > 8 Azione consigliata < 7 Obiettivo < 6 Livello non diabetico Rischio elevato di sviluppare complicazioni a lungo termine, quali retinopatia, nefropatia, neuropatia e cardiopatia. L azione consigliata dipende dalle circostanze del singolo paziente. Un certo pericolo di reazione ipoglicemica nei diabetici di tipo I. Alcuni soggetti intolleranti al glucosio e diabetici sub-clinici possono presentare valori di HbA 1c (elevati) in quest area. Intervallo di riferimento non diabetico Il sondaggio Third National Health and Nutrition Examination Survey negli Stati Uniti ha incluso soggetti di almeno 20 anni con valori normali di glucosio plasmatico a digiuno e senza precedente diagnosi di diabete. I valori dell HbA 1c sono stati misurati con il Bio-Rad DIAMAT System. La media ponderata dell HbA 1c per pazienti con valori normali di glucosio plasmatico a digiuno (n = 5.694) è stata del 5,17% con una deviazione standard dello 0,45%. I limiti di confi denza del 95% (media ± 2 DS) per l HbA 1c sono stati del 4,27 6,07%. 20 Poiché il VARIANT II HbA 2 è stato certifi cato dall NGSP, questo intervallo di riferimento può essere usato come punto di riferimento fi no a quando il laboratorio non avrà analizzato un numero di campioni suffi ciente per determinare i propri intervalli di riferimento non diabetici e diabetici rappresentativi della popolazione regionale analizzata. Finestre di identificazione degli analiti - Metodo HbA 1c Le fi nestre di identifi cazione degli analiti hanno lo scopo di assistere il laboratorio nell interpre ta zione delle emoglobine normali e anomale rilevate nei campioni del paziente. Le fi nestre rappresentano intervalli di tempo stabiliti nei quali è stata osservata l eluizione di varianti L IT00 Istruzioni per l uso 15

20 comuni mediante il metodo HbA 1c del VARIANT II HbA 2. Il tempo di ritenzione è il centro della fi nestra, e viene misurato dal momento dell iniezione del campione al punto massimo di ciascun picco. La banda è pari a metà ampiezza della fi nestra. Tempo (min.) Nome del picco Banda (minuti) Finestra (min.) 0,15 A1a 0,06 0,09 0,21 0,24 A1b 0,10 0,14 0,34 0,40 F 0,10 0,30 0,50 0,69 LA1c 0,08 0,61 0,77 0,85 A1c 0,10 0,75 0,95 1,52 P3 0,07 1,45 1,59 1,64 A0 0,07 1,57 1,71 1,76 E-WINDOW 0,06 1,70 1,82 1,90 S-WINDOW 0,08 1,82 1,98 2,03 C-WINDOW 0,10 1,93 2,13 Tabella 3. Finestre di identifi cazione degli analiti con il metodo HbA 1c NOTA: la tabella viene presentata come esempio. Fare riferimento ai parametri del metodo attuale per informazioni specifi che sul lotto. Si può creare un adattamento del tempo di ritenzione (per esempio per picchi molto elevati) modifi cando la tabella di identifi cazione dei picchi nel software CDM. Procedere come segue. 1. Selezionare <SETUP> <TEST> <PEAK TABLE> <ALLOW TABLE EDITING>. 2. Digitare Password e confermare con <OK>. 3. Regolare i valori nella colonna Time (min.) [Tempo (min.)]. I tempi di ritenzione possono essere cambiati fi no a 0,05 min. I tempi di ritenzione per LA1c e A1c sono collegati e devono essere modifi cati contemporaneamente di valori identici. 4. Selezionare <Lock Tables>. Il VARIANT II è ora pronto per l analisi. Formato del referto del campione I seguenti esempi di referti dei campioni includono sia le unità IFCC che quelle NGSP per l HbA 1c. A cominciare con la versione 5.1 del software CDM, le unità di referto per i risultati standardizzati HbA 1c possono essere selezionate nella fi nestra di dialogo Setup/Configuration/HbA1c Units Settings. Per le informazioni in merito, consultare il Manuale operativo per il software CDM 5.1, Sezione 3.2. I seguenti cromatogrammi vogliono essere di ausilio nell interpretazione dei risultati. 16 Istruzioni per l uso L IT00

21 VARIANT II HbA 2 Bio-Rad CDM System CDM 5.1 VII Instrument PATIENT REPORT V2_B-THAL_DU Patient Data Analysis Data Sample ID: Analysis Performed: 21/07/ :33:52 Patient ID: Injection Number: 91 Name: Run Number: 3 Physician: Rack ID: Sex: Tube Number: 8 DOB: Report Generated: 28/07/ :59:40 Comments: Operator ID: IFCC NGSP Retention Peak Peak Name mmol/mol % Area % Time (min) Area Unknown Unknown A1a A1b F LA1c A1c P Ao A F Concentration = 0.2 % HbA1c (IFCC) = 34 mmol/mol HbA1c (NGSP) = 5.3 % A2 Concentration = 2.7 % Analysis comments: Total Area: 2,198, % HbA F A1c A Time (min.) Figura 1. Campione non diabetico (normale) (Metodo β-thal) L IT00 Istruzioni per l uso 17

22 Bio-Rad CDM System CDM 5.1 VII Instrument PATIENT REPORT V2_B-THAL_DU Patient Data Analysis Data Sample ID: Analysis Performed: 21/07/ :59:24 Patient ID: Injection Number: 113 Name: Run Number: 3 Physician: Rack ID: 0004 Sex: Tube Number: 10 DOB: Report Generated: 27/07/ :16:45 Comments: Operator ID: IFCC NGSP Retention Peak Peak Name mmol/mol % Area % Time (min) Area Unknown Unknown A1a A1b F LA1c A1c 68* 8.4* Unknown P Ao A *Values outside of expected ranges 2,122,242 F Concentration = 0.8 % HbA1c (IFCC) = 68* mmol/mol HbA1c (NGSP) = 8.4* % A2 Concentration = 2.4 % Analysis comments: % HbA F A1c A Time (min.) Figura 2. Campione diabetico (Metodo β-thal) 18 Istruzioni per l uso L IT00

23 VARIANT II HbA 2 Figura 3. Campione con HbS e HbF elevata (Metodo β-thal) L IT00 Istruzioni per l uso 19

24 Bio-Rad CDM System CDM 5.1 VII Instrument PATIENT REPORT V2_B-THAL_DU Patient Data Analysis Data Sample ID: Analysis Performed: 21/07/ :27:44 Patient ID: Injection Number: 81 Name: Run Number: 3 Physician: Rack ID: 0010 Sex: Tube Number: 8 DOB: Report Generated: 27/07/ :18:01 Comments: Operator ID: IFCC NGSP Retention Peak Peak Name mmol/mol % Area % Time (min) Area Unknown Unknown A1a A1b F LA1c A1c 47* 6.4* P Ao A * *Values outside of expected ranges 2,052,795 F Concentration = 0.8 % HbA1c (IFCC) = 47* mmol/mol HbA1c (NGSP) = 6.4* % A2 Concentration = 5.2* % Analysis comments: % HbA F A1c A Time (min.) Figura 4. Campione di β-talassemia (Metodo β-thal) 20 Istruzioni per l uso L IT00

25 VARIANT II HbA 2 Bio-Rad CDM System CDM 5.1 VII Instrument PATIENT REPORT V2_A1C_DUAL Patient Data Analysis Data Sample ID: Unknown-2-48 Analysis Performed: 21/05/ :05:38 Patient ID: Injection Number: 48 Name: Run Number: 6 Physician: Rack ID: 0004 Sex: Tube Number: 6 DOB: Report Generated: 07/06/ :43:06 Comments: Operator ID: IFCC NGSP Retention Peak Peak Name mmol/mol % Area % Time (min) Area A1a A1b F LA1c A1c Ao Total Area: 2,229,385 HbA1c (IFCC) = 31 mmol/mol HbA1c (NGSP) = 5.0 % Analysis comments: %A1c A1c Time (min.) Figura 5. Campione non diabetico (normale) (Metodo HbA 1c ) L IT00 Istruzioni per l uso 21

26 Bio-Rad CDM System CDM 5.1 VII Instrument PATIENT REPORT V2_A1C_DUAL Patient Data Analysis Data Sample ID: Unknown-2-87 Analysis Performed: 09/06/ :59:08 Patient ID: Injection Number: 87 Name: Run Number: 11 Physician: Rack ID: Sex: Tube Number: 4 DOB: Report Generated: 11/06/ :32:32 Comments: Operator ID: IFCC NGSP Retention Peak Peak Name mmol/mol % Area % Time (min) Area Unknown A1a A1b F LA1c A1c 78* 9.2* Ao *Values outside of expected ranges 1,765,186 HbA1c (IFCC) = 78* mmol/mol HbA1c (NGSP) = 9.2* % Analysis comments: %A1c A1c Figura 6. Campione diabetico (Metodo HbA 1c ) Time (min.) 22 Istruzioni per l uso L IT00

27 VARIANT II HbA 2 Bio-Rad CDM System CDM 5.1 VII Instrument PATIENT REPORT V2_A1C_DUAL Patient Data Analysis Data Sample ID: Unknown-2-50 Analysis Performed: 21/05/ :12:47 Patient ID: Injection Number: 50 Name: Run Number: 6 Physician: Rack ID: 0004 Sex: Tube Number: 8 DOB: Report Generated: 07/06/ :43:21 Comments: Operator ID: IFCC NGSP Retention Peak Peak Name mmol/mol % Area % Time (min) Area Unknown A1a A1b F LA1c A1c Ao S-Window Total Area: 2,828,524 HbA1c (IFCC) = 38 mmol/mol HbA1c (NGSP) = 5.6 % Analysis comments: %A1c A1c S-Window Figura 7. Campione con HbS (Metodo HbA 1c ) Time (min.) L IT00 Istruzioni per l uso 23

28 Bio-Rad CDM System CDM 5.1 VII Instrument PATIENT REPORT V2_A1C_DUAL Patient Data Analysis Data Sample ID: Unknown-2-52 Analysis Performed: 21/05/ :19:54 Patient ID: Injection Number: 52 Name: Run Number: 6 Physician: Rack ID: 0004 Sex: Tube Number: 10 DOB: Report Generated: 07/06/ :43:30 Comments: Operator ID: IFCC NGSP Retention Peak Peak Name mmol/mol % Area % Time (min) Area Unknown A1a A1b F LA1c A1c 48* 6.5* Ao S-Window C-Window *Values outside of expected ranges 2,434,358 HbA1c (IFCC) = 48* mmol/mol HbA1c (NGSP) = 6.5* % Analysis comments: %A1c A1c S-Window 1.91 C-Window Figura 8. Campione con HbC (Metodo HbA 1c ) Time (min.) 24 Istruzioni per l uso L IT00

29 VARIANT II HbA 2 CARATTERISTICHE DELLE PRESTAZIONI Si noti che tutti i dati sulle prestazioni e gli intervalli di riferimento per l HbA 1c in queste Istruzioni per l uso sono riportati in valori NGSP. Precisione Precisione del metodo β-thal La precisione del metodo β-thal del Bio-Rad VARIANT II HbA 2 è stata valutata in uno studio basato sulle linee guida NCCLS EP5-A Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices (Valutazione delle prestazioni di precisione dei dispositivi di chimica clinica). In questo studio sono state eseguite ogni giorno 2 analisi in un periodo di 20 giornate lavorative. In ogni seduta di analisi, sono state analizzate in doppio aliquote di campioni con valori bassi, medi e alti. I dati dello studio di precisione vengono riassunti nella seguente tabella. Campione basso Campione medio Campione alto Campione molto alto HbA 1c Valore medio [HbA 1c %] 5,64 8,11 11,53 Nell analisi [CV %] 0,89 1,00 0,41 Fra i giorni [CV %] 4,10 3,15 1,47 Fra le analisi [CV %] 1,66 1,95 0,92 Precisione totale [CV %] 4,51 3,84 1,78 HbF Valore medio [HbF %] 1,47 5,01 10,64 34,89 Nell analisi [CV %] 1,86 0,55 0,58 0,94 Fra i giorni [CV %] 2,38 1,20 1,49 2,05 Fra le analisi [CV %] 3,04 0,77 0,61 2,00 Precisione totale [CV %] 4,29 1,53 1,71 3,01 HbA 2 Valore medio [HbA 2 %] 2,64 4,09 6,61 Nell analisi [CV %] 2,47 1,19 0,76 Fra i giorni [CV %] 1,43 1,74 0,95 Fra le analisi [CV %] 0,85 2,64 1,61 Precisione totale [CV %] 2,98 3,38 2,01 Tabella 4. Precisione del metodo β-thal Precisione del metodo HbA 1c La precisione del metodo HbA 1c del Bio-Rad VARIANT II HbA2 è stata valutata in uno studio basato sulle linee guida NCCLS EP5-A Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices (Valutazione delle prestazioni di precisione dei L IT00 Istruzioni per l uso 25